Экспертиза Rapid допамина Dynamics с быстрого сканирования циклической вольтамперометрии Во интраоральных Tastant администрации в Пробудитесь крыс

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы измерить субсекундную реакцию дофамина на плотный пероральный вкус. Это достигается путем создания оральных катетеров, электродов сравнения и электродов из углеродного волокна, необходимых для хирургических процедур, и последующей записи с помощью быстрой циклической V-образной телеметрии. Вторым шагом является хирургическая имплантация оральных катетеров, внутричерепного электрода и направляющей канюли для электрода из углеродного волокна.

Через неделю микроэлектрод из углеродного волокна может быть опущен в прилежащее ядро для регистрации изменений внеклеточного высвобождения дофамина в ответ на внутриротовую доставку вкусов. Последним шагом после регистрации является калибровка электрода и использование метода компонентного анализа для выделения данных, содержащих информацию о дофамине. В конечном счете, комбинированное использование внутриротового вкуса и доставки и быстрой циклической воловой телеметрии используется для отображения изменений в реакции дофамина на татен за доли секунды.

Можно выделить два основных преимущества этой комбинированной методики перед существующими методами. Во-первых, быстрая IC-фотометрия имеет высокое временное разрешение, а во-вторых, внутриротовая доставка татена сводит к минимуму движения, которые крысе необходимо совершить для получения татина, и позволяет нам лучше изолировать реакцию дофамина на татин. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности с изготовлением орального катетера.

Тем не менее, построение хорошего и платного орального катетера обеспечит плотное прилегание катетера между щекой и верхними коренными зубами, а также повысит вероятность успешного эксперимента. Для подготовки записывающего электрода сначала отсасывают углеродное волокно диаметром семь микрон T six 50 в капилляр из силикатного стекла бора с внутренним диаметром 0,4 миллиметра. Затем расположите капилляр в поляре вертикального электрода, сначала потяните с нагревателем, установленным на 55,0, и выключите магнит, затем отрегулируйте по мере необходимости.

Потянув пипетку под микроскопом, разрежьте открытое углеродное волокно так, чтобы оно выступало за пределы стекла на 75–100 микрон. Волокно в стакане должно быть плотно запечатано, в противном случае выбросьте препарат. Далее снимите изоляцию с половины трехдюймового провода 30 калибра, нанесите термоусадку, чтобы закрепить электрод на микроманипуляторе.

Затем нанесите на проволоку тонкий слой серебристой краски, пока краска еще влажная. Вставьте провод в открытый конец электрода и прикрепите его к углеродному волокну. Проверьте этот контакт под микроскопом.

Возьмите электрод в микроманипулятор и закрепите его термоусадкой. Поместите подготовленный электрод из углеродного волокна в IPA не менее чем на 10 минут для очистки поверхности электрода и повышения последующей чувствительности к допамину. После снятия электрода с IPA промойте углеродное волокно водопроводной водой, чтобы удалить IPA.

Затем подготовьте электрод сравнения из серебряной проволоки диаметром 13 миллиметров с шестимиллиметровой сеткой из серебра и хлорида серебра диаметром 0,4 миллиметра, отрежьте часть проволоки без зацепки и припаяйте ее к золотому штифту. Затем нанесите на припой эпоксидную смолу. Затем окуните сетчатую часть в сополимерную кислоту пять раз.

Дайте ему высохнуть в течение 30 минут на воздухе между погружениями после последнего погружения. Дайте ему высохнуть на воздухе в течение ночи. На следующий день.

Выпекайте сетчатую часть проволоки при температуре 120 градусов Цельсия в течение часа. Чтобы сделать ротовой катетер, сначала разрежьте его. Полиэтилен 100 трубка на шестисантиметровые сегменты.

Затем сделайте небольшой плоский диск на одном из сегментов трубки, расплавив конец и прижав его к плоской холодной поверхности в центре диска. Используйте иглу 18 калибра, чтобы создать отверстие. Присоедините другой конец сегмента трубки к тупому концу иглы 18 калибра.

Затем с помощью дырокола изготавливается несколько шестимиллиметровых в диаметре, толщиной 3,18 миллиметра кусочков политетрафторэтилена. Затем в центре этих дисков создайте отверстие, тем самым сделав из дисков шайбы. Разрежьте шайбу в трапециевидной форме, чтобы помочь закрепить их во время имплантации моляров.

