Обнаружение Истинного IgE-выражения мышь B Lineage клеток

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы отличить истинные IgE-экспрессирующие В-клетки от В-клеток, экспрессирующих другие изотипы IgE, секретируемые IgE. Во время переключения классов in vitro анализы связываются с поверхностными белками В-клеток, что затрудняет возможность измерения переключения класса на IgE. Цель достигается путем предварительного удаления рецептор-связанных молекул IgE перед анализом с помощью трипсина, который не расщепляет белки клеточной поверхности, оставляя эндогенно производимые внутриклеточные молекулы иммуноглобулинов нетронутыми.

Во-вторых, внутриклеточные белки подвергаются воздействию путем фиксации В-клеток формином и пермирования клеток метанолом. Затем клетки окрашиваются флуоресцентно мечеными антителами для выявления внутриклеточных иммуноглобулинов. Результаты показывают отчетливую популяцию IgE-положительных В-клеток.