Быстрое Молекулярная Обнаружение и дифференциация вирусов гриппа А и В
30 января 2017 г.
Мы описываем быстрый, молекулярный основе гриппа A и B анализа. Гриппа тест определяет каждую мишень в течение 15 мин с использованием изотермического амплификации с гриппом специфических праймеров с последующим обнаружения цели с зондами молекулярных радиомаяка. И В анализе гриппа А удобно и требует минимальных практического времени для выполнения.
Общей целью этого анализа является диагностика или исключение вирусной инфекции гриппа у пациентов с респираторными системами. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области клинической диагностики, такие как диагностика основных причин респираторных инфекций. Основное преимущество этой методики заключается в том, что это быстрый метод, который может быть использован в условиях назначенного ухода.
Демонстрировать процедуру будет Сэм Каплан, техник из нашей лаборатории. Чтобы взять образец мазка из носа, вставьте тампон в ноздрю, которая имеет наиболее заметные выделения или наиболее заложена. При осторожном вращении протолкните тампон в ноздрю до тех пор, пока не будет достигнуто сопротивление, и несколько раз поверните относительно стенки носа, прежде чем медленно извлечь его из ноздри.
Впоследствии храните тампон и транспортируйте его во флаконе, содержащем три миллилитра вирусной транспортной среды. Затем доведите образец и синий приемник образцов до комнатной температуры перед тестированием. Оранжевую тестовую базу можно тестировать без необходимости нагрева до комнатной температуры.
Оставьте все тестовые образцы в фольге до самого начала использования. Затем включите прибор, введите идентификатор пользователя и нажмите OK.To начать процесс тестирования, нажмите «Запустить тест» на экране прибора. Затем введите идентификатор пациента с помощью экранной клавиатуры или сканера штрих-кода и нажмите OK. После этого откройте крышку и вставьте оранжевую пробирку с испытательным основанием в оранжевый держатель тестового основания.
Убедитесь, что на экране отображается правильный тест, и нажмите OK. Затем вставьте синий приемник образцов в держатель синего приемника образцов и подождите, пока приемник образцов нагреется. После этого снимите пломбу с фольгой, положив два пальца на край приемника образцов, чтобы убедиться, что он остается на месте. Затем поместите тампон пациента для исследования в приемник образцов.
Энергично перемешайте тампон и жидкость в течение 10 секунд и прижмите головку тампона к боковой стороне приемника образцов, чтобы помочь выбить образец из тампона. Если тестируемые тампоны хранятся в вирусной транспортной среде, то в течение 10 секунд нанесите вихревой поток на вирусную транспортную среду и добавьте 200 микролитров в приемник образцов. Затем нажмите OK, чтобы продолжить.
После этого вдавите белый картридж для переноса в синий приемник образцов. Продолжайте нажимать на приемник образца, пока не загорится оранжевый индикатор. Затем поднимите и подсоедините картридж для переноса к испытательной базе.
Оранжевый индикатор должен опуститься после правильного крепления переноса картриджа. Закройте крышку и не открывайте, пока не появится экран результатов. Теперь нажмите «Запустить тест контроля качества» на главном экране.
Выберите тест контроля качества, который нужно выполнить. Затем подтвердите соответствие типа теста образцу контроля качества, предназначенному для тестирования, нажав OK и следуя инструкциям на экране, чтобы завершить тестирование. После завершения тестового прогона наблюдайте за результатами теста, отображаемыми на экране с интерпретацией на наличие гриппа А, В или неизвестных подтипов, и повторите тест для недействительных результатов.
После этого очистите инструмент и прилегающую территорию стола 70% этанолом или 10% раствором отбеливателя. На этом рисунке показаны средние значения КТ, определенные с помощью анализа RP для положительных и отрицательных образцов для каждого подтипа гриппа. Результаты показывают, что ложноотрицательные образцы, определенные с помощью анализа на грипп А и В, были обусловлены низкой вирусной нагрузкой.
После освоения этой техники ее можно сделать за 15 минут, если она выполнена правильно. При выполнении этой процедуры важно помнить, что при первоначальной настройке анализа картридж для переноса должен быть подключен к тестовой базе до щелчка. Если эти две части не закреплены должным образом, прогон не удастся, и его нужно будет повторить с самого начала.
После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как проводить этот диагностический анализ на грипп. Не забывайте, что работа с образцами пациентов, потенциально инфицированных гриппом, может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как ношение соответствующих средств индивидуальной защиты.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье описывается экспресс-метод молекулярного анализа для обнаружения вирусов гриппа А и В. В анализе используются изотермическая амплификация и зонды-молекулярные маячки, что позволяет получить результаты всего за 15 минут.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Клиническая диагностика
- Молекулярная биология
- Инфекционные заболевания
Теоретические основы
- Вирусы гриппа являются значимыми причинами респираторных инфекций.
