Водный лабиринт Морриса Тест: Оптимизация для штамма мыши и тестирования окружающей среды

Целью этой процедуры является выявление когнитивных дефицитов у мышиной модели болезни Альцгеймера с помощью протокола Морриса по водному лабиринту, разработанного для использования с фоновым штаммом 1 2 9 6 FBB. Это достигается путем предварительной акклиматизации мышей к задаче по смягчению дефицита производительности, вызванного стрессом. Второй шаг заключается в использовании задачи с визуальной платформой, в которой платформа поднимается на один дюйм над ватерлинией, для оценки визуального и моторного функционирования.

Затем проводятся испытания скрытой платформы, где платформа погружается на глубину пяти миллиметров под поверхность воды. Последним шагом является использование пробных проб, в которых платформа удаляется, для оценки пространственной опорной памяти и определения типа используемой стратегии поиска. В конечном счете, эта индивидуальная процедура водного MA позволяет оценить пространственное обучение и память в широко используемой мышиной модели болезни Альцгеймера.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, будут испытывать трудности из-за необходимости оптимизации процедур тестирования, таких как количество используемых обучающих испытаний и зондов на основе фоновой деформации мышиной линии и среды, в которой тестируются мыши. Эта часть процедуры приучает мышей к вытягиванию входа и удаления. Для начала поставьте ящик так, чтобы он был поднят на удобную высоту и наполните его двумя литрами воды при температуре 21 градус Цельсия и до уровня примерно в один сантиметр.

После того, как мышей привезли в комнату для тестирования, извлеките испытуемого из клетки, проверьте идентификацию субъекта, а затем пометьте хвост нетоксичным перманентным маркером, чтобы отличить его от мышей, которые не прошли через эту процедуру. Поместите мышь в стакан для перевода примерно на пять секунд. Затем аккуратно высыпьте мышь из стакана в бассейн для предварительной обработки времени мыши в бассейне на 20 секунд.

По прошествии времени аккуратно положите совок перед мышью, не наклоняя его. Позвольте мыши войти и исследовать совок При необходимости поощряйте мышь встать на совок, осторожно проводя совок под мышью, медленно поднимая ее. Следите за тем, чтобы не напугать мышей совком.

Повторяйте эти процедуры для каждой мыши в клетке один раз в день в течение 10 дней. После каждого животного подбирайте фекалии и подстилку из бассейна, используя сачок, который служит мензуркой для переноса между клетками. Проводите видимое обучение в первый, второй и третий дни тестирования по шесть попыток каждый день и примерно 10 минут между каждым испытанием.

Сначала настройте программное обеспечение для отслеживания производительности мыши и создайте таблицы выполнения в соответствии с инструкциями в текстовой части протокола. После того, как программное обеспечение будет настроено, обустройте комнату, сначала повесив шторы так, чтобы любые пространственные подсказки были скрыты. Затем установите ванну, наполнив ее водой из-под крана при температуре 21 градус Цельсия.

Используйте термометр для того, чтобы температура воды оставалась в пределах одного градуса от этой температуры. На протяжении всего тестирования. Поместите платформу, на которой установлен флаг, достигающий высоты 13 сантиметров и размером 4,5 на 4,5 сантиметра с выбитым на ней жирным S-образным символом, в первом заранее определенном месте ванны так, чтобы она возвышалась над поверхностью воды примерно на один дюйм.

Теперь возьмите первую мышь из клетки. Проверьте идентификацию объекта, отметьте хвост перманентным маркером нужного цвета и поместите его в стакан для перевода. Аккуратно поместите мышь в ванночку.

Запустите таймер и убедитесь, что программное обеспечение для слежения отслеживает животное. Подождите мышью до двух минут, чтобы найти платформу. Как только мышь обнаружит платформу, подождите ей 20 секунд на платформе.

Если животное не может найти платформу в течение двух минут, возьмите мышь и поместите ее на платформу на 20 секунд. После 20 секунд на платформе снимите мышь с платформы, как это делается во время акклиматизационной тренировки, и поместите ее в отапливаемую клетку, выстланную бумажными полотенцами и согретую примерно до 31 градуса Цельсия грелкой и тепловой лампой в течение 30 секунд. Затем перенесите мышь в клетку для хранения только с грелкой, но без тепловой лампы для восстановления между испытаниями.

