Простой и Компьютерный обонятельных тестирование для мышей

Общая цель следующего эксперимента — проверить врожденную обонятельную дискриминацию, обонятельные предпочтения или избегание и обонятельную чувствительность у мышей. Это достигается путем воздействия на мышь нового аттрактанта или апеллянта, а также нейтрального запаха, которым является вода. Тем временем видеокамера записывает поведенческий сеанс.

Далее видео анализируется на изображении J с использованием предоставленных макросов для получения времени, проведенного в запахе и параметрах воды. Результаты показывают предпочтительность или избегание запахов по сравнению с водой среди различных генотипов на основе апостериорного компьютерного анализа. Основное преимущество ольфакторного тестирования по сравнению с использованием специальной арены и обонятельной области заключается в том, что в нем используется знакомая арена, поэтому он быстро завершается и прост в настройке.

Кроме того, он использует недорогое оборудование, демонстрирующее процедуру Эммануэля Абри, по словам студента в моей лаборатории. Для этого эксперимента использовались самцы в возрасте от трех до пяти месяцев, черный C 57, шесть диких типов и трансгенные мыши. В этой демонстрации используются две нокаут-линии и элементы управления однопометником.

Для экспериментальных арен используйте чистые стерилизованные клетки для мышей с трехсантиметровой подстилкой. Далее подготовьте настройку камеры. Расположите его на высоте 58 сантиметров над полом клетки на специальном креплении для штатива.

Сделайте несколько отметок на столешнице, чтобы обозначить, где должно быть положение клетки. Для центрального изображения настройте камеру на запись видео с разрешением 320 x 240 пикселей с частотой примерно 15 кадров в секунду. Для приготовления испытуемый должен хранить концентраты каждого аромата в растворителе, когда это возможно.

Для теста предпочтений приготовьте 10% массовый раствор арахисового масла в арахисовом масле. Для теста на избегание используйте раствор 98% метилмасляной кислоты. Для проведения теста на чувствительность соберите мочу самки мыши той же породы за один-два дня до теста.

Удерживайте самку животом над сеткой клетки и собирайте капли ее мочи в пластиковую посуду. Соберите образцы у нескольких самок для нормализации. Для индивидуальной вариативности вытащите все образцы в пробирку объемом 1,5 миллилитра и храните ее при температуре минус 20 градусов по Цельсию.

Для начала приучайте животных к тому, что посадите их в очищенную клетку и дайте им исследовать. В течение пяти минут обстановка в испытательной клетке должна быть такой же, как в домашней клетке. Повторяйте фазу привыкания один раз в каждый день тестирования, когда период привыкания закончится, начните запись и наберите пипеткой 60 микролитров приятного аромата.

В этом случае арахисовое масло нанесите на одну стенку на противоположную стену, пипеткой наберите такое же количество воды. Нейтральный аромат, нанесите капли примерно по 10 сантиметров вверх по каждой стене. Теперь дайте животному исследовать в течение двух минут, а затем остановите запись и верните мышь в ее домашнюю клетку.

Повторите этот процесс с каждой тестируемой мышью. Всегда используются новые испытательные клетки. Через три-пять дней после выполнения всех тестов предпочтений проведите тест на избегание с использованием нового испытательного каркаса.

Для каждой мыши проведите тест на избегание. Как и в случае с тестом на привлекательность, только замените приятный запах запахом избегания, который представляет собой две метилмасляные кислоты. Для теста на чувствительность одна клетка может быть повторно использована между испытаниями для одной и той же мыши.

Поэтому отметьте водную сторону клетки и приготовьтесь к очистке коротких стенок бумагой, пропитанной на 70% этанолом, между испытаниями. В день эксперимента сделайте четыре концентрации мочи с десятикратным рядом разведения. Используя двойную дистиллированную воду, как в тесте на избегание, приучайте каждое животное к тестовой клетке в течение пяти минут.

Затем сначала подвергните каждую мышь воздействию мочи в максимальном разведении, которое составляет один к 10 000. Во время записи нанесите разбавленную мочу на тестовую клетку и нанесите воду на противоположную стенку. Как и в случае с другими тестами, позвольте животному исследовать.

На две минуты. После этого пересадите животное в чистую клетку для мышей. После того, как все животные испытали самую низкую концентрацию, очистите все стенки испытательной клетки и повторите тест на каждой мыши, используя следующую наиболее концентрированную мочу.

Продолжайте этот процесс до тех пор, пока чистая моча не будет проверена. После сбора всех данных для эксперимента откройте видео на изображении J для корректировки и обработки, детали которых предоставлены в текстовом протоколе с использованием описанных протоколов. Две разные линии выбивания.

Группы В и С сравнивали с контрольной группой А. Ненаправленный Т-критерий Стьюдента с равной или неравной дисперсией сравнивает время, проведенное между запахом и водой в пределах генотипов. Сравните поведение генотипов с помощью односторонней inova. В тесте на избегание реакция на отталкивающий запах двух метилмасляной кислоты была такой же, как и ожидалось для групп А и В, но группа С не продемонстрировала поведения избегания этого запаха.

В тесте на чувствительность порог притяжения был получен путем вычитания времени, проведенного с мочой, из времени, проведенного с водой, предпочтительной мочой для воды в разведении от одного до 1000. В то время как обе экспериментальные группы, В и С нуждались в 100 большей концентрации, чтобы продемонстрировать предпочтение. После того, как вы освоите эту технику, ее можно будет выполнить за пару часов, если она будет выполнена правильно, после этой процедуры можно будет использовать другие методы, такие как обонятельное обучение и угасание, для исследования обонятельной пластичности и обучения.