Name: Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в Hydra (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Изучите метод количественной оценки кормового ответа у Hydra под действием восстановленного глутатиона. Этот простой и воспроизводимый анализ измеряет расстояние между щупальцем и гипостомой.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Авторы выражают благодарность К.. Мадху, Ните Белиаппе и сотрудникам Медиа-центра Индийского института научного образования и исследований в Пуне за их помощь в создании видео. Работа была поддержана финансированием в рамках программы Центра передового опыта Департамента биотехнологии Правительства Индии в Сингапуре и стипендией для постдокторантов Департамента науки и технологий Правительства Индии в РК.

1. Hydra Культура и Измерение кормления ответ <ol><li> Поддержание Hydra полипы в культуре путем подачи их в день с Artemia и держать их в среде (буфер 1 мМ Трис-HCl, рН 7,6, 1 мМ NaCl, 1 мМ CaCl 2, 0,1 мМ KCl, и 0,1 мМ MgSO 4), содержащийся в стеклянный шар на 18 ° C при 12 ч света 12 ч темных циклов, как описано ранее 12. </li><li> Для измерения отклика подачи, передать один зрелые гидры полип, имеющую от 5 до 6 щупальца к одному лунку 24-луночного планшета. Снимите остаточной среды из скважины, наклонив его, а затем сразу же добавить 500 мкл свежей среды. </li><li> Подготовьте 9 мкм глутатиона решение в гидры среды. Так как глутатион раствор склонен к окислению, всегда используют свежеприготовленные глутатиона решение для каждого эксперимента. </li><li> Трансфер тарелку с изображения платформе микроскопом, имеющим положения для записи изображения. Используйте темный фон такой, что поведение ое гидра полип может быть четко отображены против контрастном фоне. </li><li> Комната для наблюдения и отображения поведение гидры свободным от огней колебания интенсивности, воздушных потоков и шума. Такие расстройства могут также вызвать гидра полип, чтобы показать сжатие щупалец - даже в отсутствие глутатиона. </li><li> Разрешить полип расслабиться в течение 5 мин. </li><li> Убедитесь, что полип расположен вдоль центральной области хорошо так, что поведение может быть отображена ясно. Если полип на краю колодца, привести его в центр с помощью промывки среду с помощью пипетки и снова позволить ему отдохнуть. </li><li> Записать образ гидры в расслабленном состоянии. Это будет точка наблюдения нулевой раз. </li><li> Быстрое добавление 9 мкМ раствор глутатиона, чтобы достичь конечной концентрации 3 мкМ в скважине. В зависимости от целей эксперимента и ответ, показанной на гидры, испытать ряд различных концентраций глутатиона и Chooсе соответствующую концентрацию, необходимую. </li><li> Запустите таймер сразу после добавления раствора глутатиона и захват изображений после каждого 15-30 сек для 4-5 мин. Не изменить настройки коэффициента увеличения во время покадровой обработки изображений. </li><li> Добавьте глутатиона раствор осторожно и с равномерным потоком таким образом, что положение животного в скважине будет минимально нарушается в поле зрения микроскопа. Тем не менее, если полип перемещает широко после добавления раствора глутатиона, перемещать плиту очень осторожно, чтобы довести полип в поле зрения захвата изображения. </li><li> В контрольном эксперименте, используют среду, не содержащую глутатион, сохраняя при этом все другие параметры идентичны. </li><li> Обязательно выполните все вышеперечисленные экспериментальных шагов в первой половине дня - до 1 вечера, чтобы избежать возможного влияния циркадного ритма на степень реакции кормления. </li><li> Откройте каждый из захваченных изображений с помощью программы Image Manipulation GNU (GIMP). Используйте «мера» инструмент, доступный из меню&gt; Инструменты&gt; Измерить для определения расстояния между верхушечной конце каждого из щупалец и гипостомы. Если отверстие рта наблюдается в любом из изображений, определяют расстояние между центром в открытый рот и апикальной конце щупальцу. Обратитесь к этой дистанции, как распространение щупальца. </li><li> Рассчитайте среднее распространение щупальце для каждого полипа до и после воздействия глутатиона. Рассчитывают отношение среднего распространения щупальца на нулевой момент времени в том, что на каждом из последующих временных точках. Это отношение будет называться относительный разброс щупальце. </li><li> Повторите измерения для по меньшей мере, 20 полипов. </li></ol><img alt="Уравнение 1" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq1.jpg" width="400"> <img alt="Уравнение 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq2.jpg" width="450"> 2. Метод Оценка использованияГолодание Модель <ol><li> Для голода, передать несколько Hydra полипы в отдельный стеклянный шар и не кормить их в течение 5 дней. Поток контрольную группу из нескольких полипов ежедневно с артемии в аналогичной по размеру миску. Изменение среды от обоих экспериментальная миски ежедневно, чтобы избежать роста грибов в среде. </li><li> В день эксперимента, кормить контрольной группы гидры с артемии в течение 1 часа и использовать эти гидру для последующих экспериментов после удаления все недоеденные и мертвую артемии из среды. </li><li> Измерить реакцию подача голодали гидры по сравнению с гидры из контрольной группы по способу, описанному ранее в пункте 1. Чтобы избежать смещения из-за времени наблюдения, чередовать измерения каждого из голодали и контролировать Hydra полипы. </li></ol>