Чтобы завершить установку катетера, полностью протолкните иглу, прикрепленную к полиэтиленовой трубке, через шайбу и сдвиньте шайбу заподлицо с трубкой. Выполнение следующего протокола занимает около 75 минут. Начните с подготовленной к операции крысы и откройте ей рот с помощью ватной палочки.

Затем введите иглу на канюле в ткань между щекой и первым верхним моляром так, чтобы игла выходила сразу за ушами и медиально к ушам. Затем двигайтесь вверх по канюле и закрепите шайбу на коренных зубах, чтобы закрепить катетер на открытой игле. Наденьте шайбу и плотно поднесите ее к разрезу.

Закрепите эту шайбу на месте. Обрежьте трубку так, чтобы над головой крысы оставалось от двух до четырех сантиметров. Затем, используя ту же технику, введите катетер в другую часть рта.

После этого поместите крысу в стереотаксическую рамку и просверлите три отверстия для канюль и электродов, чтобы сделать записи в положении ядра прилежащего ядра. Направляющая канюля на 1,2 миллиметра спереди и на 1,4 миллиметра. Боковая торема.

Опускайте канюльный аппарат до тех пор, пока пластиковое основание не будет промываться с черепом. Поместите электрод сравнения в полусферу, перпенатеральную к направляющей канюле. Опустите референс примерно на два миллиметра ниже твердой мозговой оболочки.

Затем расположите стимулирующий электрод на расстоянии 5,2 миллиметра сзади и на 1,0 миллиметра латерально. Для воздействия на вентральную тегментальную область. Опустите стимулирующий электрод на 8,0 миллиметров ниже твердой мозговой оболочки.

Затем закрепите компоненты винтами и цементом и обеспечьте послеоперационный уход. Перед проведением эксперимента всегда проверяйте проходимость пероральной канюли, вводя 200 микролитров воды, и наблюдайте, чувствует ли крыса вкус воды. Манекен не должен находиться в пределах двух миллиметров от места записи.

Теперь прикрепите и стабилизируйте головной столик к стимулятору, имплантированному в ВТА, а затем опустите записывающий электрод в ядро прилежащего ядра. Теперь, следуя текстовому протоколу, создайте набор данных для обучения. Всегда подождите не менее двух минут, но до четырех-пяти минут между стимуляциями, чтобы обеспечить везикулярную перезагрузку.

Самым важным этапом эксперимента является получение высококачественного электрода. Если фон представляет собой характерную округлую форму на восходящей фазе – это хороший электрод. Если округлая форма мала или близко соответствует приложенной форме волны, попробуйте использовать другой электрод.

Если фон находится прямо в том месте, где он смещен, примените смещение к приложенной осциллограмме в положительном направлении с шагом 0,1 вольта. После того, как обучающая выборка будет сгенерирована на месте записи, соберите данные, вводя 200 микролитровых болюсов татена каждые одну-три минуты в течение 25 инфузий. Затем подождите не менее 30 минут и таким же образом настояйте следующий вкус.

FSCV в сочетании с внутриротовой имплантацией катетера использовалась для изучения того, как сахароза и повышение AIT Татена модулируют фазовое высвобождение дофамина в ядре прилежащего ядра до инфузии Татен Электрическая стимуляция, обозначенная красной полоской VTA, привела к устойчивому увеличению фазового высвобождения дофамина в ядре прилежащего ядра после того, как была получена тренировочная выборка: 6,5-секундные инфузии 200 микролитров сахарозы, обозначенные красной полоской, образовались в повышении в Ток обозначен белой стрелкой. Это произошло при окислительном потенциале дофамина, который обозначен белой пунктирной линией, преобразующей данные в график зависимости концентрации от времени. После PCA проверили, что повышенный ток в ответ на вкус является результатом повышения концентрации дофамина.

Еще один татин ментол был введен во время записи FSCV в прилежащее ядро Повышенная концентрация дофамина также наблюдалась после инфузии ментола. Этот метод может быть комбинирован с другими формами поведения, такими как соревновательное и аверсивное павловское и оперное обусловливание, чтобы ответить на вопросы о субсекундной дофаминовой сигнализации во время этих процессов.