Swimmeret Система Раки: Практическое руководство для рассечения нервной цепочки и внеклеточной регистрацию структуры Motor

Общая цель этой процедуры заключается в рассечении брюшного нервного канатика у рака с целью использования его в электрофизиологических исследованиях. Это достигается путем предварительного обезболивания рака. Далее проводится грубое вскрытие для выделения брюшной пластинки рака.

Затем проводится тонкая диссекция, чтобы полностью изолировать центральную нервную систему от раиновых ганглиев до брюшных ганглий. Шестерка. Наконец, оболочка ганглия удаляется из всех ганглиев для облегчения электрофизиологических экспериментов.

В конечном счете, цепочка брюшных ганглиев используется для внеклеточной или внутриклеточной записи. Изучить координацию центральных генераторов паттернов или исследовать морфологию и синаптический контекст идентифицированных нейронов. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нейробиологии, такие как предоставление практического опыта работы нервной сети, чтобы иметь возможность регистрировать fic FLA возмущение в изолированной нервной системе, или охарактеризовать морфологию абдоминальных ганглиев или конкретных нейронов.

Хотя этот метод может дать представление о системе скорости плавания раков. Он также может быть применен к другим системам, таким как нейронная сеть, которая управляет поведением переворота хвоста у раков. После обезболивания животного согласно текстовому протоколу, придерживайте брюшной стороной вверх и с помощью сильных ножниц подрежьте оба когтя у их основания возле грудной клетки.

Затем снимите левый и правый европоды. Поместите животное брюшной стороной вверх в чашку для вскрытия, выстланную черным сардом, прежде чем использовать холодный физиологический раствор для перфузирования через отверстие когтя. Затем с помощью сильных ножниц сделайте один поперечный надрез прямо позади глаз рака, чтобы обезглавить его.

Затем удалите все ноги для ходьбы возле суставов основания, чтобы изолировать брюшную полость вместе с последними грудными сегментами от остальной части грудной клетки. Вставьте кончик ножниц в отверстие второй шагающей ноги и разрежьте в противоположную сторону. Распространив разрез в обе стороны через грудную клетку и обнажив некоторые внутренние органы, как описано в текстовом протоколе, удалите переднюю часть грудной клетки.

Теперь удалите внутренние органы и промойте животное холодным физиологическим раствором. Продолжайте рассечение разрезом в максимально боковом положении между люмоном и крысами-пловцом по всей длине грудинной пластины. Сделайте такой же разрез с другой стороны.

Поместите брюшко рака-рыбы брюшной стороной вверх в тарелку для вскрытия. Используйте булавки от насекомых, чтобы зафиксировать образец сзади у теллсона и спереди у остатков карабазы. Наполните блюдо солевым раствором для раков так, чтобы он покрывал экземпляр.

С помощью грубых щипцов в левой руке захватите отверстие для шагающей ноги и раскройте образец. Определите две большие мышечные тяжи спинного сгибателя. Зафиксируйте их и разрежьте их вентральные основания, а также стернальную артерию.

Обнажите первые брюшные ганглии А один и связанные с ними нервы N один N два. Теперь переходим ко второму брюшному сегменту. Удалите основание мышечных тяжей близко к вентральному основанию.

Теперь виден брюшной ганглий А-2 с соответствующими нервами N один, N два и N три. Пересеките нервы N три в самом удаленном от нервного канатика месте. Повторите эти действия для следующих трех брюшных сегментов с брюшными ганглиями.

От трех до пяти. При достижении брюшного ганглия шестерка. Разрежьте грудную пластину сзади от нервов шестерки.

Сохраните брюшную часть и прикрепите ее. Тыльной стороной вверх в чашку, наполненную физиологическим раствором под микроскопом. С помощью щипцов удалите самые передние части головного мозга грудного отдела.

Затем разрежьте мышцы между оставшимися экзоскелетными структурами. Осторожно приподняв передний конец вентрального нервного канатика, перережьте грудные нервы латерально. Сосредоточьтесь на единице и разрежьте нервы N один и N два единицы длиной не более одного сантиметра, чтобы прижать их.

Далее перейдем к А-2 и определим N-образный один, Н-два и N три нерва этого сегмента. Нервы в одном из брюшных ганглиев от двух до пяти. Находятся между двумя грудными кутикулярами в разворотах в каждом сегменте и покрыты мускулатурой.

