Эффективная генерация специфических для нокина репортеров hiPSC Neural Lineage с использованием системы CRISPR/Cas9 и Cas9 Double Nickase

10.5K просмотров

Процитировано: 5

14:46 мин

28 мая 2015 г.

10.3791/52539-v

28 мая 2015 г.

10.5K просмотров

* These authors contributed equally

Инструменты редактирования генома, такие как система CRISPR (Clustered Regular Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-ассоциированная), значительно повысили эффективность нацеливания на гены в индуцированных плюрипотентных стволовых клетках человека (hiPSCs). В данной рукописи описан протокол генерации специфичного для линии репортера hiPSC с использованием гомологичной рекомбинации с помощью системы CRISPR/Cas.

Больше видео

7

Chapters in this video

0:05

Title

1:54

Design of Targeting Vectors

2:41

Design and Vector Construction of sgRNAs for CRISPR/Cas9 System

5:20

Design and Construction of Cas9n Double Nickase sgRNA

8:06

Evaluation of sgRNAs by T7 Endonuclease1

11:03

In Silico Prediction of Potential Off Target Sites

12:32

Results: The T7E1 Assay is Used to Evaluate sgRNAs Prior to Transfecting hiPSCs

13:56

Conclusion

Related Videos