<ol><li>Loomis, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+control+of+the+specific+feeding+reactions+of+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Ny.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Glutathione control of the specific feeding reactions of hydra.</a> Ann. Ny. Acad. Sci. 62, 209-228 (1955).</li>
<li>Beckmann, A., Ozbek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nematocyst%3A+a+molecular+map+of+the+Cnidarian+stinging+organelle%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The Nematocyst: a molecular map of the Cnidarian stinging organelle.</a> Int. J. Dev. Biol. 56, 577-582 (2012).</li>
<li>Venturini, G., Carolei, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+receptors+in+Hydra.+Pharmacological+and+biochemical+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic receptors in Hydra. Pharmacological and biochemical observations.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 102, 39-43 (1992).</li>
<li>Kass-Simon, G., Scappaticci, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+and+GABAnergic+control+in+the+tentacle+effector+systems+of+Hydra+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic and GABAnergic control in the tentacle effector systems of Hydra vulgaris.</a> Hydrobiologia. 530-531, 67-71 (2004).</li>
<li>Pierobon, P., Tino, A., Minei, R., Marino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+roles+of+GABA+and+glycine+in+the+modulation+of+chemosensory+responses+in+Hydra+vulgaris+%28Cnidaria%2C+Hydrozoa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiology%22%5BJournal%5D)">Different roles of GABA and glycine in the modulation of chemosensory responses in Hydra vulgaris (Cnidaria, Hydrozoa).</a> Hydrobiology. 178, 59-66 (2004).</li>
<li>Pierobon, P., Sogliano, C., Minei, R., Tino, A., Porcu, P., Marino, G., Tortiglione, C., Concas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+NMDA+receptors+in+Hydra%3A+a+biochemical+and+functional+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Putative NMDA receptors in Hydra: a biochemical and functional study.</a> Eur. J. Neurosci. 20, 2598-2604 (2004).</li>
<li>Alzugaray, M. E., Adami, M. L., Diambra, L. A., Hernandez-Martinez, S., Damborenea, C., Noriega, F. G., Ronderos, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allatotropin%3A+An+ancestral+myotropic+neuropeptide+involved+in+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Allatotropin: An ancestral myotropic neuropeptide involved in feeding.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li>
<li>Bellis, S. L., Laux, D. C., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+Hydra+glutathione+binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of Hydra glutathione binding proteins.</a> FEBS Lett. 354, 320-324 (1994).</li>
<li>Lenhoff, H. M. The discovery of the GSH receptor in Hydra and its evolutionary significance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLenhoff%2C+HM+%22Glutathione+in+the+Nervous+System%22">Glutathione in the Nervous System</a>. Shaw, C. A. , Taylor&Francis. Bristol. 25-43 (1998).</li>
<li>Venturini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hydra+GSH+receptor.+Pharmacological+and+radioligand+binding+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">The hydra GSH receptor. Pharmacological and radioligand binding studies.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 87, 321-324 (1987).</li>