Затем, начиная с бокового края живота, сделайте один разрез вдоль заднего грудного сгибания кутикуляра и продолжайте двигаться к средней линии после раскрытия N в соответствии с текстовым протоколом. При необходимости перережьте нерв как можно дистальнее. Перейдите к контралатеральной стороне и начните изолировать нерв N от средней линии возле ганглия, двигаясь к латеральному краю, разрезая вдоль заднего грудного обхвата кутикула.

Теперь разрежьте нервы N два этого ганглия на подходящую для прикалывания длину. Затем повторите шаги, показанные для брюшных ганглий. Двойка на тройку до пятерки как можно дальше.

Перерезать нервы ганглию шестеркой. Используйте щипцы, чтобы захватить несколько нервов шестерки, чтобы приподнять ганглий и начать изолировать цепь ганглиев от грудинной пластины. После полной изоляции нервного канатика перенесите цепочку ганглиев в чашку Петри, выстланную прозрачным кожухом порога и заполненную физиологическим раствором, с помощью небольших штифтов, вырезанных из проволоки из нержавеющей стали, при этом применяя мягкое растягивающее прикосновение.

Закрепите цепочку ганглиев по прямой линии нервным канатиком, расположенным тыльной стороной вверх. Оставьте только два последних грудных ганглии и прижмите грудные нервы в сторону. Выведите нервы единицы под углом 90 градусов относительно нервного канатика.

Затем перейдите к двойке и прижмите нервы N два под углом от 35 до 45 градусов относительно нервного канатика. После того, как нервы N one отделены и закреплены в соответствии с текстовым протоколом, прикрепите переднюю ветвь нерва N one под углом 90 градусов к нервному канатику. Затем закрепите заднюю ветвь нерва N один между передней N одной ветвью и нервом N двумя.

Поскольку все брюшные ганглии должны быть покрыты оболочкой, с помощью тонких пружинных ножниц сделайте небольшой боковой разрез через влагалище ганглия позади ганглия и между нервами N два и N три. Разрежьте поперек влагалища над соединительным. Затем продолжайте резать его по боковым границам ганглия до снятия ножен.

При необходимости с помощью тонких щипцов приподнимают влагалище для проведения внеклеточной записи. После настройки инструментов и реагентов, перечисленных в текстовом протоколе, поместите цепочку ганглиев на стол микроскопа и подсвечивайте снизу. Вставьте записывающий электрод в защитный кожух рядом с целевым нервом, а электрод сравнения — в положение рядом, но латеральнее ганглий.

Затем согните целевой нерв вокруг записи. После растяжения и закрепления нерва используйте шприц, наполненный вазелином, и иглу 20 калибра с закругленным концом, чтобы изолировать целевой нерв от раствора для купания. Повторите это для всех нервов, активность которых необходимо записать.

Наконец, начнем регистрацию, как показано на рисунке: внеклеточная активность PS от двух до пяти моторных нейронов от PS 2 до PS 5 начинается со взрыва PS в пятерку, и волна возбуждения распространяется в переднем направлении. Кроме того, время, измеренное от начала одного всплеска до начала следующего всплеска в каждом сегменте, остается постоянным и определяется как период периодов ритма и всплеска. Продолжительность может варьироваться в зависимости от подготовки, но фазовая задержка между сегментами остается постоянной примерно на четверти цикла, независимо от частоты ритма.

Эти координационные паттерны лучше всего можно увидеть на фазовых гистограммах, показанных здесь. Здесь с помощью острых микроэлектродов внутриклеточные записи с дендритов Ps.Motor нейронов показывают энфазные колебания отдельных нейронов с внеклеточной регистрацией активности всех PS-моторных нейронов того же полуганглия. Для идентификации внутриклеточных записанных нейронов клетки могут быть заполнены с помощью острых микроэлектродов и ионофореза.

На этом рисунке вентральная сода двух моторных нейронов ди-наполненного PS расположена позади основания нерва N. Первичный нейрит выступает вперед и разветвляется внутри латеральной нейротаблетки. Аксон проецируется через заднюю ветвь нерва N one к мускулатуре.

После освоения этой техники ее можно выполнить за 45 минут или час, если она выполнена правильно. Пытаясь использовать эту процедуру, важно помнить о необходимости регулярно менять физиологический раствор, чтобы сохранить нервную ткань здоровой. После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как внутриклеточная запись моторных нейронов или интернейронов, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как анализ клеточного механизма координации, измерение ионных токов или изучение влияния нейромодуляторов на ритмическую активность конкретных клеток.