Смелостью, агрессивностью и обмеления Анализы для данио рерио Поведенческие синдромы

Общей целью данного протокола является стандартизация методологии, используемой для наблюдения, анализа и интерпретации дерзости, агрессии, смельчаковых поведенческих синдромов у рыбок данио. Непосредственно этот метод может ответить на вопросы эволюционной теории, структуры популяции и популяционной динамики. В сочетании с междисциплинарными методами он может быть применен в таких областях, как фармакология, токсикология, поведенческая генетика и эндокринология.

Основное преимущество этой техники заключается в том, что смелость, агрессия, комбинация косяков охватывает многие хорошо изученные, легко поддающиеся количественной оценке модели поведения у рыбок данио. И каждый анализ может быть модифицирован для ответа на альтернативные экспериментальные вопросы. Начните с случайного разделения рыбок данио в соответствующее соотношение фокусных рыб и рыб-стимулов.

Храните всю рыбу в стеллажах для рыбок данио-рерио в строгом цикле свет/темнота от 12 до 12 часов. Ежедневно кормите хлопьевидными кормами всех рыб, вызывающих внимание и стимулы. И кормите солеными креветками только один раз в неделю в дни, не связанные с исследованиями.

Далее установите в лаборатории три пробирных емкости. Один за агрессию, смелость и мелководье в местах, которые сводят к минимуму возможность неблагоприятных внешних раздражителей. И оставьте достаточно места для видеокамеры, чтобы захватить весь аквариум.

Настройте видеокамеру так, чтобы она обладала достаточной четкостью для просмотра этикеток аквариума, а также для различения тонких поведений фокусных рыб. Держите камеру в одном и том же положении с полным обзором резервуара во время всех записей поведенческого анализа, чтобы свести к минимуму непреднамеренные различия в поведенческой оценке в результате дифференциальной записи. Затем определите схему маркировки для отслеживания даты, количества рыбы и номера пробы для всех поведенческих анализов.

Наклейте этикетку на внешнюю сторону резервуара скотчем в поле зрения камеры. Запишите эту информацию в лабораторный блокнот для быстрого использования и дальнейшего контроля качества. Наконец, установите акклиматизационный резервуар, который будет использоваться между всеми анализами, а также непосредственно после того, как особи будут удалены из корпуса.

Начните с приобретения прямоугольного бака объемом 19 литров, размером 30 на 15 на 10 сантиметров. Оборудуйте аквариум внешними непрозрачными перегородками, окружающими три стороны агрессивного аквариума, оставив переднюю часть открытой для обозрения, чтобы уменьшить нежелательные внешние раздражители. Разделите бак с внешней маркировкой на четыре равных прямоугольных квадранта.

С помощью силиконовой конопатки закрепите зеркало в левом нижнем квадранте, наклоненном под углом 22,5 градуса, образуя прямоугольный треугольник против крайней левой стороны аквариума. Имейте свежую, выдержанную воду, предварительно подогретую до 27,5–28,5 градусов Цельсия, готовую к добавлению в резервуар для агрессии, чтобы температура воды в резервуаре для акклиматизации и резервуаре для агрессии находилась в пределах двух градусов Цельсия от стойки для корпуса. Вытащите фокусную рыбку из стойки для корпуса и перенесите ее в отдельную акклиматизационную емкость, где она будет акклиматизироваться в течение 10 минут.

Убедитесь, что видеокамера сфокусирована на пробирном баке и нажмите на запись. Затем немедленно перенесите фокусную рыбу с помощью банок из акклиматизационного резервуара в аквариум для агрессии. Запишите агрессию танка на 10 минут и 30 секунд.

Затем вытащите фокусных рыб из аквариума для агрессии обратно в аквариум для акклиматизации. При просмотре записи после завершения анализа подождите 30 секунд после того, как рыба была введена в аквариум в качестве дополнительного периода акклиматизации, прежде чем оценивать поведение. Наконец, оценивайте один тест на агрессию по крайней мере дважды, пока анализ не будет оценен с высоким уровнем согласия между итерациями.

