Протокол для функциональной оценки цельного белка Насыщенность мутагенеза библиотек Использование высокого секвенирования

Общая цель данного протокола состоит в том, чтобы описать функциональную оценку комплексных библиотек мутагенеза белков с одним сайтом с использованием высокопроизводительного секвенирования. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области биохимии и молекулярной эволюции. Например, каковы биохимические, структурные и эволюционные ограничения белков?

И как мы можем создать белки с новыми функциями? Основное преимущество этого метода заключается в том, что он максимизирует количество полезных операций секвенирования в исследовании мутагенеза с насыщением цельного белка за счет многоуровневого построения библиотеки и секвенирования. После подготовки планшета PCR Master Mix в соответствии с текстовым протоколом с помощью многоканальной пипетки переведите 10 микролитров из 96-луночных планшетов, содержащих ранее разбавленные праймеры мутагенеза Sense, в родственные лунки в ПЦР-планшетах.