Долгосрочный Измерение артериального давления у свободно передвигающихся мышей с использованием Телеметрия

Целью данного протокола является оценка системного артериального давления у свободно движущихся мышей, находящихся в сознании, с помощью имплантируемых радиотелеметрических устройств. Этот метод может помочь ответить на ключевой вопрос в области сосудистых заболеваний и позволяет оценить многие факторы, участвующие в регуляции артериального давления. Основное преимущество этого метода заключается в том, что он позволяет собирать широкий спектр физиологических параметров у свободно движущихся животных без артефактов, связанных с использованием средств сдерживания, взаимодействия с человеком или анестезии, которые требуются при использовании других методов.

Содержание животных для этого исследования при температуре 21 градус Цельсия с относительной влажностью 60% при 12-часовом цикле светлой темноты, а также со свободным доступом к пище и воде. Взвесьте выбранную мышь, обращаясь с ней мягко и спокойно. Поскольку на корпусе должен помещаться телеметрический зонд, мышь должна весить не менее 20 граммов.

Для индукции анестезии используют индукционную камеру с четырех-пятипроцентным изофлураном со скоростью 0,45 литра в минуту. Перенесите мышь, находящуюся без сознания, в нагревательную пластину и подайте ей двухпроцентный изофлуран через носовой конус. Затем подтвердите обезболивающее состояние щипцом ноги.

Если мышь неактивна, продолжайте депиляцию брюшной стороны ее шеи с помощью крема для волос. Затем сотрите волосы и излишки крема и очистите кожу тремя чередующимися применениями бетадина и 70% изопропилового спирта. Телеметры для этого эксперимента можно использовать повторно, если они стерилизованы в соответствии с инструкциями производителя, а наконечники катетеров заполнены гелем производителя.

Теперь, когда мышь находится в лежачем положении на спине, сделайте скальпелем разрез по средней линии ниже шеи мыши. С левой стороны разреза создают подкожное пространство, тщательно отделяя кожу от подлежащей соединительной ткани. Затем переверните мышь и с помощью скальпеля сделайте 1,5-сантиметровый разрез на тыльной левой стороне позади лопатки.

В нем создается подкожный карман, достаточно большой для размещения устройства. Теперь вставьте передатчик в карман. Затем вставьте небольшой зажим для гемостата в задний разрез и подкожно проведите его по направлению к отверстию передней шеи.

С помощью зажима аккуратно возьмитесь за четырехсантиметровую пластиковую трубку и вытяните кровоостанавливающее средство обратно через тоннель и наружу боковой разрез в задней части. Разжмите трубку, как только она выступит из брюшного и тыльного разрезов. Теперь с задней стороны вставьте датчик катетера в трубку, чтобы туннелировать кончик катетера, чувствительного к давлению, через горлышко.

Затем с шеи спереди потяните и удалите полиэтиленовую трубку и закройте дорсальный разрез с помощью металлических зажимов. Далее аккуратно отделите нижнечелюстные железы с помощью ватных аппликаторов. Затем втяните левую нижнечелюстную железу с помощью эластичного крючка.

Теперь с помощью изогнутых щипцов с тонкими кончиками расположите сонную артерию вдоль левой стороны трахеи и тщательно изолируйте сосуд от окружающих тканей. Затем аккуратно отделите блуждающий нерв от сонной артерии, стараясь не перерезать и не повредить ни нерв, ни артерию. После разделения проведите три куска нерассасывающегося шва 7-0 под изолированную сонную артерию и завяжите черепной шов, чтобы перекрыть кровоток.

Потяните за шов, который находится ближе всего к грудине, чтобы временно перекрыть приток крови из аорты. Теперь завяжите свободный узел, используя средний шов для фиксации катетера. Затем сделайте небольшой разрез в артерии между швами с помощью микроножниц.

С помощью специальных щипцов для канюляции сосудов аккуратно закрепите катетер, чтобы зонд не выдавливался. Затем с помощью пинцета аккуратно захватите артерию. Теперь извлеките катетер и вставьте его в сосуд через небольшой разрез.

Наиболее важным этапом в этом протоколе является установка зонда в сосуд. Поэтому убедитесь, что вы расслаблены и удобно сидите во время его выполнения, потому что хорошая координация рук имеет решающее значение для этого шага. Далее затяните средний узел шва вокруг артерии и аккуратно продвиньте катетер.

Затем аккуратно отпустите шов проксимальнее грудины и продолжайте продвигаться катетер по направлению к поперечной аорте. При введении катетера в сонную артерию важно смотреть на микрофонный конец зонда. Если зайти слишком далеко, аорта закупорится, и мышь умрет.

катетер будет введен в правильном направлении, аккуратно затяните нижний и верхний шов вокруг катетера, чтобы закрепить его на сонной артерии. Наконец, закройте разрез кожи нерассасывающимся швом 5-0 и заклейте разрез тканевым клеем. После операции наблюдайте за мышью, пока она не примет нормальные позы и поведение.

В течение первых 24 часов проводить обезболивание в соответствии с указаниями штатного ветеринарного врача. После того, как животные выздоровеют через пять-семь дней после операции, поместите их по отдельности в обычную клетку для мышей, размещенную поверх пластины приемника телеметрии. Для сбора данных поместите клетку мыши на пластину приемника телеметрии и включите передатчик с помощью магнитного устройства производителя.

После описанной процедуры данные могут быть получены ресивером удаленно. Следы визуализируются на экране компьютера для контроля качества. Также отображаются такие данные, как идентификация животного, диастолическое и систолическое артериальное давление и дата приобретения.

Артериальное давление может регистрироваться непрерывно или в течение коротких запрограммированных интервалов. Одним из очевидных выводов из непрерывных записей артериального давления у мышей является то, что они следуют циркадному ритму. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как вживлять телеметрические зонды для черного базального мониторинга.

После освоения этой техники ее можно выполнить за 30 минут, если она выполнена правильно.