Быстрый Фенотипическая Неврологические система подсчета очков для оценки прогрессирования заболевания в SOD1-G93A мышиной модели СЛА

Общая цель этой процедуры заключается в быстрой и надежной оценке нервно-мышечной функции мышей SOD One G 93 a путем ежедневной оценки функции их задних конечностей с использованием простой фенотипической неврологической системы оценки. Это достигается путем предварительного наблюдения за задними конечностями мышей, подвешивая их за хвост. Второй шаг — позволить мышам ходить, наблюдая за их походкой.

Далее мышей кладут на бок, чтобы проверить наличие или отсутствие пишущего рефлекса. Последним шагом является выполнение анализа данных путем подгонки данных нейрологических баллов когорт мышей в модель порядковой логистической регрессии. В конечном счете, наша фенотипическая неврологическая система оценки используется для оценки прогрессирования заболевания в SOD one G 93, мышиной модели LS, с целью определения эффективности терапевтических вмешательств.

Основное преимущество этого метода перед всеми другими существующими методами заключается в том, что он быстрый, простой, надежный и минимально стрессовый для мышей. Применение этого метода распространяется на терапию неотропного бокового склероза или ЛС, поскольку он позволяет быстро оценить терапевтические вмешательства на наиболее распространенной мышиной модели заболевания. Визуальная демонстрация имеет решающее значение, поскольку метод неврологической оценки трудно освоить, потому что неврологические различия могут быть незначительными.

Начните с размещения самцов мышей SOD одной G 93 A так, чтобы на один домик в клетке была одна мышь, самки SOD — одной мыши G 93 A до двух на клетку. Обеспечьте обогащение окружающей среды для мышей в виде пластиковых домиков. Обеспечьте мышей едой и водой в Lido record.

Масса тела для всех мышей и исследований одновременно. Ежедневная масса тела является чувствительным индикатором прогрессирования заболевания и любого недомогания, которое может возникнуть в результате хронического медикаментозного лечения. Во время исследования ежедневно оценивайте неврологические показатели каждой мыши с помощью трех последовательных тестов.

Внимательно следите за тем, как разграничить баллы в фенотипических точках перехода очень сложно в первом тесте. Для проверки подвешивания хвоста держите мышь примерно в 1,5 дюймах от основания хвоста над проволочной верхней частью домашней клетки. Наблюдайте за функцией задних конечностей в течение одной-двух секунд и повторите тест три раза.

Для теста по ходьбе. Поместите мышь на чистую поверхность, которая обеспечивает некоторое сцепление и имеет расстояние ходьбы не менее 25 сантиметров. Позвольте мыши пройти до 75 сантиметров, наблюдая за ее ga.

Для теста на письменный рефлекс положите мышь на бок и используйте секундомер, чтобы измерить время, необходимое для самостоятельного письма без посторонней помощи с обеих сторон. Требуется только одна пробная версия этого теста. Оцените каждую заднюю конечность, левую или правую независимо по шкале от нуля до четырех на основе коллективного результата трех фенотипических тестов наблюдения.

Нулевая оценка синуса указывает на то, что мышь является предсимптомной. Во время испытания на подвешивание задние конечности полностью выгибаются в сторону от боковой средней линии и остаются в этом положении в течение двух секунд или дольше. Также во время теста по ходьбе наблюдается нормальная походка.

Присвойте балл один балл, указывающий на появление первых симптомов. Если во время испытания на подвешивание задняя конечность либо опущена к боковой средней линии, либо частично свернута к боковой средней линии с дрожанием или аномально растопырена каким-либо другим образом. В дополнение к только что показанным симптомам теста на суспензию, походка мыши, которая должна получить один балл, должна по-прежнему казаться нормальной или немного ниже.

Присвойте балл два, указывающий на начало парсиса. Если во время испытания на подвешивание задняя конечность частично или полностью разрушена, а кроме того, во время теста на ходьбу задние конечности используются для движения вперед. Тем не менее, пальцы ног либо сгибаются вниз по крайней мере два раза во время 75-сантиметровой ходьбы, либо любая часть стопы тянется, чтобы набрать два балла.

Мышь также должна быть в состоянии писать сама после того, как ее поместили с обеих сторон в течение 10 секунд. Оценка синуса от трех баллов указывает на паралич. Если во время теста на подвешивание у мыши наблюдается ригидный паралич задней конечности или минимальные движения суставов, мышь все еще может демонстрировать движение вперед во время теста при ходьбе, но не за счет использования задних конечностей.

В дополнение к трем баллам по синусу, мышь должна быть в состоянии писать самостоятельно после того, как ее поместили с обеих сторон в течение 10 секунд. Наконец, оценка в четыре балла, определяющая гуманную конечную точку, когда мышь проявляет ригидный паралич во время подвешивания организма. Тест не показывает движения вперед во время теста при ходьбе с использованием задних конечностей, а также не может писать самостоятельно в течение 10 секунд после того, как его положили на любую сторону.

Самцы мышей, как правило, имеют более агрессивное прогрессирование заболевания, чем самки мышей, о чем свидетельствует большая часть их жизни, проявляющая симптомы, которые можно классифицировать с помощью неврологической оценки 1 по сравнению с самками. По мере того, как симптомы увеличиваются до диапазона неврологической оценки в два или три, количество дней, проведенных на каждой шкале, одинаково по частоте для всех полов. Здесь показаны порядковые графики логистики, статистического анализа, сгенерированные с использованием только что описанного нейропротокола.

Эти данные получены из фармакологического исследования эффективности препарата, в котором когорта мышей, получавших исследуемое соединение TDI 1 73, сравнивалась с когортой мышей, получавших носитель. Статистически значимых различий при раздельном анализе полов не наблюдалось, но статистическая значимость была достигнута при объединении полов. Несмотря на схожие тенденции, анализ выживаемости Каплана Мейера не был достаточно чувствительным, чтобы выявить существенные различия даже при слиянии полов.

После освоения система подсчета очков может быть применена менее чем за минуту для каждой мыши, если она выполнена правильно. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как оценить прогрессирование заболевания в SOD one G 93, мышиной модели LS с помощью системы Neuroco.