Использование электроретинограммы чтобы оценить функцию в грызунов Retina и защитные эффекты дистанционного конечностей ишемического прекондиционирования

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы проверить зрительную функцию у крыс с нормальными легкими травмами и крыс с дистанционными ишемическими предварительными и легкими травмами с помощью ЭРГ и тем самым продемонстрировать защитные эффекты отдаленной ишемии конечностей на сетчатку. Это достигается к первому наступлению темноты, адаптации крыс за 12 часов. Второй шаг заключается в регистрации базовой адаптированной к темноте ЭРГ с использованием светодиодных световых стимулов и цифрового усилителя.

Затем подвергните крыс стрессу на сетчатку, подвергая ее воздействию яркого непрерывного света. Заключительным этапом является сравнение записей ERG крыс с легким повреждением и крыс с предварительной ишемией отдаленных конечностей, а также измерение реакций фоторецепторов, наблюдаемых в зубце А, и внутренних реакций сетчатки, наблюдаемых в зубце В. В конечном счете, адаптированная к темноте ЭРГ используется для оценки скотопической зрительной функции.

Таким образом, этот метод может дать представление о нейропротекции на основе дистанционной ишемии. Он также может быть применен для других форм травм сетчатки и фармакологических исследований, а также для скрининга животных с дефектами зрения. Чтобы начать эту процедуру, адаптируйте крысу в темноте в течение 12 часов, затем обезболите ее инъекцией коктейля кетамина ксилазина.

Как только животное потеряет сознание, проверьте глубину анестезии, слегка ущипнув его за ногу, чтобы убедиться, что рефлекторная реакция отсутствует. Далее нанесите каплю атропина и каплю проксметана на его роговицу. Нарезаем на черную нить длиной 10 сантиметров.

Затем сделайте петлю из нитки и проденьте петлю над экватором глаза, слегка туго завязав, чтобы натянуть глазное яблоко немного вперед и сохранить роговицу чистой от века. Впоследствии нанесите на роговицу глазные капли Кармера. Расположите крысу на впитывающей подстилке на верхней части нагретой платформы так, чтобы ее голова была помещена в отверстие ганцфельда.

Затем вставьте внутренний температурный зонд в прямую кишку, чтобы убедиться, что температура тела поддерживается на уровне 37 градусов по Цельсию, и закрепите температурный зонд на месте, прикрепив его шнур к хвосту крысы. Далее введите электрод сравнения подкожно в заднюю конечность. Надежно поместите отрицательный электрод во рту, чтобы он не выскользнул изо рта.

Прикрепите соединительный провод к устойчивой поверхности. Затем расположите положительный электрод над центром роговицы и убедитесь, что электрод мягко касается роговицы с помощью микрометрового манипулятора. Как только электроды будут на месте, задрапируйте установленное отверстие, включая ганцфельд и животное, непрозрачным материалом, чтобы сохранить адаптацию к темноте.

В комплектации программного обеспечения. Установите частоту дискретизации в два килогерца с пятью миллисекундами для предварительного отбора проб и временем сбора от 100 до 1000 миллисекунд. Затем установите полосовые фильтры на частоту от одного до 1000 Гц и убедитесь, что выборка запускается в течение 100 миллисекунд после вспышки.

Теперь проверьте базовый уровень записи. На нем не должно быть посторонних шумов, но должен быть виден шум усилителя и дыхательные колебания. Затем запустите тестовую вспышку.

Это типичная форма сигнала ЭРГ в ответ на тестовую вспышку. Когда это будет сделано, дайте животному восстановиться в темноте в течение 10 минут. Затем повторно проверьте базовую линию на стабильный сигнал.

Впоследствии начните запись В конце сеанса записи проверьте стабильность температуры тела животного. Снимите электроды, затем снова нанесите полимер Кармера на роговицу. После этого дайте животному восстановиться на грелке, пока оно не станет полностью подвижным и активным, прежде чем вернуться в помещение для животных.

На этом рисунке показано измерение волны и волны B от адаптированной к темноте ЭРГ. Показанный здесь след записан от роговицы темного приспособленного глаза до яркой вспышки света, полученной в то время, обозначенное как T ноль. Амплитуда волны измеряется от базовой линии до первой впадины.

Амплитуда волны В измеряется от впадины волны А до следующего положительного пика. Задержка измеряется от артефакта стимула до точки интереса на трассе, такой как впадина волны А. Необработанный сигнал ЭРГ увеличивается с увеличением светового стимула.

Волна становится очевидной при скорости примерно 0,4 log scotopic candela секунд на метр в квадрате, и парадигма двойной вспышки была использована для разделения смешанного сигнала ERG на конусные и стержневые отклики. После освоения. Эту методику можно сделать в течение 30 минут.