Методы для сравнения питательных веществ в перги сделан африканизированных и европейской медоносных пчел и воздействие на Гемолимфа белка титров

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы количественно определить содержание питательных веществ в пыльце и пчелином хлебе, производимых двумя подвидами медоносных пчел, и измерить потребление титров белка. Это достигается за счет предоставления европейским и африканским пчелам одного и того же источника пыльцы на ограниченной территории и предоставления пчелам возможности хранить пыльцу в своих колониях в виде пчелиного хлеба. Далее перга скармливается вновь появившимся европейским и африканским пчелам в клетках.

Затем пчел в клетках отбирают пробы через четыре, семь и 11 дней кормления, и измеряют количество перги, оставшегося в каждой клетке, для оценки потребления. Наконец, измеряется концентрация питательных веществ, включая белок и аминокислоты, в пыльце и пчелином хлебе, производимых европейскими и африканизированными пчелами, и сравнивается между расами пчел. Полученные результаты показывают, что пчелиный хлеб отличается от пыльцы концентрацией белка и некоторых аминокислот, а также титрами белков гемолимфы.

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в исследованиях питания медоносных пчел, такие как роль источника пыльцы в питательных веществах в пчелином хлебе и как эти питательные вещества приобретаются пчелами различных подвидов, брекетов и генотипов. Для начала после размещения пыльцевых ловушек на колониях медоносных пчел соберите пыльцу, используйте кофемолку, чтобы измельчить пыльцу в мелкий порошок, создайте пять колоний, каждая из африканских медоносных пчел или HB и европейских медоносных пчел, или EHB в закрытой зоне полета или EFA. так что пчелы питаются только предоставленной пыльцой, чтобы предотвратить дрейф рабочих между колониями EHB и A HB. Разделите EFA на отдельные секции так, чтобы пчелы не могли пересечь их в каждой секции EFA, поместите отдельные колонии EHB или HB с 3 500 до 4 000 рабочих пчел восковые соты с нектарным медом, незрелый расплод и пустые соты покормите семьи измельченной пыльцой для колоний, поместив лоток в каждую секцию EFA и распределив примерно 60 граммов пыльцы на лотки.

Таким образом, пчелы-ковщики могут собирать пыльцу в качестве учебной нагрузки и хранить ее в своих колониях в качестве пчелиного хлеба для кормления пчел в клетках. Поместите рамы запечатанного рабочего выводка из колоний HB и EHB в отдельные клетки для выхода из клеток в помещении с окружающей средой, установленной при температуре от 32 до 24 градусов Цельсия и относительной влажности 40%. Когда рабочие появляются в возрасте примерно 24 часов, мы устанавливаем 12 клеток для биопроб из плексигласа и добавляем либо 100 вновь появившихся пчел EHB, либо рабочих пчел HB в каждую клетку, размещают секцию сотов с известным количеством европейского BBR или EBB, или африканизированного хлеба B или клеток A, B, B в каждой клетке для создания следующих условий обработки.

При кормлении HB A-B-E-H-B кормом A B, BAHB Fed EBB и EHB Fed EBB добавляют флаконы с водой и 30% раствор сахарозы, приготовленный по объему, в каждую клетку. Заменяйте флаконы с сахарным сиропом и водой ежедневно в течение 11-дневного периода исследования.

Образец 10, вновь появившиеся рабочие EHB и A HB перед помещением их в клетки. Называйте их «нулевой день B» и пусть они послужат базовым уровнем для концентрации гемолимфийного белка. Удалите 10 пчел из каждой клетки после того, как они питались отливом или В, В в течение четырех, семи и 11 дней.

Поместите живых пчел на отдельные соколиные трубки и установите на пакеты со льдом. Выберите подвыборку из четырех пчел для анализа концентрации гемолимфийного белка после отбора проб пчелами на 11-е сутки, подсчитайте количество сотовых ячеек, которые еще содержат пергу. Удалите остатки перги из ячеек в каждой клетке и храните в отдельных микроцентрифужных пробирках по клеткам.

Храните образцы BBR при температуре минус 80 градусов Цельсия до тех пор, пока они не будут проанализированы на pH растворимого белка и содержание аминокислот. Чтобы провести анализ белка, возьмите шесть образцов пыльцы и образцы EBB и A BB из каждой клетки. Смешайте 20 мг пыльцы или bbr с одним миллилитром 0,1 молярного вихря PBS в течение 10 секунд и центрифугируйте при 571,2 G в течение одной минуты.

Извлеките образец надосадочной жидкости объемом 25 микролитров и поместите его в лунку 96-луночного полистирольного планшета с плоским дном, E-I-A-R-I-A. Повторите каждый образец в трех лунках. Нагрейте конец капиллярной трубки объемом 20 микролитров и потяните нагретый участок до образования игольчатого острия.

Затем извлеките гемолимфу из пчел, собранных из каждой клетки, вставив капиллярную трубку в правую боковую часть грудной клетки в районе места крепления крыла. При необходимости соберите дополнительную лимфу, вставив ту же трубку в мембрану между проводниками брюшной полости. Добавьте один микролитр гемолимфы к девяти микролитрам 0,1 молярного PBS.

Используйте набор для анализа белка Брэдфорда и следуйте инструкциям производителя, чтобы определить общее количество растворимого белка. Анализ концентраций проводят в соответствии с текстовым протоколом, как показано на этих графиках, как значение pH, так и концентрация белка были ниже в bbr, чем в пыльце. Как EHB, так и A HB потребляли больше A BB, чем EBB, как показано здесь.

Уровни растворимого белка в гемолимфе A HB были значительно выше, чем у EHB, независимо от типа BBR, которые они потребляли. Эти различия в уровнях гемолимфы происходили, несмотря на то, что EHB и A HB потребляли одинаковое количество каждого типа bbr. Из 10 аминокислот, которые были незаменимы для медоносных пчел, все, кроме гистамина, были обнаружены в пыльце.

В большинстве случаев концентрации аминокислот, измеренные в пчелином хлебе, были выше, чем в пыльце. Например, концентрации лейцина и тионина были примерно на 60% выше в bbr по сравнению с пыльцой, а концентрации валина были примерно на 25% выше. Уровни глутамина аланина аспарагиновой кислоты также были выше в BBR, чем в пыльце.

Концентрации аминокислот не сильно различались между А, В, В и ЭББ, за исключением фенилаланина и цистина. Уровни фенилаланина были примерно в два раза выше в А BB по сравнению с ЭББ или пыльцой. Концентрации цистина были ниже при ЭБВ по сравнению с А, В, В или пыльцой.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как оценивать концентрацию белка в перге, пыльце и гемолимфе медоносной пчелы. С помощью этих методов вы можете определить, влияют ли генетические факторы или факторы окружающей среды на хранение и потребление продуктов питания и концентрацию гемолимфийного белка.