ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Авторы благодарят Marin Мануэля и Оливия Гольдмана-Szwajkajzer за помощь в принятии фотографии. Авторы также благодарят Arjun Masukar и Tobias Бок за вычитку рукописи. Финансовые опоры были предоставлены Agence Nationale Recherche пур ля (Гипер-БДН, ANR-2010-Blan-1429-01), НИЗ-NINDS (R01NS077863), то Тьерри Latran Foundation (OHEX проекта), французская ассоциация миопатия ( грант номер 16026) и Target ALS Бидани. Феликс Лерой был получателем &quot;Contrat докторских&quot; из Ecole Normale Supérieure, Качан.

<ol><li>Brooks, C. M., Downman, C. B., Eccles, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((After-potentials+and+excitability+of+spinal+motoneurones+following+antidromic+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">After-potentials and excitability of spinal motoneurones following antidromic activation.</a> J Neurophysiol. 13 (1), 9-38 (1950).</li>
<li>Bories, C., Amendola, J., Lamotte d'Incamps, B., Durand, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+electrophysiological+abnormalities+in+lumbar+motoneurons+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early electrophysiological abnormalities in lumbar motoneurons in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur J Neurosci. 25 (2), 451-459 (2007).</li>
<li>Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+currents+in+visually+identified+motoneurones+of+neonatal+rat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Membrane currents in visually identified motoneurones of neonatal rat spinal cord.</a> J Physiol. 423, 27-46 (1990).</li>
<li>Hori, N., Tan, Y., Strominger, N. L., Carpenter, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+activity+of+rat+spinal+cord+motoneurons+in+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Intracellular activity of rat spinal cord motoneurons in slices.</a> J Neurosci Methods. 112 (2), 185-191 (2001).</li>
<li>Arai, Y., Mentis, G. Z., Wu, J. Y., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventrolateral+origin+of+each+cycle+of+rhythmic+activity+generated+by+the+spinal+cord+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ventrolateral origin of each cycle of rhythmic activity generated by the spinal cord of the chick embryo.</a> PLoS One. 2 (5), e417(2007).</li>
<li>Cullheim, S., Lipsenthal, L., Burke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+monosynaptic+contacts+between+type-identified+alpha-motoneurons+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Direct monosynaptic contacts between type-identified alpha-motoneurons in the cat.</a> Brain Res. 308 (1), 196-199 (1984).</li>
<li>Cullheim, S., Kellerth, J. O., Conradi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+direct+synaptic+interconnections+between+cat+spinal+alpha-motoneurons+via+the+recurrent+axon+collaterals%3A+a+morphological+study+using+intracellular+injection+of+horseradish+peroxidase%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Evidence for direct synaptic interconnections between cat spinal alpha-motoneurons via the recurrent axon collaterals: a morphological study using intracellular injection of horseradish peroxidase.</a> Brain Res. 132 (1), 1-10 (1977).</li>
<li>Gogan, P., Gueritaud, J. P., Horcholle-Bossavit, G., Tyc-Dumont, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+excitatory+interactions+between+spinal+motoneurones+of+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Direct excitatory interactions between spinal motoneurones of the cat.</a> J Physiol. 272 (3), 755-767 (1977).</li>
<li>Ichinose, T., Miyata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+excitation+of+motoneurons+in+the+isolated+spinal+cord+of+newborn+rats+detected+by+whole-cell+recording%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Recurrent excitation of motoneurons in the isolated spinal cord of newborn rats detected by whole-cell recording.</a> Neurosci Res. 31 (3), 179-187 (1998).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+excitatory+postsynaptic+ionotropic+receptors+coactivated+at+the+motoneuron-Renshaw+cell+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Four excitatory postsynaptic ionotropic receptors coactivated at the motoneuron-Renshaw cell synapse.</a> J Neurosci. 28 (52), 14121-14131 (2008).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+effects+of+centripetal+impulses+in+axons+of+spinal+ventral+roots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Central effects of centripetal impulses in axons of spinal ventral roots.</a> J Neurophysiol. 9, 191-204 (1946).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+nerve+impulses+in+the+gray+matter+as+a+mechanism+in+central+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Fed+Proc%22%5BJournal%5D)">Interaction of nerve impulses in the gray matter as a mechanism in central inhibition.</a> Fed Proc. 5 (1 Pt 2), 86(1946).</li>
