Spot исправить ткани Every Time в нескольких тканевых блоков

Общая цель этой процедуры заключается в создании инструмента, который поможет в идентификации тканей в многотканевых парафиновых блоках. Это достигается путем предварительного соединения HistoGel с тканевым маркирующим красителем для формирования ярко окрашенной гелевой пробки. Вторым шагом является обработка и встраивание цветных пробок HistoGel в соответствии со стандартными методами обработки и внедрения тканей.

Затем используется биопсийный перфоратор для удаления маленьких цилиндров. Это метки ориентации образца или пятно. Последним шагом является встраивание пятна в многотканевый блок с указанием местоположения пятна и каждого образца для удобства использования.

В конечном счете, пятно обеспечивает четкую визуальную подсказку для ориентации образца и идентификации в тканевых микрочипах и многотканевых блоках. Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими методами, такими как наложение швов или асимметричные стержни, заключается в том, что пятно не изменяет ткань и обеспечивает гибкость в расположении образцов для оптимального анализа. Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы получили запросы от исследователей на объединение образцов тканей от нескольких животных в один парафиновый блок, чтобы сэкономить деньги и упростить анализ.

Перемешайте смесь в вихре не менее одной минуты до полного растворения. Затем загрузите девять миллилитров гидроксиэтилгеля в коническую трубку объемом 15 миллилитров и нагрейте ее в микроволновой печи при мощности 30%. Взбивайте тепло с шагом в десять секунд, пока гель полностью не растает.

Теперь соедините расплавленный раствор технологического геля и красителя BSA в одной конической пробирке объемом 15 миллилитров и тщательно перемешайте ее пипеткой. Затем перемешайте раствор и переложите его в холодильник на несколько часов для застывания. После затвердевания удалите твердый развилат в геле, осторожно отпустив его узким шпателем.

Нарежьте пробку на отрезки толщиной пять миллиметров. Не используйте закругленные концы. Перенесите три-шесть срезов в гистологическую кассету и погрузите их в 70% этанол, меняйте раствор 70% этанола каждые два-четыре часа и не менее трех раз в течение 24 часов, пока пробки полностью не обезвожены.

Они выщелачивают часть маркирующего красителя в раствор этанола. Использование изменений свежего этанола первоначально помогает смыть часть излишков красителя, в результате чего пробка становится чище, которая с меньшей вероятностью будет окрашиваться. Затем переведите кассеты на 80% этанол, а затем на 95% этанол на один час в каждой ванне.

Краситель может вытекать из гелевой пробки, что может повлиять на другие ткани и жидкие реагенты в автоматизированном тканевом процессоре. Таким образом, настоятельно рекомендуется ручное обезвоживание. Тем не менее, автоматизированная обработка не менее эффективна.

Завершите обезвоживание тремя стирками в 100% этаноле в течение часа каждая. Очистите образцы, погрузив их в атические углеводороды или ксилолы три раза на один час в каждой ванне. Теперь проникните в секции с тремя часовыми ваннами.

В расплавленном парафине. Заделайте обработанные срезы как обычно, а когда блок достигнет комнатной температуры, с помощью иглы для дермального пробивки сделайте точечные сердцевины. Из одного блока можно сделать 22 миллиметровых ядра или даже больше 1,5-миллиметровых ядер.

Начните с создания схемы, которая обозначает желаемое расположение и идентичность всех отдельных частей ткани, которые будут вставлены вместе, а также местоположение пятна. Подготовьте экземпляр, чтобы держать его под рукой. Для успешного использования меток ориентации образца требуется четкая и понятная карта биообразцов, которая точно детализирует все биообразцы, их местоположение и положение относительно места.

После обработки кусочков ткани разложите их на станции закладки. Согласно диаграмме ориентации тканей, правильная ориентация имеет решающее значение. Также важно, чтобы ядро пятна было выше, чем все кусочки ткани, которые будут встроены в блок.

Завершив обустройство тканей, заделайте пятна. Держите каждое место вертикально с помощью щипцов, пока парафин не застынет, чтобы он не опрокинулся. Минуты или двух должно хватить.

Для ручного набора ТМА заполните форму ТМА расплавленным парафином. По мере того, как форма остывает, аналогичным образом прикрепите пятна к краям массива. Теперь разрез и окрашиваем участки пятном.

Используя стандартный подход, здесь делают секции в пять микрон. Чтобы поместить секции на горки, поместите их на водяную баню при температуре 40 градусов Цельсия, а затем перенесите на положительно заряженные стеклянные горки. После прикрепления к предметным стеклам сушите их при температуре 60 градусов Цельсия не менее 20 минут.

Теперь предметные стекла можно окрашивать вручную или с помощью автоматизированной системы окрашивания. При рутинном окрашивании h и d специальные красители или пятна иммуногистохимии появлялись в виде круглого ярко окрашенного цвета. в парафиновом блоке и во всех парафиновых секциях.

Пятна позволили легко ориентироваться и идентифицировать ткани в многотканевых блоках, содержащих похожие ткани разных людей и групп лечения. При использовании в ткани пятна микрочипа позволяли использовать каждое ядро для ценных образцов тканей, и пятна можно было легко выбрать рядом с ядром тканевого микрочипа. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить, что точное и четкое документирование биообразца и места в блоке имеет решающее значение для его успешного использования.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как легко создавать и использовать метку ориентации образца в качестве вспомогательного средства идентификации тканей в многотканевых парафиновых блоках.