Нейронной активности распространения в разложенном гиппокампа подготовки с проникающим Micro-электрода массив

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы внедрить процесс разворачивания гиппокампа грызуна и помещения препарата плоской ткани на проникающую микроэлектродную решетку. Для записи. Это достигается путем выделения гиппокампа мыши от половины ее мозга.

Второй шаг заключается в развертывании изогнутой структуры гиппокампа с помощью инструментов, изготовленных на заказ. Далее развернутый гиппокамп переносится в записывающую камеру и помещается на записывающий массив. Заключительным этапом является удаление развернутого гиппокампа из массива после эксперимента.

В конечном счете, метод индивидуального нормализационного картирования используется при анализе данных, чтобы показать распространение нейронной активности, зарегистрированное проникающей микроэлектродной матрицей. Ну и главное преимущество этой методики в том, что она позволяет регистрировать нейронную активность в двух направлениях: поперечном и продольном. Для того чтобы увидеть реальное распространение нервной активности, вам понадобится неповрежденный гиппокамп, развернуть вмятины и лечь плашмя в записывающую камеру, после чего распространение будет происходить как в поперечном, так и в продольном направлениях.

И мы смогли затем выяснить скорость распространения ткани. Мы были активны в двух направлениях и смогли изучить механизмы распространения, в частности, нессинаптические механизмы. Мы смогли увидеть, как активность распространяется с помощью этой синаптической передачи с этими щелевыми соединениями, и из-за скорости мы знаем, что это не диффузия.

Так что сейчас мы пытаемся выяснить реальные механизмы этого распространения. Как правило, люди, плохо знакомые с этой техникой, испытывают трудности из-за сложных процедур раскрытия гиппокампа и помещения плоской ткани на эту проникающую микроэлектродную решетку без повреждения ни ткани, ни матрицы. Чтобы начать эту процедуру, поместите голову мыши в ледяную кислородную сахарозу.

Спинномозговая жидкость использует пару тонких ножниц для удаления кожи черепа. Далее разрежьте череп по средней линии и двум концам возле височной доли. Затем очистите отрезанный череп по направлению к бокам головы.

Для того чтобы обнажить мозг, аккуратно удалите мозг из черепа с помощью шпателя. После этого поместите мозг на ледяную хирургическую сцену, накрытую влажной фильтровальной бумагой. Удалите мозжечок с помощью охлажденного льдом лезвия.

Впоследствии разделите два полушария, разрезав среднюю линию мозга. Затем поместите два разделенных полушария в стакан, наполненный ледяной сахарозой. Спинномозговая жидкость пузырится с 95% кислорода и 5% углекислого газа.

Перенесите одно полушарие в ледяную стадию, накрыв фильтровальной бумагой. Положите вокруг мозга обычные бумажные полотенца или фильтровальную бумагу, чтобы впитать лишний раствор. После этого с помощью двух пипеток из полированного огнем стекла отделите кору головного мозга от центральной части мозга, чтобы обнажить гиппокамп.

Затем нанесите две-три капли ледяного ликвора на ткань и удалите лишний раствор. Разрежьте соединения с корой головного мозга на двух концах гиппокампа. Затем рассеките гиппокамп из мозга с помощью инструментов из полированного огнем стекла.

Затем разделите весь гиппокамп стороной вверх и борозду гиппокампа вниз Быстро нанесите две-три капли ледяной сыворотки снова на ткань и удалите лишний раствор вокруг нее. Затем с помощью инструмента для полированного огня стекла переверните весь гиппокамп. Чтобы обнажить борозду, используйте ледяное лезвие, чтобы обрезать септальный и височный концы гиппокампа.

При необходимости вставьте в борозду изготовленную на заказ стеклянную иглу и разрежьте дорожку волокна от DG до примерно трех. Затем с помощью металлической проволочной петли натяните ДГ и разверните гиппокамп. Весь процесс операции обычно длится около двух минут.