<li>Renshaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+interaction+of+nerve+impulses+in+the+gray+matter+and+on+the+nature+of+central+inhibition%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Observations on interaction of nerve impulses in the gray matter and on the nature of central inhibition).</a> Am J Physiol. 146, 443-448 (1946).</li>
<li>Pambo-Pambo, A., Durand, J., Gueritaud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+excitability+changes+in+lumbar+motoneurons+of+transgenic+SOD1G85R+and+SOD1G%2893A-Low%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Early excitability changes in lumbar motoneurons of transgenic SOD1G85R and SOD1G(93A-Low) mice.</a> J Neurophysiol. 102 (6), 3627-3642 (2009).</li>
<li>Quinlan, K. A., Schuster, J. E., Fu, R., Siddique, T., Heckman, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+postnatal+maturation+of+electrical+properties+in+spinal+motoneurons+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered postnatal maturation of electrical properties in spinal motoneurons in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> J Physiol. 589 (Pt 9), 2245-2260 (2011).</li>
<li>Martin, E., Cazenave, W., Cattaert, D., Branchereau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+alteration+of+motoneuronal+morphology+induces+hyperexcitability+in+the+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Embryonic alteration of motoneuronal morphology induces hyperexcitability in the mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol Dis. 54, 116-126 (2013).</li>
<li>Hadzipasic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+degeneration+of+a+physiological+subtype+of+spinal+motor+neuron+in+mice+with+SOD1-linked+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Selective degeneration of a physiological subtype of spinal motor neuron in mice with SOD1-linked ALS.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (47), 16883-16888 (2014).</li>
<li>Wichterle, H., Lieberam, I., Porter, J. A., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+embryonic+stem+cells+into+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of embryonic stem cells into motor neurons.</a> Cell. 110 (3), 385-397 (2002).</li>
<li>Tallini, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BAC+transgenic+mice+express+enhanced+green+fluorescent+protein+in+central+and+peripheral+cholinergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">BAC transgenic mice express enhanced green fluorescent protein in central and peripheral cholinergic neurons.</a> Physiol Genomics. 27 (3), 391-397 (2006).</li>
<li>Manuel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+kinetics%2C+high-frequency+oscillations%2C+and+subprimary+firing+range+in+adult+mouse+spinal+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fast kinetics, high-frequency oscillations, and subprimary firing range in adult mouse spinal motoneurons.</a> J Neurosci. 29 (36), 11246-11256 (2009).</li>
<li>Obeidat, A. Z., Nardelli, P., Powers, R. K., Cope, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+motoneuron+firing+by+recurrent+inhibition+in+the+adult+rat+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of motoneuron firing by recurrent inhibition in the adult rat in vivo.</a> J Neurophysiol. 112 (9), 2302-2315 (2014).</li>
<li>Leroy, F., Lamotte d'Incamps, B., Imhoff-Manuel, R. D., Zytnicki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+intrinsic+hyperexcitability+does+not+contribute+to+motoneuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Early intrinsic hyperexcitability does not contribute to motoneuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Elife. 3, (2014).</li>
<li>Leroy, F., Lamotte d'Incamps, B., Zytnicki, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+currents+dynamically+set+the+recruitment+and+firing+properties+of+F-type+motoneurons+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Potassium currents dynamically set the recruitment and firing properties of F-type motoneurons in neonatal mice.</a> J Neurophysiol. 114 (3), 1963-1973 (2015).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+composition+and+kinetics+of+the+Renshaw+cell+heteromeric+nicotinic+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Subunit composition and kinetics of the Renshaw cell heteromeric nicotinic receptors.</a> Biochem Pharmacol. 86 (8), 1114-1121 (2013).</li>
