Генерация плазмидных векторов выражая флага меченных белков соответствии с Положением удлинения Человеческий фактор-1α промотора, используя Gibson Ассамблею

37.7K просмотров

Цитируется: 8

10:18 мин.

9 февраля 2015 г.

10.3791/52235-v

9 февраля 2015 г.

37.7K просмотров
 , 

Синтез пользовательских плазмид требует труда и времени. Этот протокол описывает использование клонирования сборки Gibson для сокращения работы и продолжительности процедуры пользовательского клонирования ДНК. Описанный протокол также позволяет создавать надежные меченые белковые конструкции для экспрессии у млекопитающих по цене, аналогичной традиционному клонированию ДНК методом вырезания и вставки.

Больше видео

Плазмидный вектор

Chapters in this video

0:05

Заголовок

1:30

Дизайн *in silico*: итоговая плазмида и перекрывающиеся праймеры

3:58

Амплификация фрагментов ДНК

5:44

Очистка ДНК с помощью магнитных частиц

6:58

Реакция клонирования путем сборки и трансформация продуктов в *E. coli*

8:21

Результаты: клонирование мутантов CstF-54 и CstF-64 под транскрипционным контролем промотора фактора элонгации 1α человека

9:47

Заключение

Related Videos