Визуальный вызванных потенциалов Запись в крысиной модели экспериментальной зрительного нерва демиелинизация

Общей целью данного эксперимента является мониторинг демиелинизации в зрительном нерве in vivo. Это достигается путем вживления микроэлектродов в зрительную кору. В качестве второго шага в зрительный нерв вводится микроинъекция лиина, которая вызывает очаговое поражение демиелинизации.

Затем можно сделать визуально вызванные потенциальные записи. В конечном счете, регрессионный анализ показывает сильную линейную корреляцию между визуально вызванной потенциальной задержкой задержки и объемом. В этом видео будет продемонстрирована наша техника регистрации визуальных вызванных потенциалов у крыс.

С помощью имплантированных электродов черепа мы также продемонстрируем технику фокальной демиелинизации зрительного нерва с помощью техники микроинъекций. Все эксперименты проводятся здесь, в нашей лаборатории на медицинском факультете Университета Маккуори. Эта техника будет продемонстрирована Нитином Чичи, нашим аспирантом Начать обезболивание взрослой крысы старше 12 недель с помощью внутрибрюшинной инъекции кетамина и меина перед началом операции.

Проверьте на отсутствие рефлексов отмены. Будьте готовы вводить 10% дозы кетамина по мере необходимости, чтобы справиться с любыми рефлексами, которые должны вернуться к животному во время операции. Затем побрейте кожу в месте операции, а затем положите животное на грелку, чтобы завершить подготовку.

Счистите кожу повидон-йодом, задрапируйте животное и нанесите офтальмологическую мазь. Также обязательно поддерживайте асептику с помощью стерильных инструментов. Чтобы начать операцию, сделайте продольный разрез кожи по средней линии головы.

Затем очистите соединительную ткань, чтобы получить хорошее обнажение черепа. Далее, с помощью микродрели, осторожно вставьте в отверстия небольшие отверстия для бора, на семь миллиметров позади bgma и на три миллиметра вдали от средней линии. Имплантат вкручивают электроды через череп и примерно на 0,5 миллиметра в кору головного мозга.

Затем имплантируйте винтовой электрод сравнения на среднюю линию, три миллиметра рострально к BGMA, по мере необходимости. Нанесите стоматологический цемент для покрытия и фиксации винтовых электродов. Наконец, зашите закрытую кожу.

Электроды можно оставить открытыми, чтобы не нужно было открывать кожу заново для каждой записи. Теперь быстро введите нестероидный противовоспалительный препарат или НПВП, или опиоидный анальгетик, прежде чем животное оправится от анестезии. В завершение обработайте кожу мазью с антибиотиком.

Поместите животное в клетку для восстановления с грелкой и постоянно следите за ним, пока оно не станет полностью амбулаторным. Затем дайте ему восстановиться не менее недели. Перед записью VEP подготовьте животное к операции, как описано выше, и сделайте разрез кожи от одного до 1,5 сантиметра над орбитой глаза, глаз тонкими ножницами по радужной оболочке.

Вскрыть подкожную клетчатку и получить доступ к полости орбиты. Затем под стереоскопом вскрыть капсулу конъюнктивы и передних сухожилий. Далее втяните экстраокулярные мышцы и внутриглазничные слезные железы.

Чтобы обнажить около трех миллиметров зрительного нерва вокруг зрительного нерва, используйте офтальмологическое лезвие, чтобы открыть слои твердой мозговой оболочки и паутинного вещества в продольном направлении. Затем вставьте стеклянную микропипетку, прикрепленную к шприцу Гамильтона, в нерв, расположенный на два миллиметра позади глазного яблока. В течение 30 секунд введите болюс лиина с красителем, чтобы завершить процедуру.

Зашиваем разрез кожи. Применяйте мазь с антибиотиком для предотвращения инфицирования. Переместите животное на грелку и следите за ним, пока оно не выздоровеет.

Обезболив животное и подготовив шкуру, как и раньше, перенесите его там в темное помещение. Поддерживайте температуру своего тела в пределах половины градуса от 37 градусов по Цельсию, используя систему гомеотематических одеял и температурный зонд, находясь под наблюдением в темноте. Адаптируйте животное в течение пяти-30 минут.

Через полчаса расширьте зрачки 1%-ными каплями IDE IDE. Затем с помощью ножниц и щипцов. Откройте кожу над черепом и получите доступ к предварительно установленным двум винтовым электродам с ЧПУ.

Подсоедините винты к измерителю импеданса. Затем измерьте и поддерживайте импеданс электрода ниже пяти килоом. Теперь подсоедините винт над контралатеральной зрительной корой стимулируемого глаза.

Далее вставьте игольчатый электрод в хвост для поверхности земли. Теперь поместите откалиброванный мини-стимулятор Ганцфельда на кожу вокруг век, чтобы улучшить изоляцию глаз. Затем подайте фотостимуляцию с помощью 100 вспышек на частоте в один герц с фильтром низких частот на частоте в одну герц и в полосе пропускания высоких частот.

Фильтруйте на частоте 100 герц. После завершения зашить кожу и держать животное на согревающей подушке, чтобы оно восстановилось после анестезии. Возможны повторные записи от нескольких раз в неделю до одной раз в несколько недель.

Вмешательство, трассировки VEP показывают, что существует значительная задержка в задержке N one. После инъекции зрительного нерва ежедневно делались записи, чтобы продемонстрировать воспроизводимость. Частичное поражение зрительного нерва в результате демиелинизации могло наблюдаться на срезах тканей, окрашенных в цвет люксального фаст-синего цвета.

После измерения объема поражения стала очевидна корреляция между задержкой латентности и размером поражения. Этот метод может быть использован для индуцирования поражений в зрительном нерве и для корреляции этих поражений с изменениями в ВП, он может быть использован в качестве модели фокальной демиелинизации. Поскольку размер индуцированного поражения довольно вариабельен, важно коррелировать изменения гистологически.