<li>Lamotte d'Incamps, B., Krejci, E., Ascher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+shaping+the+slow+nicotinic+synaptic+current+at+the+motoneuron-renshaw+cell+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms shaping the slow nicotinic synaptic current at the motoneuron-renshaw cell synapse.</a> J Neurosci. 32 (24), 8413-8423 (2012).</li>
<li>Dugue, G. P., Dumoulin, A., Triller, A., Dieudonne, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-dependent+use+of+co-released+inhibitory+transmitters+at+central+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Target-dependent use of co-released inhibitory transmitters at central synapses.</a> J Neurosci. 25 (28), 6490-6498 (2005).</li>
<li>Mentis, G. Z., Siembab, V. C., Zerda, R., O'Donovan, M. J., Alvarez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+afferent+synapses+on+developing+and+adult+Renshaw+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Primary afferent synapses on developing and adult Renshaw cells.</a> J Neurosci. 26 (51), 13297-13310 (2006).</li>
<li>Perry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Firing+properties+of+Renshaw+cells+defined+by+Chrna2+are+modulated+by+hyperpolarizing+and+small+conductance+ion+currents+Ih+and+ISK%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Firing properties of Renshaw cells defined by Chrna2 are modulated by hyperpolarizing and small conductance ion currents Ih and ISK.</a> Eur J Neurosci. 41 (7), 889-900 (2015).</li>
<li>Thurbon, D., Luscher, H. R., Hofstetter, T., Redman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+electrical+properties+of+ventral+horn+neurons+in+rat+spinal+cord+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Passive electrical properties of ventral horn neurons in rat spinal cord slices.</a> J Neurophysiol. 79 (5), 2485-2502 (1998).</li>
<li>Zengel, J. E., Reid, S. A., Sypert, G. W., Munson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+electrical+properties+and+prediction+of+motor-unit+type+of+medial+gastrocnemius+motoneurons+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Membrane electrical properties and prediction of motor-unit type of medial gastrocnemius motoneurons in the cat.</a> J Neurophysiol. 53 (5), 1323-1344 (1985).</li>
<li>Cooper, S., Sherington, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gower%27s+tract+and+spinal+border+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Gower's tract and spinal border cells.</a> Brain. 63, 123-124 (1940).</li>
<li>Morin, F., Schwartz, H. G., O'Leary, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+the+spinothalamic+and+related+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Psychiatr+Neurol+Scand%22%5BJournal%5D)">Experimental study of the spinothalamic and related tracts.</a> Acta Psychiatr Neurol Scand. 26 (3-4), 371-396 (1951).</li>
<li>Sengul, G., Fu, Y., Yu, Y., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+projections+to+the+cerebellum+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Spinal cord projections to the cerebellum in the mouse.</a> Brain Struct Funct. 220 (5), 2997-3009 (2015).</li>
<li>Russier, M., Carlier, E., Ankri, N., Fronzaroli, L., Debanne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A-%2C+T-%2C+and+H-type+currents+shape+intrinsic+firing+of+developing+rat+abducens+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A-, T-, and H-type currents shape intrinsic firing of developing rat abducens motoneurons.</a> J Physiol. 549 (Pt 1), 21-36 (2003).</li>
<li>Dourado, M., Sargent, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+nicotinic+receptors+underlying+Renshaw+cell+excitation+by+alpha-motor+neurons+in+neonatal+rat+spinal+cord%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Properties of nicotinic receptors underlying Renshaw cell excitation by alpha-motor neurons in neonatal rat spinal cord).</a> J Neurophysiol. 87 (6), 3117-3125 (2002).</li>
<li>Mitra, P., Brownstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+spinal+cord+slice+preparation+for+recording+from+lumbar+motoneurons+of+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">An in vitro spinal cord slice preparation for recording from lumbar motoneurons of the adult mouse.</a> J Neurophysiol. 107 (2), 728-741 (2012).</li>
<li>Rothman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurotoxicity+of+excitatory+amino+acids+is+produced+by+passive+chloride+influx%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The neurotoxicity of excitatory amino acids is produced by passive chloride influx.</a> J Neurosci. 5 (6), 1483-1489 (1985).</li>
<li>Olney, J. W., Price, M. T., Samson, L., Labruyere, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+specific+ions+in+glutamate+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">The role of specific ions in glutamate neurotoxicity.</a> Neurosci Lett. 65 (1), 65-71 (1986).</li>
</ol>