<li>Reddy, P. C., Barve, A., Ghaskadbi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+and+phylogenetic+characterization+of+common+hydra+from+India%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Sci%22%5BJournal%5D)">Description and phylogenetic characterization of common hydra from India.</a> Curr. Sci. 101, 736-738 (2011).</li>
<li>Horibata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+catabolic+pathway+of+glycosphingolipids+in+a+hydrozoan%2C+Hydra+magnipapillata.+Involving+endoglycoceramidase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Unique catabolic pathway of glycosphingolipids in a hydrozoan, Hydra magnipapillata. Involving endoglycoceramidase.</a> J. Biol. Chem. 279, 33379-33389 (2004).</li>
<li>Koizumi, O., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rise+of+feeding+threshold+in+satiated+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rise of feeding threshold in satiated Hydra.</a> J. Comp. Physiol. 142, 75-80 (1981).</li>
<li>Bellis, S. L., Kass-Simon, G., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+characterization+and+detergent+solubilization+of+the+putative+glutathione+chemoreceptor+from+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Partial characterization and detergent solubilization of the putative glutathione chemoreceptor from hydra.</a> Biochemistry. 31, 9838-9843 (1992).</li>
<li>Morita, H., Hanai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+receptor+proteins+in+invertebrates+-+with+special+reference+to+glutathione+receptor+of+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Taste receptor proteins in invertebrates - with special reference to glutathione receptor of hydra.</a> Chem. Senses. 12, 245-250 (1987).</li>
<li>Colasanti, M., Venturini, G., Merante, A., Musci, G., Lauro, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+involvement+in+Hydra+vulgaris+very+primitive+olfactory-+like+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide involvement in Hydra vulgaris very primitive olfactory- like system.</a> Journal of Neurosci. 17, 493-499 (1997).</li>
<li>Kuhn, A., Tsiairis, C. D., Williamson, M., Kalbacher, H., Grimmelikhuijzen, C. J., Holstein, T. W., Gründer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+homologous+subunits+form+a+high+affinity+peptide-gated+ion+channel+in+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Three homologous subunits form a high affinity peptide-gated ion channel in Hydra.</a> J. Biol. Chem. 285, 11958-11965 (2010).</li>
<li>Wang, M., Yao, Y., Kuang, D., Hampson, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+family+C+G-protein-coupled+receptors+by+the+tripeptide+glutathione%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of family C G-protein-coupled receptors by the tripeptide glutathione.</a> J. Biol. Chem. 281, 8864-8870 (2006).</li>
<li>Ruggieri, R. D., Pierobon, P., Kass-Simon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pacemaker+activity+in+hydra+is+modulated+by+glycine+receptor+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">Pacemaker activity in hydra is modulated by glycine receptor ligands.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 138, 193-202 (2004).</li>
<li>Ramazani, R. B., Krishnan, H. R., Bergeson, S. E., Atkinson, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+automated+movement+detection+for+the+analysis+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Computer automated movement detection for the analysis of behavior.</a> J. Neurosci. Meth. 162, 171-179 (2007).</li>
</ol>

