Простой Анализ для количественного определения социального избегания у Дрозофилы

Цель этой процедуры состоит в том, чтобы количественно оценить реакцию мух на социальный сигнал, излучаемый людьми, испытывающими стресс. Это достигается путем первого сбора, ответчика и излучателя мух не более чем за двое суток до эксперимента. Второй шаг заключается в том, чтобы за два часа до эксперимента пересадить мух-излучателей и ответчиков в свежие флаконы и дать им привыкнуть в помещении с контролируемой окружающей средой, где будет проводиться анализ.

Затем мух-ответчиков помещают в TMA и предоставляют выбор между флаконом, в котором мухи ранее подвергались стрессу, таким образом, содержащим стрессовый запах дрозофилы, и свежим флаконом, последним шагом является подсчет количества ответных мух в свежем флаконе в флаконе DSO и в лифте для количественной оценки их реакции на DSO. В конечном счете, Т-образный лабиринт используется для измерения избегания мухами социального сигнала стресса, в частности, стрессового одоранта гило. Впервые идея этого метода пришла мне в голову, когда я был постдоком в Калифорнийском технологическом институте.

В то время Грег Сью и его научный руководитель Дэвид Андерсон занимались изучением страха или социального избегания в Phyla, но для этого не существовало никакого анализа. Они обратились ко мне, потому что я проводил множество поведенческих тестов в лаборатории S brands, и во время проведения экспериментов по фототакси и обонятельному обучению я заметил, что мух привлекают флаконы, в которых другие мухи провели некоторое время спокойно, избегая флаконов, в которых мухи в это время подвергались воздействию электрического тока. Епископ. Демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку экспериментальный процесс анализа социального избегания требует некоторой практики, чтобы быть быстрым и эффективным при передаче биоса без потери мух или DSL.

Основное преимущество этой методики для изучения социальных взаимодействий по сравнению с существующими методами, такими как компьютерное видеослежение, заключается в том, что этот анализ прост в освоении и применении, но он очень эффективен для количественной оценки социального избегания стрессовых индивидуумов. Чтобы начать эксперимент, вырежьте лист пористого полиэтилена так, чтобы он накрыл коробку размером 12,7 на 10,2 сантиметра. Наполните коробку колотым льдом и накройте ее листом, чтобы укомплектовать дрозофилу аппаратом для холодной анестезии.

Проводите эксперимент на скамейке, накрытой белым чехлом для скамейки и доской спереди, чтобы обеспечить однородные условия освещения. Далее подготовьте вихревой аспиратор от мухи товарищей по команде аппарат, термометр и таймер. За один-два дня до эксперимента под наркозом толстой кишки делают мух.

Переложите мух с воронкой в 50-миллилитровую трубку и поместите трубку в изолированное ведро со льдом под уровнем льда. Подождите пять минут, чтобы мухи вошли в холодную кому. Затем переложите мух на пористый полиэтиленовый лист при комнатной температуре и отсортируйте ответные мухи под стереомикроскопом.

Отделите самцов от самок в возрасте от трех до семи дней и содержите этих мух в группе из 40 аккуратно собирайте разнополых мух-излучателей Кантона. С помощью ротового аспиратора можно развести мух. Одна ночь восстановления, чтобы свести к минимуму любое искажающее влияние сбора на поведение.

Далее откройте пакет с тестовыми флаконами, чтобы заменить затхлый воздух с запахом пластика в пакете свежим воздухом. Перед началом эксперимента убедитесь, что температура в испытательном помещении составляет 25 градусов по Цельсию, в помещении ровное освещение и влажность превышает 30%.За два часа до эксперимента перенесите мух-ресивер и излучатель в флаконы со свежими продуктами и дайте мухам приспособиться к окружающей среде на стенде, где будет проводиться эксперимент. Поместите чайный лабиринт на толчковую подушку и затяните винтовой зажим, чтобы лифт был устойчив.

Далее переложите ответчик мух в свежий тестовый флакон и защелкните флакон, содержащий ответчик мух, на вершине чайного лабиринта. Затем наклоните аппарат для чайного лабиринта и постучите им по коврику, чтобы плодовые мушки упали в лифте. Переместите верхнюю часть лифта вниз, чтобы разместить мух между верхней и нижней секциями TMA, и убедитесь, что лифт находится выше точки выбора, чтобы предотвратить побег мух, пока мухи-ответчики приспосабливаются к новой среде.

Поместите излучатель мух в свежий тестовый флакон и посыпьте его куском ваты. Таким образом взбалтывайте флакон на мини-вихре. Мухи будут выделять DSO, переносить мух во флакон с едой и быстро помещать наполненный DSO флакон в одну из двух сторон команды.

Альтернативная сторона размещения флакона, наполненного DSO. При каждом новом запуске помещайте свежий тестовый флакон с другой стороны команды А, а затем полностью опускайте лифт, чтобы плодовые мушки могли выбирать между свежим тестовым флаконом и флаконом, наполненным DSO. Немедленно запустите таймер.

Через минуту переместите элеватор вверх, чтобы отделить мух в свежем флаконе и флаконе DSO от мух, застрявших в лифте. Посчитайте количество мух в каждом флаконе и в лифте. Повторите это.

Для каждого генотипа и/или группы состояний размер мух-ответчиков не влияет на их избегание DSO. После проведения эксперимента на диапазоне от 10 до 80 мух Т-критерий не показал статистической значимости среди индексов производительности или PI мух-ответчиков. Количество мух-излучателей влияет на уклонение от мух DSO, как показано на этом графике, который представляет различные испытания.

Используя от 10 до 160 излучателей в каждой. Существенное избегание все еще было обнаружено только у 10 мух, подвергшихся стрессу. Выбор, время и генетический фон плодовых мушек влияют на реакцию на DSO, как показано на этом графике, который иллюстрирует реакцию штаммов Canton s и Elwood.

Оба генотипа демонстрируют более сильное избегание DSO, чем орегонский, и некоторые штаммы маркина после его развития. Этот метод проложил путь исследователям в области нейробиологии к выявлению нейронной цепи, лежащей в основе восприятия и предотвращения CO2, одного из компонентов DSO. Он также был использован для изучения роли генов-кандидатов при аутизме в влиянии на социальное поведение.

В Joseph Ano Gaster. После освоения эта техника может быть выполнена менее чем за пять минут за одну реплику. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как проводить тест социального избегания, начиная с подготовки излучателя и ответчика мух перед их тестированием и заканчивая генерацией биоса поля DSL и манипуляциями с товарищами по команде, чтобы предоставить респондентам бинарный выбор.