Авторам нечего раскрывать.

Косая нарезка спинного мозга имеет важное значение, поскольку она позволяет односторонней стимуляции мотонейронов бассейнов и клеток Реншоу в одном позвоночном сегменте в надежной, всеобъемлющей и определенным образом. Кроме того, она позволяет быстро, элегантной и не двусмысленной идентификации зарегистрированных мотонейронов. Далее, мы будем выделить преимущества этого метода по сравнению с другими способами получения среза, а затем мы подчеркиваем из наиболее распространенных ошибок, которых следует избегать при выпо...

Исторически сложилось так , мотонейронов записи с помощью острых электрода сравнения были проведены в естественных условиях на крупных животных , таких как кошки или крысы 1 или на изолированном всего спинного мозга у мышей 2. Появление метода записи патч-зажим в течение 1980-х годов, называемый прямой доступ к мотонейроном СОСМ в качестве герметизирующего необходимо достичь под визуальным руководством. Таким образом, спинной мозг препарат срез был легко достигнут с начала 1990 - х годов 3. Тем не менее, в начале подготовки срез часто не позволяли для стимуляции брюшных корней. Насколько нам известно, только два исследования сообщили об успешном стимуляцию брюшных корней в поперечных срезах, и никто не был получен от мышей 4,5. В этой статье мы представляем технику для достижения жизнеспособных спинного мозга ломтиков неонатального мышей (P2 - P11), в котором мотонейрон бассейн сохраняет свои вентральных корешков отходя аксонов. вентиляционныйКорневой стимуляция RAL вызывает Антидромные потенциал действия обратно в РРОС из мотонейроного бассейна, выходящего из того же корня вентральной. Он также возбуждает цели залога мотонейроном, другие мотонейронов 6-10 и клетки Реншоу 11-13. Так как только мотонейроны послать свои аксоны вниз вентральной корни, мы используем запись Антидромные потенциалов действия в качестве простого и окончательного способа physiologicaly идентифицировать мотонейроны 10. В дополнение к использованию потенциально не включено или вводящие в заблуждение электрофизиологические и морфологические критерии для подтверждения личности мотонейроном, недавние исследования по мотонейронов спинного мозга также опирался на утомительно и отнимает много времени постфактум 16 окрашивания. Такая идентификация обычно выполняется только на образце записанных клеток. Другие стратегии идентификации полагаются на линии мышей, в которых мотонейроны выражающих эндогенной флуоресценции <sup&gt; 17-19. Тем не менее, с помощью генетически кодируемых маркеров может быть затруднено в молодом возрасте, когда выражение маркера еще переменная или если исследование уже требует использования трансгенной линии мыши. В качестве альтернативы, Антидромная потенциала действия записи может быть выполнена обычно на всех мышей от начала записи клеток. Экспериментаторы , работающие на интактных препаратах спинного мозга у кошки, крысы и мыши, которые надежно используются такие методы идентификации с 1950 - х 1,2,20,21. В оптимальных условиях, мы смогли выявить Антидромные потенциалы действия практически из всех записанных мотонейронов. Кроме того, вентральной корень стимуляция может быть использована для надежного возбуждения других мотонейронов 22,23 или их цели. клетки Реншоу 10,24,25. Мы представляем здесь приложения вентральной корня стимуляции в виде Антидромная потенциала действия записей из мотонейроного РРОС, а также возбуждение клеток Реншоу.

<table><tbody><tr><td>Na-kynurenate</td><td>ABCAM</td><td>ab120256</td><td>растворяется лучше, чем другие бренды</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>2PO4</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>sucrose&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>G Biosciences</td><td>R040</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Качество биологическое</td><td>351-033-721</td><td></td></tr><tr><td>глюкоза&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>аскорбиновая кислота&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>Na-pyruvate&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P2250</td><td></td></tr><tr><td>К-глюконат&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P1847</td><td></td></tr><tr><td>EGTA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Агар</td><td>Sigma</td><td>A9799</td><td></td></tr><tr><td>QX-314</td><td>Аломон</td><td>Q150</td><td></td></tr><tr><td>Mg-ATP</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Sigma</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Na-GTP</td><td>Sigma</td><td>51120</td><td></td></tr><tr><td>глюконовая кислота</td><td>Sigma</td><td>G1951</td><td></td></tr><tr><td>Раствор гидроксида цезия</td><td>Sigma</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>Sigma</td><td>P5958</td><td></td></tr><tr><td>Весенние ножницы Vannas - 2,5 мм&nbsp;</td><td>FST</td><td>15000-08</td><td>использовать только для разрезания твердой мозговой оболочки, может быть поврежден при разрезании костей</td></tr><tr><td>Стимулятор</td><td>A-M Systems</td><td>Изолированный импульсный стимулятор Модель 2100</td><td></td></tr><tr><td>Вибратом</td><td>Campden</td><td>Вибрационный микротом 7000 - Модель 7000smz-2</td><td></td></tr></tbody></table>