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Пищевое поведение в гидры представляет собой один из самых исконных хемосенсорных систем в многоклеточных. Хотя присутствие GSH в ракообразных жидкости, опубликованном после nematocyst при содействии захвата добычи был обнаружен давно 1, ни белок, ни GSHR предполагаемого гена, кодирующего / с были охарактеризованы от гидры до настоящего времени. Мало попытки были сделаны, чтобы охарактеризовать ГШ связывающих белков в гидру 8, 14, 15. Тем не менее, личность этих предполагаемых рецепторных белков ос...

Гидра - самый примитивный организм, обладающий нервной системой и хемочувствительностью для обнаружения восстановленного глутатиона (GSH) для захвата добычи1. Питается различными животными, такими как нематоды, ракообразные, личинки насекомых, головастики и недавно вылупившиеся рыбы1. Движение этих кормовых организмов вызывает механосенсорный разряд стрекательных капсул, называемых нематоцистами от гидры, которые вставляются в добычу2. GSH, присутствующий в жидкости, выделяемой из раненой добычи, впоследствии активирует пищевую реакцию у гидры, которая включает в себя скручивание щупалец, чтобы подвести добычу ко рту, открытие рта и последующее поглощение добычи. Было показано, что многие молекулы, такие как допамин-3, глутамат-4, ГАМК, глицин-5, NMDA-рецепторы6 и аллатотропин7, участвуют в пищевом ответе у гидры. Также было показано, что хемосенсорная реакция, индуцированная GSH, модулируется статусом питания животного таким образом, что голодающая гидра проявляла усиленную реакцию на кормление. Такое повышение чувствительности к GSH является биологически значимым, так как в условиях голодания гидре необходимо находить свою добычу при более высокой чувствительности. 
Хотя реакцию на кормление, вызванную GSH, можно ясно наблюдать под микроскопом, методы, обычно используемые для измерения наблюдений за реакцией на питание, не являются количественными. В большинстве случаев за меру реакции на питание принималось время, в течение которого рот гидры остаетсяоткрытым8,9; В то время как в другом случае количественное определение было основано на количестве гидр из популяции, демонстрирующих реакцию на питание10. Тем не менее, наблюдение за временем открытия рта полипов гидры является трудоемким и подвержено изменениям, вызванным неконтролируемыми параметрами, такими как направление ориентации рта во время наблюдений. Аналогичным образом, поскольку реакция на кормление является количественным параметром, популяционные подходы подвержены вариациям/ошибкам, вызванным мнением или наблюдательной предвзятостью отдельного наблюдателя. Чтобы обойти эти проблемы, мы разработали метод относительной количественной оценки реакции на питание у гидры (Hydra vulgaris Ind-Pune11) на основе расстояния от апикального конца щупальца до рта полипа гидры.

<table><tbody><tr><td>Охлаждаемый инкубатор</td><td>Panasonic&nbsp;</td><td>Микроскоп МИР-254-ПЭ</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>S8AP0&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Фотоаппарат для микроскопа</td><td>Leica&nbsp;</td><td>EC3</td><td></td></tr><tr><td>Восстановленный глутатион</td><td>Sigma</td><td>G4251</td><td>Хранится при температуре 4 °C. Перед открытием бутылку доведите до комнатной температуры, чтобы избежать окисления</td></tr><tr><td>Программа редактирования изображений</td><td>GIMP</td><td>Версия 2.8</td><td></td></tr></tbody></table>

Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в hydra

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Гидра является одним из самых примитивных организмов, обладающих нервной системой и хемочувствительностью для обнаружения восстановленного глутатиона (GSH) для захвата добычи. Движение кормовых организмов вызывает механосенсорный разряд стрекательных клеток, называемых нематоцистами из гидры, которые внедряются в добычу. Пищевая реакция у гидры, которая включает в себя скручивание щупалец, чтобы поднести добычу ко рту, открытие рта и последующее поглощение добычи, вызывается GSH, присутствующим в жидкости, выделяемой из раненой добычи. Чтобы иметь возможность идентифицировать молекулярный механизм реакции на питание у гидры, который на сегодняшний день неизвестен, необходимо провести анализ для измерения реакции на кормление. Здесь мы опишем простой метод количественной оценки реакции на питание, при котором измеряется расстояние между апикальным концом щупальца и ртом гидры и определяется отношение такого расстояния до и после добавления GSH. Было обнаружено, что соотношение, называемое относительным размахом щупалец, дает представление о реакции на питание. Этот анализ был валидирован с использованием модели голодания, в которой голодающие гидры демонстрируют повышенную реакцию на питание по сравнению с ежедневно скармливаемой гидре.

