Всего животного визуализации и проточной цитометрии методы анализа антиген-специфических CD8 + Т-клеточные ответы после вакцинации наночастиц

Общая цель данного эксперимента заключается в синтезе и характеристике липидных наночастиц вакцины и оценке их способности вызывать антиген-специфическую экспансию цитотоксических Т-лимфоцитов in vivo. Это достигается за счет инженерии, имитирующей межбислойные, сшитые многослойные везикулы или I ЦМВ, загруженные антигеном и адъювантом, для вакцинации наивных мышей. Адоптивно переносится с люциферазой, экспрессирующей антиген, специфичными CD восемью положительными Т-клетками.

На втором этапе экспансия антиген-специфичных CD восьми положительных Т-клеток оценивается с помощью визуализации in vivo на всем животном. Мононуклеарные клетки периферической крови, собранные у иммунизированных животных ICMV, затем окрашивают флуоресцентно меченными тетрамерами и анализируют с помощью проточной цитометрии для количественной оценки частоты эндогенных антиген-специфичных CD восьми положительных Т-клеток в системном компартменте. В конечном счете, биолюминесцентная визуализация может быть использована для отслеживания расширения антиген-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов в ответ на вакцинацию наночастицами.