А "Пациент-лайк" Ортотопическая Сингенная мышь Модель гепатоцеллюлярной карциномы Метастазы

Метастатического распространения рака является основной причиной смертности от онкологических заболеваний. Мы предоставляем углубленный описание нашего выживания методологии хирургии для создания "пациента, как" ортотопическая сингенными модели мыши систему для изучения механизмов метастазирования в солидных опухолей органов.

Общей целью данной процедуры является создание у пациента моделируемой системы Orthotopic Syngeneic для изучения механизмов метастазирования при гепатоцеллюлярной карциноме. Это достигается путем предварительной подготовки клеток гепатоцеллюлярной карциномы мыши к имплантации. На втором этапе брюшная полость сингенного животного-реципиента вскрывается, и клетки осторожно вводятся в правую долю печени.

В конечном счете, успешность и воспроизводимость данной методологии рекомендует ее для широкого использования для выяснения биологических механизмов метастазирования гепатоцеллюлярной карциномы. Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими методами, такими как модели опухолей ксенотрансплантатов мышей, заключается в том, что наша система синтетических генетических моделей опухолей позволяет исследовать роль иммунного ответа в метастазировании опухоли. Вместе со мной эту процедуру будет демонстрировать Мишель Наду, студентка бакалавриата из нашей лаборатории. Чтобы подготовить клетки к имплантации, начните с промывания 60-70% конфлюентной культуры клеток гепатоцеллюлярной карциномы два раза пятью миллилитрами PBS.

Инкубируйте культуру клеток с двумя миллилитрами трипсина при температуре 37 градусов Цельсия. Через пять минут подсчитайте клетки и разведите их в соотношении пять умножить на 10 до пятой клетки на миллилитр PBS. Затем переложите 100 микролитров аликвот клеток в одну стерильную микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра на каждую мышь и поместите клетки на лед.

Перед началом хирургической процедуры подтвердите надлежащий уровень анестезии на пальце ноги. Ущипте, нанесите мазь на глаза здоровой взрослой мыши весом от 16 до 20 граммов и побрейте примерно в одном дюйме области вокруг средней линии живота животного. Затем наденьте латексные перчатки и несколько раз промойте открытые участки кожи мыльным дезинфицирующим скрабом, после чего прополощите стерильное полоскание PBS в течение примерно пяти минут.

Когда кожа будет подготовлена, выбросьте перчатки и наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты. Обеспечьте внешний источник тепла для предотвращения обезболивающего гипотермии во время процедуры, а затем наложите хирургическую ленту на животному, конечности и хвост, чтобы зафиксировать мышь в лежачем положении. Далее сделайте прямой разрез непосредственно ниже ксифоса грудины, и используйте стерильный самоудерживающийся хирургический ретрактор для вскрытия брюшной полости.

Когда печень станет видимой, отсадите одну аликвоту клеток в одномиллилитровый шприц, оснащенный иглой 20 калибра, и медленно и осторожно введите все 100 микролитров клеток гепатоцеллюлярной карциномы в правую долю печени. После извлечения иглы приложите стерильный ватный тампон не менее чем на одну минуту, чтобы остановить кровотечение. Затем с помощью рассасывающегося шва закрывают подкожную клетчатку с последующим закрытием кожи.

Хирургическими зажимами очистите рану еще одним дезинфицирующим скрабом и подкожно введите 100 микролитров обычного физиологического раствора. Затем сразу после операции пересадите мышь в чистую клетку без компаньонов и с бумажной подстилкой не менее чем на 24 часа. Эти мышиные печени BSY были имплантированы с пятью умною на 10 к шести по одному ME. Клетки гепатоцеллюлярной карциномы мыши, как только что продемонстрировано.

Клинические клинические признаки развития гепатоцеллюлярной карциномы наблюдались через 63 дня, на что указывает стрелка у одной мыши. На поверхности печени наблюдалась поверхностная опухоль с некоторым прикреплением к брюшной стенке. Легкие этой мыши также показали аномальную морфологию, демонстрируя участки видимого некроза кровоизлияния.

У второй мыши печень выглядела крайне ненормальной, и аномалия очень сильно напоминала поверхностную опухоль в качестве ожидаемого контроля. У мышей, которые не были имплантированы, не развивались опухоли ни в печени, ни в легких. После освоения эта ортотопическая синтетическая генетическая модель мыши может стать хорошей платформой для выяснения биологических механизмов метастазирования и гепатоцеллюлярной карциномы.