Очистив ванну от мусора с помощью сачка, повторите эти действия для каждой мыши в группе. Когда каждая мышка будет закончена, первая попытка, переместите платформу во второе заранее определенное место. Выполняйте тренировки на скрытой платформе с четвертого по 10-й день после развешивания штор.

Как и раньше, стратегически размещайте кии на шторах. Убедитесь, что сигналы крупные и содержат контрастные цвета для лучшей видимости, а также установлены расстояние и высота, на которых они видны мышам из ванны. Настройте программное обеспечение в соответствии с инструкциями в письменной части протокола.

Затем установите ванну, предварительно наполнив ее водой так, чтобы платформа находилась примерно на пять миллиметров ниже поверхности воды. Расположите платформу в заданном месте. Местоположение платформы останется неизменным для тестирования в течение всех дней и испытаний.

It.It важно изменить место старта, чтобы у животных не развилась непространственная, негиппокампальная моторная стратегия. Чтобы решить лабиринт, используйте нетоксичную белую краску умеренной температуры, чтобы сделать воду непрозрачной. Делайте это для того, чтобы верхняя часть платформы была невидима с уровня глаз животного во время плавания.

Определив и отметив мышки перед этим, аккуратно высыпьте мышку в лабиринт так, чтобы ЛОР был обращен к стене. Каждая мышь будет размещена в одном и том же стартовом месте для уникального испытания. При первом отпускании мыши запустите таймер и встаньте в месте, где тестер не будет хорошо виден мышам.

Как только животное достигнет платформы, дайте ему остаться на платформе в течение 15 секунд, чтобы сориентировать свое пространственное положение в комнате. Если мышь не находит платформу в течение 60 секунд, аккуратно возьмите мышь и положите ее на платформу. Проведя 15 секунд на платформе, уберите мышь из лабиринта и верните ее в нагретую клетку.

Предварительно очистив лабиринт от мусора, повторите эти процедуры для оставшихся в группе мышей. Таким образом, в течение четвертого и девятого дней тестирования проводите четыре испытания обучения скрытой платформе в день с интервалом примерно 20 минут между каждым испытанием. Проведите испытания щупов перед обучением платформе на шестой, седьмой и восьмой день, а также перед заключительным испытанием щупа.

На 10-й день проведите испытания зонда аналогично обучению скрытой платформе, за исключением того, что в лабиринте нет платформы. Отпустите мышь из заданной точки выпуска и дайте ей 60 секунд поплавать в лабиринте После испытания щупа на 10-й день дополнительные испытания во время пробных проб не проводятся. Используйте программное обеспечение для отслеживания животных, чтобы отслеживать длину пути животного, процент времени, которое животное проводит в каждом квадранте лабиринта, и количество раз, когда животное проплывает над ранее созданной платформой областью.

Откройте вкладку «Экспериментальный список» и получите измерения на вкладках «Анализ данных» и «Водный лабиринт». Экспортируйте данные непосредственно в таблицу Excel. Затем проанализируйте данные в соответствии с инструкциями в письменной части протокола.

41 мышь TP 3 0 1 L, содержащих человеческий ген P 3 0 1 LTL, и 46 контрольных мышей были протестированы с использованием этого протокола в возрасте примерно 6,5 месяцев. Это соответствует трехмесячной экспрессии Tau P 3 0 1 L в трансгенных соединениях. Каждая группа содержала примерно равное количество самцов и самок по длине пути.

Обучение на невидимой платформе не отличалось между контрольной группой и мышами TP 3 0 1 L. Это отсутствие различий указывает на то, что контрольная группа и tau P 3 0 1 LM не различаются по зрительным или локомоторным способностям, и что дефицит производительности при скрытом пробном тестировании может быть связан с ухудшением памяти. Тем не менее, во время обучения на скрытой платформе, TP 3 0 1 LM продемонстрировал значительно большую длину пути на всех учебных блоках.

Наконец, контроль улучшился в четырех испытаниях зонда. В то время как Tau P 3, 0, 1 L мыши не контролировали, мыши лучше умели использовать пространственную стратегию для решения поставленной задачи и лучше научились локализовать платформу в целевой зоне. При адаптации этой процедуры для использования с другими линиями мышей важно оценить скорость обучения элементов управления, определить количество необходимых тренировочных попыток удара и определить, когда следует ввести первую пробную пробу.