Методы исследования Mrp4 содержащих макромолекулярных комплексов в регуляции миграции фибробластов
May 19th, 2016
MRP4 регулирует различные циклические нуклеотид-зависимой сигнализации событий, включая недавно выяснены роль в миграции клеток. Мы описываем прямой, но многогранный подход к распутать вниз по течению молекулярные мишени из MRP4 что приводит к идентификации уникального MRP4 интерактома, который играет ключевую роль в отлаженной регулирования миграции фибробластов.
Общая цель этой экспериментальной процедуры заключается в наблюдении циклической АМФ-зависимой регуляции миграции фиброгаза с помощью MRP4. Высококонтактная микроскопия может помочь ответить на ключевые вопросы в области клеточной биологии. Например, в дополнение к приданию устойчивости к микробам, MRP4 также может регулировать физиологические процессы, такие как миграция клеток, модулируя внутриклеточную циклическую концентрацию нуклеотидов. Основное преимущество FRET-визуализации, которое мы собираемся попробовать сегодня, заключается в том, что она позволяет отслеживать внутриклеточную динамику циклического АМФ и циклической АМФ-зависимой киназы в режиме реального времени. Значение высококонтактной микроскопии заключается в том, что она может быть использована при разработке лекарств. После того, как система настроена, все инструменты настроены, в эту задачу на основе пластин не требуется никакого вмешательства человека. Хотя этот метод может дать представление о миграции клеток, он может быть применен к другим системам, таким как нераздельное производство липеклеточных клеток, высококонтактная визуализация уничтожения иммунных клеток, более холодное разведение, ангиогенез, пролиферация клеток, хемотаксис и лечение филлита. Чтобы подготовить клетки к высококонтактной микроскопии под колпаком для клеточных культур, используйте однопроцентный раствор фибронектина в PBS для покрытия лунок 96-луночного планшета. Инкубация планшета в CO2-инкубаторе при 37
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
MRP4 участвует в регулировании зависящих от циклических нуклеотидов сигнализационных событий и играет важную роль в миграции клеток. Это исследование идентифицирует уникальный интерактом MRP4, который необходим для регулирования миграции фибробластов.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Миграция клеток
- Сигнализационные пути
- Биология фибробластов
Фон
- MRP4 - это транспортер, влияющий на различные сигнализационные пути.
- Понимание роли MRP4 может дать представление о механизмах миграции клеток.
- Фибробласты являются ключевыми участниками восстановления и регенераци тканей.
- Идентификация интеракторов MRP4 может раскрыть новые целевые объекты для терапии.
Цель исследования
- Разъяснить нисходящие молекулярные цели MRP4.
- Исследовать роль MRP4 в миграции фибробластов.
- Характеризовать интерактом MRP4.
Используемые методы
- Идентификация интеракторов MRP4 с помощью биохимических анализов.
- Анализ сигнализационных путей, подверженных влиянию MRP4.
- Анализ миграции клеток для оценки функциональных результатов.
- Использование методов молекулярной биологии для исследования взаимодействия белков.
Основные результаты
- Идентификация уникального интерактома, связанного с MRP4.
- Демонстрация роли MRP4 в регулировании миграции фибробластов.
- Представление о сигнализационных путях, модулируемых MRP4.
- Потенциальные последствия для терапевтических стратегий, нацеленных на миграцию клеток.
Выводы
- MRP4 является ключевым регулятором миграции фибробластов.
- Интерактом MRP4 предоставляет новые пути для исследований.
- Понимание роли MRP4 может привести к прогрессу в терапии восстановления тканей.