Чтобы настроить тест на смелость, сначала приобретите небольшой трапециевидный резервуар объемом 1,5 литра, высотой 15 сантиметров, верхом 26,5 сантиметра и дном 22,5 сантиметра, а также шириной 6 сантиметров. Оберните резервуар с трех сторон непрозрачной бумагой и оставьте переднюю часть открытой для обозрения. Поместите один тонкий кусок ленты снаружи бака, чтобы разграничить верхнюю и нижнюю части бака.

Далее убедитесь, что температура воды в баке смелости находится в пределах двух градусов Цельсия от стойки корпуса. Перенесите рыбу из стойки для содержания в акклиматизационный резервуар и дайте ей акклиматизироваться в течение 10 минут. Убедитесь, что видеокамера сфокусирована на пробе смелости и нажмите кнопку записи на устройстве.

Немедленно перенесите фокусных рыб из акклиматизационного резервуара в резервуар для смелости и записывайте в течение восьми минут и 30 секунд. При просмотре записи после завершения анализа предусмотрите дополнительный 30-секундный период акклиматизации после того, как рыба была введена в аквариум, прежде чем забивать. Наконец, оценивайте один тест жирности по крайней мере дважды, пока анализ не будет оценен с высоким согласием между итерациями.

Чтобы настроить мелководный анализ, приобретите резервуар объемом 76 литров, который имеет три отсека, разделенных двумя стеклянными перегородками, герметизированными силиконовым герметиком. Внешне с помощью ленты обозначьте две зоны предпочтения, которые находятся на расстоянии шести целых трех пяти сантиметров от каждой из стеклянных перегородок, обозначающих каждую зону стимула. Нанесите внешние непрозрачные перегородки вокруг трех сторон мелкого бака и оставьте переднюю часть открытой для обозрения.

Затем выберите косяки стимулов для акклиматизации в течение как минимум 12 часов перед тестированием и оставьте их в резервуаре для отмелей в течение всего эксперимента. Перенесите рыбок из стойки в отдельном резервуаре для акклиматизации с помощью каппинга, где они будут акклиматизироваться в течение 10 минут. Затем перенесите, с помощью каппинга, рыбу-фокусник из акклиматизационного резервуара в центральный отсек мелкого аквариума.

Предусмотрите 10-минутный период акклиматизации перед 10-минутным периодом наблюдения за подсчетом рыбы в реальном времени, в течение которого стайная рыба определяется как находящаяся в зоне предпочтения в камере, где находится целевой косяк. Затем количественно оцените время, проведенное в каждой зоне предпочтения, а также время, проведенное в центральном объеме. Наконец, после того, как анализы будут завершены, пересадите рыбу в отдельный конечный резервуар, который будет служить конечным резервуаром для всех используемых фокусных особей.

В этом протоколе рассматривались устойчивые ассоциации в агрессии, смелости и поведении рыбок данио, чтобы определить, присутствует ли поведенческий синдром. Здесь первый компонент представляет агрессивное поведение, в то время как второй компонент связан с дерзким поведением. Поскольку агрессивность и смелость поведения не представлены одним и тем же компонентом, можно сделать вывод об отсутствии у рыбок данио-рерио синдрома агрессии

После освоения весь протокол одной фокальной рыбы можно сделать за 70 минут. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о том, что вы должны ознакомиться с каждым целевым поведением, чтобы свести к минимуму предвзятость наблюдателя. Многократное озвучивание одной и той же видеозаписи также повысит уверенность в своих результатах.

После этой процедуры могут быть выполнены другие методы в фармакологической, генетической или физиологической областях, чтобы ответить на дополнительные вопросы о том, какие внутренние и внешние факторы влияют на поведенческие синдромы. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как наблюдать, анализировать и интерпретировать дерзость, агрессию, смельчать поведенческие синдромы у рыбок данио. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах!