Защитные Эффективность и легочная иммунный ответ После подкожного и Интраназальная БЦЖ администрации у мышей

Общая цель этой процедуры заключается в изучении иммунных реакций в легких после иммунизации против туберкулеза, включая защитную эффективность вакцины против интраназального заражения и местный иммунный ответ легких, вызванный вакциной. Эта методология может помочь ответить на наши ключевые вопросы в области противотуберкулезной вакцины, включая идентификацию защитных иммунных реакций легких, подавляемых легочными вакцинами для оптимальной иммунной защиты легких. Одним из преимуществ этой методологии является то, что иммунный ответ легких у животного оценивается индивидуально параллельно с защитной эффективностью.

что позволяет идентифицировать специфические иммунные параметры, которые коррелируют с защитой. Для подкожного введения вакцины БЦЖ сначала наполните один миллилитр шприца, оснащенного иглой 26 калибра, одним миллилитром суспензии вакцины БЦЖ и удалите пузырьки воздуха. Затем поместите мышь под наркозом в положение лежа внутри ламинарного капюшона и подкожно привите животному 100 микролитров бактерий с заднего бока.

Для интраназального введения загрузите в микропипетку 20 микролитров суспензии БЦЖ, и поместите мышь, находящуюся под наркозом, в лежачем положении внутри капюшона. Вводите инокулюм по каплям между двумя ноздрями до тех пор, пока не будет отложен весь объем в 20 микролитров, оставляя время между каплями, чтобы мышь могла вдохнуть суспензию. Затем повторно загрузите микропипетку еще 20 микролитров бактерий и повторите введение.

Для интраназального заражения штаммом микробактерий туберкулеза H37Rv, в соответствующий экспериментальный момент после вакцинации, вакцинируйте животных интраназальным введением 40 микролитров бактериальной суспензии H37Rv, как показано выше. Чтобы получить бронхоальвеолярный лаваж или образец шарика, сначала используйте стерильные щипцы и ножницы для обнажения трахеи. Затем сделайте небольшой разрез в трахее, стараясь не исчерпать ткань полностью, и введите канюлю, соединенную со стерильным шприцем объемом 1 мл, содержащим 800 микролитров ледяного PBS.

Когда канюля будет на месте, осторожно заполните легкие PBS, затем медленно потяните поршень назад, чтобы восстановить не менее 500-600 микролитров жидкости для промывания. Выложите шарик в пробирку объемом 1,5 мл на льду, и убедитесь, что суспензия бесцветная, что указывает на отсутствие загрязнения крови. Храните образцы на льду до обработки мяча.

Для определения бактериальной нагрузки и иммунного ответа в легких зафиксируйте мышь иглами в положении лежа на спине на ровной и продезинфицированной поверхности внутри ламинарного проточного капюшона, а в верхней части кожи над грудной клеткой сделайте разрез. Затем снимите кожу, чтобы обнажить грудную область, и разрежьте легкие. Используйте стерильные ножницы и щипцы для забора легких и сердца, а затем поместите органы на чистую поверхность.

Затем удалите сердце, трахею и соединительную ткань. Поместите каждое легкое в отдельную пробирку объемом 1,5 мл с 1 мл деионизированной воды на лед для последующего определения бактериальной нагрузки и клеточных иммунных реакций. По сравнению с подкожным путем, интраназальный путь вакцинации обеспечивает гораздо большую защитную эффективность в легких.

Анализ репрезентативного числа колоний из группы интраназальной вакцины БЦЖ с помощью ПЦР, специфичной для области генома RD9, показывает, что все колонии обеспечивают фрагмент 0,4 килопары оснований, которые соответствовали H37Rv. Интраназальная БЦЖ запускает более высокий уровень IL17 и влияет на продукцию гамма в легких, выявляя корреляцию между защитной эффективностью, обеспечиваемой интраназальной вакцинацией БЦЖ, и иммунным ответом, индуцированным вакциной, в легких до вызова с более высокой концентрацией как общей, так и специфической концентрации IgA очищенного производного белка H37Rv в образцах лаважа, наблюдаемых у реципиентов интраназальной вакцины. Дальнейший анализ цитокин-продуцирующих клеток в легких после перенесенного туберкулеза показал, что в то время как вмешательство в гамма-продуцирующие клетки было обнаружено во всех инфицированных группах, CD4+-клетки IL17A были обнаружены только в интраназальной группе БЦЖ, демонстрируя значимую корреляцию между присутствием IL17 и снижением легочной бактериальной нагрузки.

После этой процедуры можно сравнить местные иммунореакции легких при использовании биоразнообразных противотуберкулезных вакцин, а также различные пути введения и временные точки после заражения. Кроме того, данная методология может быть использована для оценки эффективности вакцинации после проведения вакцинации. Это может позволить идентифицировать иммунные реакции, которые коррелируют с защитой.

Важно отметить, что для работы с микобактериями туберкулеза требуется лабораторное оборудование, не содержащее БКЛ, и при выполнении этой процедуры всегда следует принимать соответствующие меры предосторожности.