Фотоактивированные Локализация микроскопия с Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC-PALM)

Общая цель этого метода микроскопии — визуализировать белки и белковые взаимодействия в масштабе одной молекулы и нанометров. Таким образом, этот метод может помочь нам ответить на некоторые ключевые вопросы в области биологии, такие как молекулярные взаимодействия в онкогенных сигнальных процессах. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она чувствительна, специфична и предлагает разрешение в одну молекулу и нанометр.

Демонстрировать процедуру будет доктор Тахан, старший научный сотрудник моей лаборатории: После клонирования RA и RAF R-B-D-P-A-M Cherry один фрагментирует упаковку на вирусные частицы и заражает клетки U2 OS в соответствии с текстовым протоколом. Для подготовки образца для визуализации планшетом примерно в 5,5 раз по 10 до четвертой стабильной экспрессии клеток на лунку из восьми лунок стеклянной нижней камеры влейте 350 микролитров фенола красного свободного DMEM. Используйте свежий паральдегид с глутаральдегидом для фиксации клеток и после замены фиксатора на PBS или буфер для визуализации вихря 100 нанометровых частиц золота и добавьте 35 микролитров на лунку для отслеживания дрейфа ступени во время визуализации.