Глутатион вызывает гидра выставлять скручивания щупальца ко рту с целью поглощая добычу. Такое закручивание щупальцами приносит верхушечные концы щупалец ближе к гипостомы. Это приводит к уменьшению распространения щупальца, или линейного расстояния между верхушечной конце щупальца и гипостомы (рисунок 1). Относительное распространение щупальце, или отношение средней щупальцу распространяться до и после добавления глутатиона, в среднем на нескольких полипов снижает с течением времени. Относительное расп...

Здесь мы описываем простой анализ для количественной оценки реакции на питание у гидры, вызванной восстановленной формой глутатиона. Этот анализ основан на измерении расстояния между апикальным концом щупальца и ртом гидры.

Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

В этом видео мы опишем метод измерения пищевого поведения у гидры. В ответ на восстановленную форму глутатиона, гидра питается различными животными, нематодами, раками и недавно вылупившимися рыбами. На внешнем слое этого двухклеточного животного находятся специализированные клетки, называемые нематоцистами.У нематоцист есть триггеры, которые при активации при движении добычи в окружающей жидкости вызывают сброс нанизывающих нитей. Жгучие нити вставляются в добычу. Раненая добыча выделяет избыток глюкозы.Ионный гидро обладает химическим сенсацией для обнаружения глутатиона в окружающей жидкости. Это запускает пищевое поведение с участием нервной системы. Пищевое поведение гидры включает в себя скручивание щупалец, чтобы подвести добычу к гиперскопу, открытие рта и поглощение добычи.На самом деле, добавление ионов насыщения в окружающую среду вызывает пищевую реакцию у гидры, даже в отсутствие добычи. Чтобы понять взаимодействие чувствительности при химиотерапии и нервной системы, нам необходимо квантовать поведение и создать точные и надежные измерения. В некоторых более ранних сообщениях время, в течение которого рот остается открытым, принимается за меру реакции на кормление, но наблюдение за продолжительностью открытия рта у гидрополипов утомительно и подвержено изменениям, вызванным неконтролируемыми параметрами, такими как ориентация рта из-за наблюдений.Другой метод количественной оценки поведения основан на количестве гидр в популяции, показывающих реакцию на питание. Однако, поскольку реакция на кормление является индивидуальным количественным параметром, популяционные подходы представляют собой субъективные вариации, вызванные мнением отдельного наблюдателя. Основные преимущества альтернативного метода, который мы здесь описываем, заключаются в том, что он очень прост в исполнении и легко воспроизводим.Поддерживайте гидры при температуре 18 градусов Цельсия при 12-часовом освещении. 12-часовые темные циклы в среде содержат в стеклянной миске и кормите их ежедневно с помощью эмии для измерения реакции на кормление. Перенесите один зрелый гидрополип в лунку 24-луночной пластины, удалите остаточную среду из скважины с помощью кругового дождевального шарнира.Этому способствует наклон тарелки, отбрасывание лишней среды, а затем сразу же добавление 500 микролитров свежей среды для приготовления раствора глутатиона. Девятимикролярный раствор глутатиона готовят с использованием гидросреды. Помните, что раствор глутатиона склонен к окислению, поэтому всегда используйте свежеприготовленный раствор глутатиона.Для каждого эксперимента переносите пластину на визуализирующую платформу микроскопа. При наличии средств для записи изображений используйте темный фон, чтобы поведение гидрополипа можно было четко изобразить на контрастном фоне. Убедитесь, что полип расположен вдоль центральной части колодца, на котором запечатлено изображение гидры в расслабленном состоянии.