Ортотопическая задних конечностей трансплантации у мышей

Общая цель этого обучающего видео состоит в том, чтобы представить мышиную модель ортотопической трансплантации задних конечностей с использованием техники бесшовной манжеты для супермикрососудистого анастомоза. Животные модели имеют первостепенное значение для понимания и лечения болезней человека и проложили путь к тому, чтобы реконструктивная трансплантация стала клинической реальностью за последние два десятилетия. Именно эта модель может помочь ответить на ключевые вопросы, связанные с траекторией физиологии аллоиммунного ответа, специфичного для васкуляризированных композитных аллотрансплантатов.

Основное преимущество методики заключается в том, что техника наложения манжеты без наложения швов значительно снижает сложность и повышает вероятность успеха этой супермикровазулярной процедуры. После подтверждения соответствующего уровня седации путем щипка пальца ноги бреют заднюю конечность и пах животного-донора. Далее продезинфицируйте кожу 10%-ным повидон-йодом и поместите мышь под диссекционный микроскоп.

С помощью ножниц начинают забор донорской конечности с разреза кожи в паху проксимальнее области средней части бедра. Косвенное соединение разреза, чтобы отграничить заднюю конечность от остальной части тела. Определите и рассеките бедренную артерию, вену и нерв.

Затем с помощью щипцов и микроножниц разделите три структуры. Предотвращение микротравм стенки сосуда с помощью бесконтактной техники имеет важное значение для обеспечения успеха процедуры. После того, как сосудистая ножка была рассечена, с помощью микроножниц разделите сосуды на паховой связке.

Продолжайте деление отдельных вентральных и дорсальных групп мышц примерно в средней части бедра, чтобы отделить трансплантат от донорского животного. Затем пересеките бедренную кость в середине бедренного стержня. С помощью шприца, оснащенного иглой 33 калибра, промойте собранную конечность двумя мл гепаринизированного четырехградусного физиологического раствора.

Затем наложите индивидуальные полиимидные манжеты на бедренную вену и артерию. И храните привой во влажной хлопчатобумажной марле в чашке Петри при температуре четыре градуса Цельсия до вставки. Установка песиса на полиимидные манжеты является самым важным этапом процедуры.

Так как неправильное выделение может нарушить кровоток и неправильное использование прессмона может обнажить некоторые ткани антибиотика, увеличивая вероятность образования тромбоза. Чтобы удалить заднюю конечность реципиента, введите 0,3 мл теплого физиологического раствора внутрибрюшинно. Сделайте круговой разрез вокруг задней конечности и определите и рассеките бедренную артерию, вену и нерв, как показано выше.

После того, как сосудистая ножка была рассечена, зажмите бедренные сосуды на паховой связке. И перерезать сосуды дистально у поверхностной эпигастральной артерии. Продолжайте разделять отдельные группы вентральных и спинных мышц примерно в середине бедра, чтобы отделить родную заднюю конечность от животного-реципиента.

Затем пересеките бедренную кость в середине бедренного стержня. Затем с помощью спинномозговой иглы 20 калибра в качестве интрамедуллярного стержня выровняйте бедренные кости реципиента и трансплантата в исходном положении задней конечности. Соедините бедренную кости донора и реципиента.

Используйте рассасывающийся шовный материал для коаппинга вентральной и дорсальной групп мышц. Точное и быстрое выполнение такого выравнивания предотвращает длительную кровопотерю из костной полости. Чтобы соединить бедренные сосуды, натяните реципиентную сторону сосуда на полиимидные манжеты.

И используйте нейлоновый шов 10-0, чтобы зафиксировать сосуд-реципиент на манжете с помощью кольцевой завязки. Когда сосуд стабилизирован, отпустите зажимы. И визуально убедиться в том, что манжеты не повернуты неправильно.

Визуально проверьте гомеостаз и используйте электрокаутеризацию, чтобы остановить любой источник кровотечения. Затем закройте кожу нерассасывающимися нейлоновыми швами. И следить за животным до тех пор, пока оно полностью не выздоровеет.

Выполнение васкуляризированной композитной аллотрансплантации на мышиной модели с использованием этой техники без наложения швов способствует достижению отличной и долгосрочной выживаемости трансплантата и животных. Кроме того, этот метод представляет собой надежный метод получения воспроизводимых результатов постепенного отторжения аллотрансплантата и васкуляризированной модели композитной аллотрансплантации, как это задокументировано на изображениях. Действительно, гистологический анализ тканей, полученных от животных, подвергавшихся отторжению, еще раз подчеркивает воспроизводимую динамику отторжения аллотрансплантата в этой мышиной модели.

После освоения этой техники ее можно выполнить за 90-120 минут, если она выполнена правильно. При попытке этой процедуры важно помнить о том, что нужно уделять особое внимание работе с тканью и избегать любого кровотечения. После своего развития эта методика может проложить путь исследователям в области реконструктивной трансплантации.

Исследовать основные механистические вопросы, связанные с аллоиммунитетом васкуляризированных композитных аллотрансплантатов. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как выполнять все критические этапы ортотопической трансплантации задних конечностей у мыши.