Получение Косой спинного мозга Ломтики для вентральных корешков стимуляции

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

Электрофизиологические записи из спинного мозга срезов оказались ценным техникой, чтобы исследовать широкий круг вопросов, от сотовой сети к свойствам. Мы покажем, как подготовить жизнеспособные косые срезы спинного мозга молодых мышей (P2 - P11). В этом препарате, мотонейронов сохраняют свои аксоны выходят из вентральных корешков спинного мозга. Стимуляция этих аксонов вызывает обратно распространяющихся потенциалов действия агрессора мотонейроного Somas и захватывающие мотонейроного коллатерали в спинном мозге. Возможность записи Антидромные потенциалов действия является непосредственным, окончательным и элегантный способ охарактеризовать личность мотонейроном, которая превосходит другие методы идентификации. Кроме того, стимулируя мотонейроного коллатерали является простым и надежным способом для возбуждения залога целей мотонейронов в спинном мозге, такие как другие мотонейронов или Renshaw клетки. В этом протоколе, мы представляем антидромным записи с мотонейроного СОСМ, а также клеточного возбуждения Реншоу, в результате чего из вентральных корешков стимуляции.

Подтверждение идентичности мотонейроном Использование Потенциалы Антидромная действий Cell нацеливание Мотонейроны находятся в вентральном роге (видимый в красном цвете на рисунке 2в). Начните с пачкой аксонов, образующих вентральной корень и идти вверх до тех пор, пока пучок полностью рассеивает и один начинает видет...

Мы покажем, как подготовить косые срезы спинного мозга у молодых мышей. Этот препарат позволяет для стимуляции брюшных корней.

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...

