Подготовка и характеристика индивидуальных и множественной лекарственной Loaded Физически Захваченный Полимерные мицеллы

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы описать пошаговый процесс приготовления и определения характеристик лекарственных препаратов для клеток перед их оценкой в заболеваниях, представляющих интерес. Это достигается путем подготовки клеток My методом литья растворителем для получения воспроизводимых клеток My для исследования. На втором этапе оценивается стабильность и размер загрузки клеток, что определяет способность моих клеток загружать и сохранять клинически значимые концентрации.

Затем определяется скорость высвобождения лекарственного препарата из клеток My для того, чтобы убедиться, что мои клетки обладают соответствующими характеристиками высвобождения in vitro, прежде чем оценивать стабильность in vivo. Результаты показывают, что воспроизводимо сгенерированные стабильные клетки могут обеспечить платформу для доставки лекарств при различных заболеваниях на основе представленных здесь методов оценки. Основное преимущество этого метода или существующих методов, таких как равновесная нагрузка или методы диализа, заключается в том, что миозины могут быть получены гораздо быстрее с воспроизводимой нагрузкой и размером препарата.

Применение этого метода распространяется на терапию или диагностику различных болезненных состояний, потому что наноразмерные лекарства предлагают возможности, выходящие за рамки обычных форм. Как правило, люди, которые только начинают, могут испытывать трудности с этими методами, даже если они просты, потому что все еще проводя исследования высвобождения, вы не можете реально оценить взрывной эффект. Сначала Шаман Дьюк, мой аспирант, и Дипа, мой коллега, будут демонстрировать эту процедуру. После взвешивания растворите лекарственные препараты и полимер в 0,5 миллилитрах ацетонитрила, затем переложите раствор в пятимиллилитровую колбу с круглым дном и образуйте тонкую полимерную пленку, распределяемую лекарственным средством, путем выпаривания раствора лекарственного полимера ацето под пониженным давлением с помощью ротационного испарителя.

После этого регидратируйте препарат полимерной пленкой с 0,5 миллилитрами деионизированной воды, предварительно нагретой до 50 градусов Цельсия и аккуратно встряхивайте колбу на водяной бане при температуре 50 градусов Цельсия для формирования клеток мышей. Добавьте раствор в пробирку центрифуги и вращайте при 7, 200 перегрузках G в течение трех минут. Наберите раствор иглой и отфильтруйте полученный раствор Micella в новую центрифужную пробирку объемом 1,5 мл с использованием нейлонового фильтра толщиной 0,2 микрона для удаления любых нерастворенных лекарств или загрязняющих веществ На этом этапе проведите анализ ВЭЖХ в обратно-фазовой ВЭЖХ с восьмиколоночной колонкой, уравновешенной при 40 градусах Цельсия в режиме Сократа, с подвижной фазой испытания ацетила I и разбавьте водой свежеприготовленные миклетки в исследовании ace eye при соотношение один к 100 перед анализом методом ВЭЖХ в обратной фазе для определения начальной загрузки лекарственного средства.

После хранения неразбавленных клеток при комнатной температуре в течение 48 часов подготовьте свежие разведенные образцы для повторной оценки с помощью ВЭЖХ в обратной фазе и определения стабильности препарата в моих клетках в течение 48 часов. Отслеживайте пиковые значения DTX и DVR на 227 и 279 нанометрах с временем удержания 1,7 и 5,7 минуты соответственно. Представьте данные в виде среднего значения плюс-минус стандартного отклонения загрузки препарата.

Затем разбавьте только что приготовленные клетки и деионизированную воду в соотношении один к 20 до конечной концентрации полимера 1,5 миллиграмма на миллилитр. Передайте раствор ветеринарному врачу для измерения динамического рассеяния света. Измерьте интенсивность гелий-неонового лазера при 173 градусах, чтобы определить рассеяние.

Представьте данные в виде среднего размера Z плюс или минус стандартное отклонение вместе с индексом полидисперсии или PDI распределения. После приготовления ДДМ, как описано ранее, загрузите 2,5 миллилитра клеток my в трехмиллилитровую диализную кассету с молекулярной массой 7000 граммов на моль. Поместите кассету в 2,5 литра 10 миллимолярного фосфатного буфера pH 7,4 в течение следующих интервалов.

Отведите 150 микролитров раствора и замените 150 микролитрами свежего буфера. Меняйте буфер каждые три часа, чтобы обеспечить условия синхронизации. Проанализируйте образцы с помощью ВЭЖХ в обратной фазе для определения кривой концентрации препарата.

Подогнали данные о высвобождении препарата на основе простой модели диффузии с однофазной экспоненциальной ассоциацией с использованием статистического программного обеспечения D-T-X-E-V-R, и DDM показал аналогичную стабильность в PEG 2000 block PLA 1800 или PEG 2000 block PLA 2200 в течение 48 часов. Все мои элементы сохранили 97% или более от первоначальной нагрузки в течение 48 часов при комнатной температуре. Основываясь на результатах динамического рассеяния света, все мои клетки показали одномодальное распределение со значениями PDI менее 0,2.

Исходя из данных, выделение DTX из отдельных mycell и DDM составило примерно 60% в течение 48 часов. Высвобождение EVR из отдельных клеток и DDM составило 60% и 50% соответственно. Время, необходимое для 50% высвобождения препарата из отдельных клеток и DDM, а также данные о пригодности представлены здесь.

Полезность подгонки кривой для всех моих клеток, кроме EVR индивидуальных, мои клетки выше 0,950, что означает, что предположение о высвобождении первого порядка является хорошим приближением для объяснения высвобождения лекарств из отдельных моих клеток и DDM После освоения эти методы могут быть рутинно применены на библиотеке лекарств и полимеров в качестве моих клеток в течение нескольких часов или недели. Во время этой процедуры важно помнить о полной характеристике клеток перед доступом к клеточной культуре или животным моделям после этих процедур. Другие системы доставки, такие как липосомальная система доставки, также могут быть оценены или охарактеризованы, чтобы ответить на вопрос о роли системы доставки лекарств в эффективности лечения.

После просмотра этого видео вы должны иметь хорошее представление о том, как готовить и характеризовать лекарственную нагрузку на мои клетки, прежде чем оценивать их в заболевании. Состояние интереса.