Тромботическая хода модели, основанной на переходных гипоксии мозга-ишемии

Общая цель данной процедуры заключается в создании простой модели тромботического инсульта со стабильным инфарктом мозга и оценке защитного действия терапии тканевым активатором плазминогена или TPA. Сначала демонстрируется индукция транзиторной церебральной гипоксии-ишемии или THI путем двойного лигирования правой общей сонной артерии или RCCA и воздействия на лигированное животное гипоксических условий для индукции тромбоза. После 30 минут воздействия гипоксии два узла на сонной артерии развязывают.

На заключительном этапе показаны введение препарата TPA и оценка эффектов проводимой терапии. В качестве альтернативы можно исследовать кровоток в головном мозге в режиме реального времени, процесс формирования тромба и степень обструкции сосуда. Данный метод позволяет индуцировать ишемический инсульт у взрослых мышей, используя их собственную систему коагуляции.

Мы планируем использовать эту модель для изучения механизмов регуляции мозгового кровотока при гипотетических условиях ишемии. Кроме того, она будет использована для исследования способов совершенствования тромболитической терапии. Визуальная демонстрация данного метода имеет критическое значение, так как в процессе индукции патологии мозга может быть затруднительно поддерживать надлежащую температуру тела и равномерное дыхание.

Этапы индукции. Минимум за 15 минут до начала процедуры. Поместите операционный стол на грелку, установите температуру 37 °C и положите на стол валик для шеи, изготовленный из цилиндра шприца объемом 3 мл. Настройте систему гипоксии на подачу 2% изофлурана в смеси 7,5% кислорода и 92,5% азота, и отрегулируйте контроллеры температуры.

Поместите самца мыши линии C 57 black six в возрасте от 10 до 13 недель и массой от 22 до 30 г на операционный стол. После подтверждения состояния анестезии с помощью щипка за пальцу нанесите мазь на глаза животного. Растяните четыре конечности вдоль шеи, зафиксируйте их, обернув и закрепив медицинской лентой.

Затем с помощью депиляционного крема удалите шерсть на шее животного и очистите область хирургического вмешательства. Переместите операционный стол под диссекционный микроскоп и сделайте разрез кожи длиной 0,5 сантиметра в правой части шеи по срединной линии. С помощью тонкого пинцета раздвиньте трахею и мышцы, чтобы обнажить правую общую сонную артерию, и заведите две предварительно отрезанные шелковые нити 5-0 под артерию.

Будьте осторожны, чтобы отделить сонную артерию от блуждающего нерва; наложите две предварительно заготовленные развязываемые шелковые нити 5-0 на правую общую сонную артерию (RCCA). Затем используйте монофиламентные нейлоновые нити 4-0 для зашивания кожи и быстро перенесите мышь в систему гипоксии. Наденьте лицевую маску на нос и рот животного и введите ректальный датчик, чтобы в течение всего периода подачи гипоксии поддерживалась температура тела 37.5 °C.

Отрегулируйте тепловые лампы через 30 минут. Перенесите мышь обратно на операционный стол и развяжите две лигатуры. Затем закройте рану тканевым клеем и верните мышь в клетку, наблюдая за животным до его полного восстановления.

В качестве альтернативы для изучения мозгового кровотока во время и после гипоксически-ишемического воздействия можно использовать метод лазерной спекл-контрастной визуализации. Поместите животное в положение на животе. Затем выполните срединный разрез кожи головы длиной один сантиметр, чтобы обнажить, но не вскрывать череп.

Затем немедленно перенесите животное на имэйджер кровотока и начните запись церебрального кровотока. Просматривайте изображения церебрального кровотока в соответствии с инструкциями производителя, используя программное обеспечение FLPI для анализа выбранных областей в режиме реального времени. Чтобы оценить эффекты терапии TPA, введите препарат животным внутривенно в хвостовую вену в соответствующее время после транзиторной односторонней окклюзии сонной артерии и гипоксии.

Затем количественно определите объем инфаркта с помощью окрашивания TTC in vivo через 24 часа после транзиторной церебральной гипоксической ишемии. На следующий день используйте вибротом для получения срезов толщиной 1 мм. Наконец, с помощью цифровой микроскопии получите серию из четырех изображений срезов мозга и используйте соответствующее программное обеспечение для анализа изображений, чтобы рассчитать объем инфаркта как отношение площади белого инфарктного участка к площади неповрежденного контрлатерального полушария.

В рамках данной процедуры могут быть использованы и другие методы тромболизиса для оценки их эффективности и клинического потенциала. Этот метод открыл исследователям в области ишемического инсульта путь к изучению тромболитической терапии головного мозга.