TIRFM и рН-чувствительные GFP-зонды для оценки нейромедиатора пузырька динамики в SH-SY5Y клеток нейробластомы: Сотовый изображений и анализ данных

Общая цель этой процедуры заключается в исследовании динамики везикул нейротрансмиттеров в клетках нейробластомы с использованием pH-чувствительных зондов и флуоресцентной микроскопии с полным внутренним отражением или газонной земли. Это достигается путем нанесения на стеклянные покровные стекла и их разрезания с помощью генетически закодированных pH-чувствительных флуоресцентных зондов слияния и переработки везикул, которые избирательно нацелены на синаптические везикулы. Экспрессия белка ожидается в течение 24-48 часов.

Второй шаг — регистрация динамики везикул с помощью микроскопии полного внутреннего отражения. Этот шаг особенно важен для успеха эксперимента, и мы предоставляем пошаговое описание того, как достичь конфигурации газона. Следующий. Как только будет достигнута правильная конфигурация газона, последовательные изображения могут быть автоматически записаны программным обеспечением в базальных или стимулированных условиях.