Это будет наблюдение в нулевой временной точке. Быстро добавьте девять микромоляров раствор глутатиона, чтобы достичь конечной концентрации трех микромоляров в скважине. Запускайте таймер сразу после добавления раствора глутатиона и делайте снимки каждые 15 или 30 секунд в течение четырех-пяти минут, не меняя настройки увеличения.Для измерений мы используем gim версии two, gim. Программа для работы с изображениями GNU — это программное обеспечение, которое можно свободно загрузить из Интернета. Откройте каждое из захваченных изображений в GIM.В этой программе есть инструмент измерения, доступный из меню инструментов. Измерить расстояние между гиперами, стомой, апикальным концом каждого из щупалец можно с помощью этого инструмента. Это расстояние называется размахом щупалец.Рассчитайте средний разброс щупалец для каждого полипа до и после глутатиона. Рассчитайте отношение среднего размаха щупальца в нулевое время. Указывайте на него в каждой из последующих временных точек.Назовем это относительным размахом щупалец. Делайте такие измерения не менее чем для 20 полипов на предмет голодания. Переложите несколько гидрополипов в отдельную стеклянную миску и не кормите их в течение пяти дней.Ежедневно подкармливайте контрольные полипы артией в день проведения эксперимента. Накормите контрольную группу гидр артией в течение одного R и используйте эти гидры для последующих экспериментов. Измерьте пищевую реакцию голодающей гидры по сравнению с гидрой из контрольной группы методом, описанным ранее в этом видео, чтобы избежать любой погрешности из-за времени чередования, измерений каждого из голодающих и контролируемых гидрополипов.Глутатион заставляет гидру скручивать щупальца по направлению ко рту. Такое скручивание приближает верхушечные концы щупалец к гипошторму. Это приводит к уменьшению линейного расстояния между апикальными концами щупальца и гипершторму или распространению щупалец.Относительное расправление щупальца происходит после добавления среды. Недостаток глутатиона уменьшается лишь временно. Он возвращается к единице примерно через минуту.Известно, что голодание приводит к усилению пищевого поведения, вызванного глутатионом. Раскрытие щупальца через одну минуту после добавления глутатиона было значительно ниже у группы персонала по сравнению с насытившейся группой. Все животные используют химиотерапию для обнаружения пищи.Гидра использует химический сигнал в виде глутатиона, выделяемого раненой добычей, имеет простую нервную систему без какой-либо мозговой структуры, поэтому молекулярный механизм ощущения химиотерапии и модуляция, зависящая от ее пищевого статуса, также, вероятно, просты. Понимание этого механизма может пролить свет на эволюцию регуляции кормления у высших животных. Тем не менее, ни рецептор, который может связываться с глутатионом, ни какие-либо другие компоненты нисходящего сигнального каскада до настоящего времени не были зарегистрированы у Хайда.Фармакологические ингибиторы общих хемосенсорных сигнальных путей и использование передовых молекулярно-биологических методов для изменения экспрессии таких сигнальных белков и глутатионовых рецепторов могут оказаться мощными инструментами для понимания молекулярного механизма питания. В случае с гидрой, однако, необходима надежная мера измененного пищевого поведения, чтобы понять степень любых изменений, вызванных такими экспериментальными исследованиями. Здесь мы представили метод, который не только надежен, но и прост в исполнении и обладает высокой воспроизводимостью.

