Непредсказуемая Хронический стресс протокол Мягкий за подстрекательство депрессивные симптомы, поведенческие изменения и негативных последствий для здоровья в Грызуны

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы подвергнуть штамм грызунов воздействию ряда хронических, непредсказуемых стрессоров, которые определяются случайным образом, так что животное не может эффективно компенсировать развитие депрессивных симптомов при растущей тяжести. Это достигается за счет ежедневного воздействия одного из возможных стимулов, которые призваны вызывать стресс, но не причинять вреда или вреда животному. Животные подвергаются воздействию стрессоров пять-шесть дней в неделю в течение восьми недель через равные промежутки времени, животные контролируются на предмет развития депрессивных симптомов путем оценки кодового статуса и реакции животных на навязывание стимулов, таких как тест с сахарозой.

Результаты показывают, что введение хронических рандомизированных неразрешимых стрессоров в среду обитания животного препятствует способности животного адаптироваться и вызывает развитие депрессивных симптомов в течение нескольких недель. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области хронических заболеваний, например, как симптомы хронической депрессии могут привести к негативным последствиям для здоровья в других тканях или системах органов. Впервые идея использования этого метода пришла нам в голову, когда мы узнали о глубоких сопутствующих взаимосвязях между прогрессирующими сердечно-сосудистыми заболеваниями и риском заболеваний в наших клинических популяциях, а также о сопутствующих проявлениях глубоких депрессивных заболеваний.

Демонстрировать эту процедуру будут г-н Стивен Брукс и г-жа Кайла Брэннон, докторанты наших лабораторий. Для того, чтобы вырастить домашних мышей с легким стрессом в отдельных клетках и подвергать мышей воздействию одного или двух стрессоров в день в течение как минимум трех-четырех часов для каждого стрессора, следующий список стрессоров должен быть выполнен по рандомизированному графику для стрессора влажной подстилки. Намочите подстилку, налив от 10 до 20 унций чистой воды в стандартную клетку.

Подержите мышь во влажной клетке в течение трех-четырех часов. Уберите подстилку из клетки на три-четыре часа, после чего переведите мышь в другой стрессор, требующий пустой клетки, или поместите ее в чистую клетку со свежей подстилкой. Наклоните свободные клетки подстилки примерно на 45 градусов в течение трех-четырех часов с помощью прочного предмета, который будет оставаться на месте, когда мышь перемещается по клетке Для этого стрессового фактора измените обычные 12-часовые световые 12-часовые темные циклы на последовательность 30-минутных периодов, которые в общей сложности составляют восемь часов.

Перенесите мышь из домашней клетки в клетку соседней мыши, которая была удалена на трехчасовой период стресса. Снимите подстилку с клетки и добавьте воды на глубину около 0,25 дюйма для мышей, а затем оставьте мышь примерно на четыре часа. Кратко высушите мышь мягким полотенцем по завершении выдержки в воде.

Подвергните мышей воздействию хищников, запахов или звуков, добавив в клетку случайно распределенные пучки или от 10 до 20 миллилитров мочи естественного вида хищников, и оставьте мышей на три-четыре часа. В качестве альтернативы воспроизводите рычание или хищные звуки естественных видов хищников вблизи клеток в течение трех часов в конце каждого ежедневного периода стресса. Поместите мышей в чистые клетки и ежедневно возвращайте их в помещение.

Осматривайте каждое животное на предмет развития ран или язв, которые могут потребовать ветеринарной помощи, раз в неделю, попросите двух исследователей пройти обучение по оценке кода груминга. Осмотрите каждое животное и присвойте еженедельный кодовый балл по шкале от нуля до единицы. Сложите балл для каждого отдельного человека, присвоив каждому из восьми участков тела индивидуальный балл «ноль», означающий «чистый», или «один», означающий «грязный».

Голова, шея, спинная шерсть, брюшная шерсть, хвост, четыре конечности, задние конечности и область гениталий. Поместите животное в чистую клетку, выстланную ватным диском или полотенцем, чтобы подстилка не прилипала к его шерсти. Затем распылите 10% раствор сахарозы на голову и спинную шерсть каждого животного и записывайте общее поведение по уходу в течение пяти минут.

Измерьте латентность и частоту активности по уходу за лицом в течение этого времени. Латентность — это промежуток времени между первым распылением и началом ухода за лицом, а частота должна измеряться как количество раз ухода за лицом. После восьми недель непредсказуемого хронического легкого стресса наблюдались значительные изменения как в поведении, так и в физиологических последствиях у грызунов с хроническим стрессом по сравнению с их контрольными штаммами, не испытывавшими стресса.

У мышей развились депрессивные симптомы после непредсказуемого хронического легкого стресса, и у них наблюдалось прогрессирующее снижение показателей груминга шерсти. Такое заметное ухудшение физического состояния шерсти свидетельствует о снижении активности по уходу за шерстью и может сопровождаться отсутствием мотивации. Последние данные свидетельствуют о том, что существует существенное количественное расхождение в реакциях на непредсказуемый хронический легкий стресс между самцами и самками мышей.

В частности, данные свидетельствуют о том, что у самок мышей, подвергшихся такому же стрессовому протоколу, как и у самцов того же возраста, развиваются более серьезные поведенческие реакции на протокол, чем у самцов. После этой процедуры могут быть легко применены другие методы, которые соответствуют специфической функции органа, чтобы ответить на дополнительные вопросы, например, как наличие хронических депрессивных симптомов может повлиять на нормальную функцию в интересующей системе органов. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать различные шаги и процедуры в протоколе UCMS для постепенного создания условий для роста симптомов депрессии в вашей модели грызуна.