Вывод для взрослых фибробластов человека и их прямое преобразование в расширения нейронной клетки-предшественники

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы сократить классический подход Yamanaka IPS путем прямого создания индуцированных нейронных клеток-предшественников из биопсии кожи пациента для терапевтического применения. Это достигается путем предварительного проведения пункционной биопсии у пациента для получения первичных клеток фибробластов, которые могут быть культивированы in vitro. Второй шаг заключается в расширении и последующем инфицировании культивируемых фибробластов вирусами, которые кодируют перепрограммирующие факторы для индуцирования транс-дифференцировки.

Затем предполагаемые преобразованные индуцированные нейронные клетки-предшественники или колонии INPC должны быть тщательно отобраны путем визуальной валидации и впоследствии изолированы путем ручного отбора примерно через 20 дней после заражения. Последним шагом является моноклональное, расширение ИПК в нейроиндукционной среде, в конечном итоге направленная дифференцировка in vitro, а также использование иммунофлуоресцентной микроскопии, чтобы показать, что пациенты, владеющие непосредственно преобразованными ПИПК, способны дифференцироваться в нейрональные, а также глиальные клетки, что делает их практически неограниченным источником для биомедицинских приложений. Преимущество этого метода прямой конверсии перед существующими методами, такими как получение индуцированных синих мощных стволовых клеток по типу Яманаки и их последующая дифференцировка, является двояким.