Retroductal Подчелюстные Сальник закапывания и локализованный фракционированного облучения в крысиной модели слюнных гипофункции

Гипофункция слюнных желез, основной побочный эффект лучевой терапии головы и шеи снижает качество жизни пациента. Демонстрация эффективности новых методов лечения на животных моделях является предпосылкой перед клиническим переходом. Этот протокол описывает ретродукционное введение и местное облучение подчелюстных желез крыс.

Общая цель этой процедуры заключается в ретродуктивном введении препаратов в подчелюстные железы для оценки их эффективности в борьбе с дисфункцией слюны. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области заболеваний слюнных желез, например, какие методы лечения могут защитить или восстановить функцию слюнных желез от облучения. Основное преимущество этой методики заключается в том, что слюнные железы можно лечить локально, тем самым снижая риск нецелевых тканевых побочных эффектов.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что отверстия протока не видны, и канюля должна быть вслепую введена в проток. Перед началом процедуры отрежьте скальпалом десятисантиметровую трубку из полиэтилена PE 10, затем возьмитесь за оба конца трубки между указательным и большим пальцами каждой руки и нагрейте среднюю часть трубки над мягким пламенем, осторожно потянув за обе стороны, чтобы растянуть размягченную трубку вдвое ее длину. Затем с помощью скальпала разрежьте трубку посередине под углом 45 градусов, чтобы получить две каннули с коническим концом каждая.

Растяните неконический конец одной из каннулей над иглой 29 калибра инсулинового шприца объемом 0,5 куб. см. Затем извлеките канюлю и наберите в шприц 220 микролитров физиологического раствора. Постучите по стержню шприца, чтобы удалить пузырьки воздуха, и снова прикрепите канюлю к игле.

Нажмите на поршень, чтобы вытолкнуть воздух из канюли и обеспечить свободное поступление раствора через трубку и отрегулировать объем физиологического раствора в шприце до 200 микролитров. Теперь подтвердите соответствующий уровень седации крысы щипцом ноги и пальпируемым рефлексом и нанесите глазную смазку на открытые роговицы. Поместите амимал на специально разработанную удерживающую платформу и задействуйте верхние зубцы резцов на поперечной перекладине.

Обмотайте резиновой лентой нижние резцы, чтобы оттянуть челюсть вниз. Прикрепляем его к платформе. Далее проденьте стерильный шов через язык и поднимите его вверх, чтобы поднять дно рта.

Затем с помощью гемостата зажмите швы и пропустите гемостат над поперечной перекладиной. Затем используйте специально изготовленный расширитель для щек, чтобы расширить щеки, и диссекционный микроскоп, чтобы найти подъязычные сосочки на дне рта. С помощью тонких щипцов захватите конический конец предварительно сформированной трубки из полиэтилена 10 и осторожно переместите кончик канюли в протоковое отверстие на сублингвальном сосочке.

Затем проденьте канюлю на три-пять миллиметров в воздуховод, убедившись, что канюля проходит через проток без препятствий. Перед закапыванием физраствора введите атрофин подкожно в загривок шеи животного. Через десять минут после инъекции закрепите канюлю в отверстии протока каплей с помощью капли цианоакрилата.

После того как клей высохнет, медленно нажимайте на поршень шприца со скоростью 50 микролитров в минуту, пока в железу не будет заведено 200 микролитров солевого раствора. Если во время закапывания вы столкнулись с задержкой, остановите и затем удалите трубку, затем повторите ее с помощью новой канюли. Затем зажмите трубку с помощью гемостата и аккуратно извлеките шприц.

Оставьте трубку в протоке на 30-60 минут, пока животное не придет в сознание. Затем снимите шов, который удерживает язык, и переложите животное в отдельную клетку под тепловую лампу до полного восстановления. Местно применять фракционное облучение подчелюстной железы.

Наведите на колонну трехсантиметровую щель радиационного поля, охватывающую область от нижней границы мышцы до верхней части грудины крысы, находящейся под наркозом, в положении лежа на спине. После наложения на область односантиметрового тканевого равносильного болюса. Отрегулируйте расстояние между источником излучения и верхней частью кома до 100 сантиметров с помощью пучка фотонов мощностью шесть мегавольт на линейном ускорителе.

Облучайте животное 2,5 серыми оттенками для соответствующей продолжительности воздействия. По окончании периода радиационного облучения согрейте животное во время его выздоровления, как только что было показано. Во время первоначальных экспериментов правильность установки канюли была подтверждена путем введения в железу раствора гематоксилина или триплана синего и оценки окрашивания железы у усыпленных животных.

Подчелюстные железы были изучены, потому что они могут быть избирательно облучены колоническим излучением в область шеи, избегая серьезных побочных эффектов перорального приема, которые могут повлиять на здоровье животных и результаты эксперимента. Анализ влияния этой схемы фракционированного облучения на отток слюны через восемь недель после облучения показывает, что ежедневное воздействие 2,5 серых приращений резко снижает отток слюны. В 10 раз снижается выделение слюны у облученных животных по сравнению с необлученными животными.

После освоения этой техники ее можно завершить за несколько минут, если она выполнена правильно. При проведении этой процедуры важно помнить о необходимости обеспечить неограниченное прохождение канюли в экскреаторный проток слюнной железы. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области заболеваний слюнных желез к изучению методов лечения лучевой и аутоиммунной болезни слюнных желез.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как проводить ретродуктивную установку в подчелюстную железу крысы и локально облучать железы для оценки терапевтической эффективности улучшения лучевой токсичности. Не забывайте, что работа с генными и белковыми терапевтическими препаратами может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры следует соблюдать меры предосторожности, такие как предотвращение уколов иглой и минимизация контакта с биологическими агентами на кожу.