Молоко Коллекции Крысы Использование капиллярных трубок и оценка Молоко Жирность по Creamatocrit

Общая цель данной процедуры – описать, как вручную собрать молоко у лактирующей крысы для лабораторного анализа состава молока. Этот метод может быть использован для ответа на ключевые вопросы в области здоровья матери и ребенка, например, как материнский рацион может влиять на состав молока. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она может быть выполнена одним исследователем без какого-либо специализированного вакуумного или отсасывающего оборудования.

No.To начала отделите мать от ее потомства минимум за пять минут до начала дойки. Затем соберите все материалы, необходимые для процедуры доения, как показано здесь. Затем положите абсорбирующую скамью на хирургический стол с подогревом или используйте отдельную грелку, чтобы предотвратить потерю тепла от плотины во время процедуры доения.

Затем проверьте анестезиологическую систему, чтобы убедиться, что в системе достаточно кислорода и изофтора перед процедурой. Затем прикрепите к аппарату маску, которая будет использоваться для первичной индукции анестезии, и установите рядом поддерживающую маску. Откройте кислородный баллон и установите расход на один литр в минуту.

Затем включите поток изофтора и установите его расход на 5% После обезболивания переключите дамбу на маску для обслуживания. Подтвердите достаточный уровень обезболивания, проверив на отсутствие педального рефлекса. Затем поместите дамбу в лежачем положении на впитывающую скамейку.

Уменьшите расход изофтора до двух-3%Постоянно контролируйте плотину на протяжении всей процедуры и регулируйте поток изоофтора по мере необходимости, чтобы избежать боли и угнетения дыхания. Далее с помощью стерильной спиртовой салфетки или очищающей салфетки продезинфицируйте флакон с окситоцином с помощью одномиллилитрового шприца, оснащенного иглой 25 калибра, наберите 0,1 миллилитра окситоцина. Затем введите иглу в нижний правый квадрант брюшной полости плотины так, чтобы игла была направлена к голове под углом от 15 до 30 градусов, примерно на 0,5 сантиметра вглубь.

Перед впрыском потяните поршень назад, чтобы обеспечить отрицательное давление. Если жидкость не отсасывается, введите окситоцин и немедленно выбросьте иглу и шприц в контейнер для биологически опасных веществ. Подождите примерно пять-15 минут, пока окситоцин не начнет стимулировать молоко.

Подведите за это время, выберите соски, из которых будет собираться молоко. Используйте триммеры для аккуратного удаления шерсти вокруг выбранных сосков, так как мех может вызвать трудности при сборе образцов. Затем очистите тети теплой водой.

Подготовьте как минимум два участка, так как для сбора молока может потребоваться более одного участка. Как только молоко опустится, осторожно сожмите основание Tet, чтобы вручную вытолкнуть молоко. Для сбора соберите капли молочных капель в капиллярную трубку объемом 50 микролитров.

После заполнения выдайте молоко из капиллярной трубки в стерильную микроцентрифужную трубку, прикоснувшись к концу трубки, которая использовалась для забора молока из соски, к боковой стороне микроцентрифужной пробирки. Затем с помощью иглы 18 калибра, прикрепленной к одномиллилитровому шприцу, выдуйте молоко, которое не было набрано в трубку. Повторите сбор молока и переложите его в микроцентрифужную пробирку до тех пор, пока не будет собрано достаточное количество молока.

Для выбранного анализа постарайтесь ограничить общее время, в течение которого дамба находится под наркозом, до менее одного часа. Когда доение будет завершено, выключите подачу изофтора и кислорода и снимите маску с плотины. Продолжайте следить за плотиной до тех пор, пока она не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего состояния грудины.

Если дополнительные анализы не требуются, нагрейте молоко при температуре минус 80 градусов. Чтобы подготовиться к измерению CCR, загрузите от 15 до 20 микролитров молока в микрогематокритную пробирку непосредственно из Tet. Затем запечатайте конец трубки глиняным герметиком.

Поместите капиллярную трубку в спиннер гематокрита так, чтобы вмятина уплотнения была направлена наружу, и убедитесь, что центрифуга сбалансирована. Затем вращайте образец при 13, 700 умноженных на G в течение двух минут. Как только образец закончит вращаться, извлеките пробирку из центрифуги.

Наблюдайте за разделением образца на слой крема и прозрачный слой. Измерьте и запишите общую длину жидкости в пробирке и длину слоя жира или сливок с помощью линейки или штангенциркуля. Используйте эту информацию для расчета CCR, как описано в сопроводительном текстовом протоколе, чтобы определить, как диета во время беременности и лактации влияет на состав молока.

Образцы молока были собраны при отъеме от вустерских матерей, которых кормили либо высоким содержанием белка, либо пребиотической клетчаткой, либо контролируемой диетой. Молоко, собранное у матерей на диете с высоким содержанием пребиотических волокон, имело численно самый высокий уровень гематокрита C, плохую концентрацию и энергетическую ценность. Однако эти различия не были статистически значимыми, когда речь шла о белке.

Тем не менее, молоко, собранное у матерей на диете с высоким содержанием белка, имело самую высокую концентрацию белка. Хотя, опять же, эта разница не была статистически значимой. После освоения эта техника может быть выполнена менее чем за час от начальной точки обезболивания плотины, если все сделано правильно.

При попытке проведения этой процедуры важно помнить о постоянном контроле за плотиной, чтобы убедиться, что угнетение дыхания не возникает во время анестезии после этой процедуры. Другие методы, такие как масс-спектрометрия, могут быть использованы для ответа на дополнительные вопросы, такие как определение олигосахаридного состава молока. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выполнять ручной сбор молока от лактирующей крысы.