Нанесите еще две-три капли ледяной сахарозы А ликвора на ткань и удалите лишний раствор вокруг нее. Затем обрежьте края развернутого гиппокампа ледяным лезвием. Перенесите препарат в камеру рекуперации, заполненную нормальным A CSF и пузырчатую 95% кислорода, 5% углекислого газа при комнатной температуре в течение одного часа, прежде чем перенести его в записывающую камеру.

В этой процедуре наполните одну бутылку обычной спинномозговой жидкостью, а другую бутылку четырьмя пузырьками AP A CSF. Растворы с 95% кислорода, 5% углекислого газа с начала экспериментов. Используйте трехклапанный разъем для управления тем, какое решение будет выбрано во время эксперимента.

Далее подсоедините вакуумную трубку к выходному отверстию камеры. Чтобы удалить раствор в контейнер для пыли, нагрейте трубопровод перед подачей раствора в камеру записи и поддерживайте его температуру 35 градусов Цельсия. После закрытия входного и выходного отверстий записывающей камеры используйте изготовленную на заказ стеклянную пипетку, чтобы перенести развернутый гиппокамп в записывающую камеру.

Под микроскопом развернутый гиппокамп боковой стороной вниз на три участка указывает в сторону и на одно поле в сторону исследователя осторожно отсасывает раствор в камере с помощью вакуумной пипетки от края записывающей камеры до тех пор, пока камера не высохнет и ткань не ляжет на решетку. Затем осторожно поместите изготовленный на заказ тканевый анкер поверх ткани, чтобы удерживать развернутый гиппокамп на массиве. Наполните камеру записи несколькими каплями раствора.

Постепенно открывайте входное и выходное отверстия, чтобы отрегулировать скорость потока примерно до двух капель в секунду в камере для внутривенного введения. Инкубируйте ткань в регистрирующей камере с нормальным А ликвором в течение примерно одной минуты. Затем поменяйте местами растворы.

Нанесите на четыре АД растворенный А ликвор и отрегулируйте расход должным образом. Инкубируйте ткань в четырех растворенных A ликворах в течение 5-10 минут перед регистрацией. Чтобы извлечь ткань из PMEA, управляйте тканевым якорем с помощью микроманипулятора и постепенно поднимайте якорь из записывающей камеры.

Закройте входное и выходное отверстия, чтобы остановить поток. В камере записи с помощью маленькой кисти приподнять уголок ткани. Если ткань не плавает в растворе, используйте вакуумную трубку для осторожной сушки камеры, пока ткань все еще находится на решетке.

Затем осторожно откройте входное отверстие, чтобы постепенно наполнить камеру, и закройте входное отверстие, чтобы остановить поток. Когда записывающая камера заполнится, с помощью маленькой кисти приподнимите уголок салфетки. Снова. Если ткань плавает в растворе, используйте вакуумную трубку, чтобы отсосать ткань.

Откройте поток на входе и вакуум на выходе. Промойте систему дистиллированной водой и высушите ее. Это пример спонтанной активности, индуцированной 100 микромолярными четырьмя AP A CSF, зарегистрированной с одного из микроэлектродов, расположенных в базальной дендритной области, с отношением сигнал/шум 34,9 децибел.

А вот увеличенные активности в красном прямоугольнике. Это исходные данные с другого микроэлектрода, расположенного ближе к соматам, с соотношением сигнал/шум 27,2 децибела. Вот еще один пример записи, полученной с электрода, расположенного внутри соматического слоя.

В этом примере отношение сигнал/шум составляет 18,53 децибел, а здесь приведен базовый уровень шума, записанный с микроэлектрода. Базовая линия обычно имеет пиковое значение от 150 до 200 микровольт, а импеданс одного электрода составляет около одного-двух мегаом. В этом видео показано распространение нейронов, записанное с помощью массива, а затем обработанное методом индивидуальной нормализации.

При анализе данных все распространение по всей ткани длится около 100 миллисекунд после этой процедуры. Другие методы, такие как нейровизуализация в развернутом гиппокампе in vitu, также могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как движение нейрофокусов. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как развернуть гиппокамп на месте, препарировать плоскую ткань на микролекционном массиве.