Поддержание Дрозофилы Население Кейдж

В этой статье мы описываем подробный и гибкий протокол содержания клетки для популяции мух. Эффективный способ регулярного производства от миллиграмм до десятков граммов эмбрионов, личинок, лобковых и взрослых мух. Собранные мухи, которые просто поступают в процесс, получают большое количество ДНК, РНК, белков и других подобных компонентов, необходимых для экспериментов в области биохимии и молекулярной биологии.

Настройка клетки для популяции может занять много времени. Тем не менее, содержание клетки в течение нескольких месяцев экономит время и позволяет быстро собрать биологический материал за короткий период. Для начала установите пластиковый контейнер, вырезав три квадрата размером два на два сантиметра в крышке пластикового контейнера.

Добавьте маркировочную ленту размером три четверти дюйма в четыре угла каждого отверстия, чтобы обеспечить плотное прилегание пенопластовых пробок. А затем поместите в каждое отверстие по одной поролоновой пробке. Накройте внутреннюю часть емкости полиэтиленовой пленкой.

Поверх этой пленки добавьте слой ваты, чтобы покрыть дно пластиковой емкости и оторвите лишнюю вату. Затем перейдите к приготовлению пищи на полете, добавив 333 миллилитра деионизированной воды в 500 мл стакана. В химическую вытяжку размешайте раствор магнитным стержнем и добавьте 167 микролитров пропионовой кислоты и 1,08 миллилитра фосфорной кислоты из исходных растворов.

Медленно добавляйте 77,5 грамм активных сухих дрожжей, избегая больших комочков. После растворения сухих дрожжей добавьте в последнюю очередь 38,8 грамма сахарозы. Сразу после растворения сахарозы полейте вату свежим продуктом.

Перед закрытием пластикового контейнера крышкой обязательно равномерно накройте вату, чтобы сбежавшие мухи не загрязнили пищу. Мы суспензируем 1,5 грамма самых твердых коронированных эмбрионов id nondi из предыдущего цикла. Разрежьте две фильтровальные бумаги пополам и равномерно распределите биологическую смесь по четырем частям с помощью шпателя.

Поверх пропитанной ватой фильтровальной бумаги выложите фильтровальную бумагу и закройте крышкой. Наконец, инкубируйте пластиковый контейнер до стадии зрачка. Следите за эмбрионами, когда они становятся личинками первого возраста.

Полученные личинки будут питаться дрожжевой смесью, разрастаясь и линяя дважды в личинки второго и третьего возраста. В период роста очистите клетку популяции мух, как описано в сопроводительном текстовом протоколе. Через четыре дня после первоначальной установки наблюдайте, как личинки окукливаются.

Личинки останутся в этой стадии еще на четыре дня. Прежде чем появятся первые мухи, откройте пластиковый контейнер и поместите пластиковую пленку, содержащую хлопок со всеми щенками, поверх лабораторной бумаги для замачивания внутри чистой клетки для популяции. Автоматически воспроизводите ранее приготовленную смесь патоки с помощью перемешивания в течение 30 минут.

Остудите смесь и добавьте в смесь патоки раствор Тегосепта. Далее вылейте смесь в противень для мяса размером 21х14,5 сантиметров. Убедитесь, что объема достаточно, чтобы покрыть 16 лотков.

Подождите до 20 минут, пока патока застынет, и накройте каждый противень полиэтиленовой пленкой, чтобы избежать высыхания. Затем храните лотки при температуре 4 градуса Цельсия до использования. Добавьте в стакан 200 миллилитров деионизированной воды, и медленно всыпьте сухие дрожжи, помешивая ложкой.

Прекратите добавлять сухие дрожжи, когда смесь достигнет консистенции арахисового масла, чтобы предотвратить прилипание мух к пище. Снимите полиэтиленовую пленку с одного лотка для патоки, и накройте его слоем свежеприготовленных влажных дрожжей с помощью ложки или шпателя. Убедитесь, что вся поверхность покрыта.

Поместите клетку в колдрам при температуре 4 градуса Цельсия на срок до 30 минут, чтобы убедиться, что мухи перестали летать. Пока клетка находится в колдуре, откройте сетку и осторожно добавьте в клетку лоток с патокой с влажными дрожжами. Закройте сетку и поставьте клетку при комнатной температуре.

Через два дня после эксклозии введите в клетку новый лоток с патокой со свежим влажным кормом. Чтобы увеличить выход яйцеклеток, поверхность влажных дрожжей сделайте как можно более неровной. Поддерживайте клетку при комнатной температуре.

Когда эмбрионы можно визуализировать в виде маленьких белых точек, они готовы к сбору. Чтобы собрать эмбрионы, успокойте мух, поместив клетку в холодное помещение на срок до 30 минут. Подготовьте пластиковый контейнер и корм для мух для следующего цикла.

Далее в восьмилитровый автоклавный лоток добавьте воды на четверть от общей емкости и добавьте один миллилитр 10% Triton X-100. Пока клетка находится в колдраме, осторожно снимите пластину с патокой и поместите ее в пакет с биологической опасностью. Извлеките лоток из пакета и быстро погрузите его в раствор моющего средства в автоклавном лотке, затем закройте пакет с биологически опасным веществом и поместите пакет в контейнер для биологически опасных веществ.

Используйте дистиллированный водяной пистолет, чтобы смыть эмбрионы и дрожжи с патоки. Выбросьте тарелки и патоку в коробку для биологически опасных веществ. Осторожно перелейте раствор через набор из трех сит.

Промойте комки на верхнем уровне с помощью пистолета с дистиллированной водой, пока не останется комочков. Промойте лоток автоклава дистиллированной водой, а воду для промывки пропустите через сита. Снимите верхнее сито.

Большая часть личинок первого и все личинки второго возраста останутся в сите 40. Снимите второе сито. Желтый материал в третьем сите представляет собой смесь эмбрионов и мелких личинок первого возраста.

С помощью пистолета с дистиллированной водой переместите все яйца на одну сторону сита. Затем соберите их шпателем и взвесьте. Используйте 1,5 грамма, чтобы начать новый цикл.

Остальные эмбрионы использовать для дальнейшей обработки или выбросьте их. Шесть последовательных циклов были собраны из исходного материала весом 1,5 грамма. И давал в среднем 10 грамм эмбрионов и личинок за цикл.

Показаны выходы пяти последовательных сборов через час после добавления нового корма и трех последовательных сборов через три часа после установки новой тарелки с патокой. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как регулировать культуру, популяцию дрозофилы melanogaster, используя клетку для популяции мух.