measuring-glutathione-induced-feeding-response-in-hydra

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Это видео демонстрирует метод оценки нейротоксических эффектов наночастиц с помощью микроглии. В нем описаны этапы активации микроглии наночастицами, фильтрации кондиционированных сред для выделения провоспалительных цитокинов, полученных из микроглии, и тестирования токсичности нейронов гипоталамуса с помощью кондиционированной среды.

Определение токсичности, вызванной наночастицами, в нейронах с использованием микроглии в качестве суррогатного биосенсора

Эта статья покажет, как контролировать динамику глютамина в живых клетках с помощью волнуйтесь. Генетически кодируемые сенсоры позволяют мониторинг в реальном времени биологических молекул на субклеточном резолюции. Экспериментальное проектирование, технические детали экспериментальных установок, и соображения для пост-экспериментального анализа будут обсуждаться на генетически кодируемых сенсоров глютамина.

Глютамин поток изображений, используя Генетически кодируемые сенсоры

Через двойное лечение колхицином может образоваться токсин, полученный из растений, который убивает делящиеся клетки, без нервов Hydra vulgaris . Эти Hydra не могут кормить или egest самостоятельно. В этой статье описывается улучшенный метод долгосрочного поддержания безрецидивной Hydra vulgaris в лаборатории.

Поколение и долгосрочное содержание без нервов<em&gt; Hydra</em

Анализов количественных пищи с окрашенных пищей обеспечивают надежную и высок объём средств для оценки кормления мотивации. Сочетание пробирного потребления продуктов питания с thermogenetic и optogenetic экраны представляет собой мощный подход к расследованию нейронных цепей лежащие в основе аппетит у взрослых Drosophila melanogaster.

Сочетая анализов количественных пищи и насильно активации нейронов для изучения аппетит у дрозофилы

Эта рукопись описывает использование генетически закодированный fluorogenic журналистам в приложении клеток для изучения ксенобиотик индуцированного окислительного стресса. Этот экспериментальный подход предлагает беспрецедентную пространственно-временных разрешение, чувствительность и специфичность избегая многих недостатков традиционных методов, используемых для обнаружения токсикологические оксидативного стресса.

Imaging подходы для оценки токсикологической оксидативного стресса, используя генетически закодированный Fluorogenic датчики

В этой статье представлен метод изучения глутаматных рецепторов (GluR) в разъединенных первичных гиппокампальных культурах. Используя подход к кормлению антител для маркировки эндогенных или переэкспрессированных рецепторов в сочетании с фармакологическими подходами, этот метод позволяет выявлять молекулярные механизмы, регулирующие экспрессию поверхности ГлюР путем модулирования процессов интернализации или рециркуляции.

Подход к кормлению антител для изучения торговли рецепторами глутамата в диссоциированных первичных гиппокампальных культурах

Описано здесь протокол, который позволяет колоритной количественной оценки количества пищи, съеденной в течение определенного промежутка времени личинками Drosophila melanogaster подвергаются диеты различного качества макроэлементов. Эти анализы проводятся в контексте нейронального термогенетического экрана.

Количественная оценка приема макроэлементов в термогенетического нейронального экрана с использованием drosophila Larvae

В этой статье описывается протокол для определения различий в базальном окислительно-восстановительном состоянии и окислительно-восстановительных реакциях на острые возмущения в первичных нейронах гиппокампа и коры с помощью конфокальной живой микроскопии. Протокол может быть применен к другим типам клеток и микроскопам с минимальными модификациями.

Живая визуализация окислительно-восстановительного состояния митохондриального глутатиона в первичных нейронах с использованием ратиометрического индикатора

Количественное определение как окисленных, так и восстановленных форм глутатиона (GSSG и GSH соответственно) было достигнуто за счет использования ортофтальдегида (OPA). OPA становится высокофлуоресцентным после конъюгации с GSH, но не может конъюгировать GSSG до тех пор, пока не восстановится. Здесь мы описываем многопараметрический анализ для количественной оценки обоих с использованием количественного определения белка для нормализации.

Быстрое количественное определение окисленных и восстановленных форм глутатиона с использованием орто-фтальдегида в культивируемых клетках млекопитающих in vitro

В этом протоколе описан анализ для количественной оценки скорости кормления Caenorhabditis elegans на основе измерения клиренса бактерий в жидкой культуре.

Количественная оценка потребления пищи при Caenorhabditis elegans путем измерения бактериального клиренса

С помощью таймлапс-визуализации можно проследить полный процесс регенерации сфероидов Гидры . Этот протокол описывает генерацию сфероидов Гидры , рассматривает различные стратегии крепления и подробно описывает, как проводить долгосрочную живую визуализацию с использованием вращающейся дисковой конфокальной микроскопии, а также световой флуоресцентной микроскопии.

Подготовка и живые визуализации регенерирующих сфероидов Гидры

Изучите метод количественной оценки кормового ответа у Hydra под действием восстановленного глутатиона. Этот простой и воспроизводимый анализ измеряет расстояние между щупальцем и гипостомой.

Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в Hydra

Больше видео