- Быстрая диагностика имеет решающее значение для эффективного лечения пациентов.
- Современные методы могут требовать более длительного времени обработки.
- Данный анализ направлен на получение быстрых результатов в удобном для пользователя формате.
Цель исследования
- Разработать экспресс-тест для диагностики инфекций, вызванных вирусом гриппа.
- Повысить эффективность клинической диагностики респираторных заболеваний.
- Обеспечить своевременное принятие решений о лечении в условиях здравоохранения.
Используемые методы
- Изотермическая амплификация со специфичными для гриппа праймерами.
- Детекция мишеней с использованием зондов-молекулярных маячков.
- Сбор образцов с помощью назального мазка.
- Минимальное время непосредственного участия оператора в проведении анализа.
Основные результаты
- Анализ предоставляет результаты в течение 15 минут.
- Простая процедура, подходящая для применения в клинических условиях.
- Эффективно выявляет вирусы гриппа типов A и B.
- Продемонстрировано лабораторным техником.
Выводы
- Данный анализ представляет собой быстрый и эффективный инструмент для диагностики гриппа.
- Он может значительно улучшить качество медицинского обслуживания пациентов с респираторными инфекциями.
- Дальнейшие исследования могут расширить сферу его применения в клинической диагностике.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Быстрое молекулярное обнаружение вирусов гриппа способствует принятию своевременных диагностических решений при лечении респираторных заболеваний. 15-минутный цикл анализа позволяет проводить оперативную сортировку пациентов в пунктах оказания медицинской помощи, сокращая время ожидания результатов диагностики. Эта возможность помогает снизить риски при разработке противовирусных препаратов на ранних стадиях, обеспечивая получение надежных данных о статусе инфекции.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Научная ценность: позволяет подтвердить статус гриппозной инфекции в доклинических моделях, что способствует исследованиям по валидации мишеней.
- Практическая ценность: обеспечивает быстрый анализ в закрытой системе, что сокращает время непосредственной работы и риск контаминации.
Скрининг и разработка анализа
- Научная ценность: Обеспечивает получение количественных сигналов детекции с помощью молекулярных маячковых зондов для оптимизации анализа.
- Практическая ценность: Обеспечивает воспроизводимые результаты при работе с замороженными архивными образцами из носоглотки, что подтверждает надежность анализа.
Трансляционные и доклинические исследования
- Научная ценность: облегчает лонгитюдный мониторинг вирусной нагрузки в релевантных моделях заболевания, способствуя снижению механистических рисков.
- Операционная ценность: обеспечивает межфункциональное взаимодействие между группами вирусологов и токсикологов за счет стандартизации выходных данных.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный анализ подходит для рабочих процессов на ранних этапах поиска соединений, когда требуется быстрое подтверждение статуса инфекции перед переходом к оптимизации ведущих структур.
- Биология открытий: Поддерживает проверку гипотез путем дифференциации инфекций гриппа A и B в экспериментальных когортах.
- Скрининг: Позволяет подготавливать стандартизированные биологические образцы для последующего противовирусного скрининга.
- Аналитика: Обеспечивает качественные и полуколичественные результаты, которые помогают сравнивать эффективность противовирусных средств в различных условиях.
- Трансляционные исследования: Связывает раннее обнаружение инфекции с доклинической непрерывностью за счет стабильного выявления вируса.
- Корпоративное повторное использование: Представляет собой многократно используемый диагностический модуль для исследований респираторных вирусов в рамках нескольких проектов.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: Снижает неопределенность механизмов в моделях инфекции, обеспечивая четкую дифференциацию субтипов гриппа.
- Операционная ценность: Обеспечивает стандартизацию и воспроизводимость за счет работы в закрытой системе без использования дозаторов.
- Стратегическая ценность: Улучшает принятие решений о продолжении или прекращении («go/no-go») в программах по разработке противовирусных препаратов, позволяя быстро подтверждать факт инфекции.
- Влияние на портфель: Поддерживает приоритизацию соединений с поправкой на риск на основе своевременных данных о взаимодействии с мишенью.
Особенности реализации
- Требуется обучение сбору мазков из носоглотки и работе с образцами в вирусной транспортной среде.
- Стабильность результатов зависит от технического обслуживания приборов и стабильности реагентов.
- Необходимо согласование протоколов между исследовательскими группами для отслеживания образцов и интерпретации результатов.
- Необходимо учитывать снижение чувствительности при низком вирусном уровне, что наблюдалось при сравнении с замороженными образцами.
- Для предотвращения контаминации ампликонами в условиях высокопроизводительного анализа рекомендуется использовать средства контроля окружающей среды.