Общая цель данной процедуры — подготовить косые срезы спинного мозга, позволяющие осуществлять стимуляцию вентральных корешков. Основным преимуществом этого метода является возможность идентификации мотонейронов при стимуляции вентральных корешков и изучения вентральных клеток, иннервируемых коллатералями аксонов мотонейронов. Идея этого метода возникла при необходимости найти надежный способ стимуляции вентральных клеток.Лицам, впервые применяющим данный метод, может быть сложно правильно выполнить различные этапы диссекции. Начните с перфузии мыши в возрасте от P2 до P11 низконатриевым ACSF. После декапитации мыши и удаления кожи на спине сделайте два разреза через плечи вниз по грудной клетке.Затем перережьте спинной мозг как можно ниже в каудальном отделе, чтобы отделить позвоночный столб и ребра от нижней части тела животного. Переверните позвоночный столб и удалите внутренние органы, все еще прикрепленные к ребрам. Перенесите позвоночный столб в другую, меньшую чашку Петри, заполненную силиконом.Добавьте холодный ACSF, продуйте его карбогеном и с помощью четырех энтомологических булавок закрепите ткань дорсальной стороной вверх. Затем выполните ламинэктомию дорсальной стороны, сначала введя кончик тонких ножниц между костью и спинным мозгом и разрезая кость от рострального конца, стараясь не затрагивать белое вещество. Поочередно делайте разрезы с каждой стороны, используя пинцет для удерживания уже отсеченного участка кости.Затем с помощью небольшого пинцета приподнимите твердую мозговую оболочку и маленькими ножницами сделайте надрезы вдоль рострокаудального доступа с обеих сторон. Удаление твердой мозговой оболочки является критически важным этапом. Стоит потратить несколько дополнительных минут, чтобы выполнить это тщательно.После удаления твердой мозговой оболочки с помощью тупого стеклянного зонда осторожно сместите спинной мозг к левой стороне желоба, образовавшегося после полуперерезания позвоночника. Затем перережьте вентральные и дорсальные корешки на освещенной стороне как можно дальше от места их вхождения в спинной мозг. Повторите операцию на левой стороне, всегда двигаясь в рострально-каудальном направлении.После диссекции аккуратно извлеките спинной мозг из позвоночного столба. Затем с помощью маленькой энтомологической булавки закрепите спинной мозг дорсальной поверхностью вверх. Осторожно удалите все части прикрепленной оболочки.После очистки обрежьте оба конца спинного мозга и вставьте изогнутую энтомологическую булавку в переднюю часть спинного мозга, чтобы отметить его ориентацию. Затем перенесите спинной мозг в ледяной внутриклеточный раствор. После этого охладите предварительно подготовленный расплавленный агар на смеси льда и воды.Перемешивайте агар, измеряя температуру. Когда температура агара достигнет 38 °C, возьмите спинной мозг за энтомологическую булавку и погрузите его в агар ростральным концом вниз. Следите за тем, чтобы спинной мозг был максимально выпрямлен, находился на расстоянии от стенок сосуда, а его каудальная часть была слегка приподнята.Оставьте стакан в смеси льда и воды, чтобы агар максимально быстро затвердел вокруг спинного мозга. После затвердевания обрежьте блок агара со спинным мозгом таким образом, чтобы основание блока находилось под углом 35 градусов к поясничному отделу спинного мозга. Дорсальная поверхность должна быть обращена в сторону от основания.Приклейте блок в камеру вибратома, используя цианоакрилатный клей. Крайне важно правильно закрепить блок, чтобы сохранить непрерывность моторных ядер с вентральными корешками, из которых они выходят. Погрузите блок в раствор глюконата калия.Установите параметры вибратома. Затем сделайте срезы поясничного отдела толщиной 350–400 мкм; данный отдел можно определить по его изгибу и большему диаметру. Перенесите подходящие срезы в ACSF при температуре 34 °C.Обычно получается от четырех до пяти подходящих срезов с вентральными корешками длиной два миллиметра или более. После выдержки в течение примерно 30 минут при 34 °C охладите срезы до комнатной температуры, затем начните сеанс записи. Заранее подготовьте набор различных пипеток с диаметром кончиков от 40 до 170 мкм.Для подготовки секционных пипеток выберите пипетки с длинным капилляром. Затем с помощью алмазного ножа сделайте надрезы в разных местах и под диссекционным микроскопом разломите каждую пипетку, ударив по кончику пинцетом. Далее извлеките камеру из регистрирующего микроскопа и поместите ее под диссекционный микроскоп.Выберите срез, содержащий вентральный корешок достаточной длины для установки на вакуумный стимулирующий электрод. Установите срез вентральными корешками вверх, затем аккуратно срежьте агар вокруг вентральных корешков, оставив агар вокруг остальной части среза, и установите сетку для фиксации образца. Установите камеру обратно на микроскоп и обеспечьте непрерывную перфузию регистрирующей камеры раствором ACSF со скоростью 1–2 мл/мин при комнатной температуре.Используя стеклянную пипетку, заполненную ACSF и подключенную к шприцу, присосите один из вентральных корешков. Для обеспечения эффективной стимуляции вентрального корешка кончик пипетки должен плотно облегать корешок. Выполните патч-кламп регистрацию desired cell type и зарегистрируйте эффект стимуляции вентрального корешка, как было описано ранее.На этом изображении показаны результаты регистрации методом фиксации напряжения. Записи на верхних панелях получены от других мотонейронов, чем на нижних панелях. На верхней панели показан антидромный ответ мотонейрона на стимуляцию напряжением 1 В (красным цветом) и 5 В (черным цветом).Нижняя запись показывает ортодромический ответ потенциала действия на стимуляцию напряжением 20 В (красным цветом) и 30 В (черным цветом). Черные точки указывают время подачи стимула. Двойные стрелки подчеркивают разницу в латентных периодах между орто- и антидромическими спайками.Здесь представлены записи в режиме фиксации тока (current clamp). На верхней панели показан антидромный ответ на стимуляцию напряжением 10 В и 15 В, отмеченные красным и черным цветами соответственно. На нижней панели показан ортодромный ответ на стимуляцию напряжением 25 В и 40 В, отмеченные красным и черным цветами соответственно.Снова указаны время подачи стимула и различия в латентных периодах. Это изображение пула клеток Реншо было получено с использованием косого конденсатора и объектива 20x. Обратите внимание на аксоны мотонейронов, сливающиеся в вентральный корешок, что показано стрелкой.Данное изображение того же участка было получено с использованием объектива 40x. Предполагаемые клетки Реншо обозначены стрелками. Здесь представлена запись фиксации потенциала клетки Реншо после стимуляции вентрального корешка, отмеченной черной точкой.QX-314 в составе внутриклеточного раствора предотвращал возбуждение клетки, а ответы на глицин и ГАМК блокировались 3 мкМ габазина и 1 мкМ стрихнина соответственно. Красная кривая представляет собой усредненный показатель серых кривых. После освоения эта методика может быть выполнена за 20–30 минут.При выполнении данной процедуры важно помнить о необходимости постоянно содержать препарат в холодном средстве. После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как подготавливать косые срезы спинного мозга, подходящие для стимуляции вентральных корешков. Стимуляция вентральных корешков может быть использована для простого подтверждения мотонейронной идентичности и, что более важно, для надежной стимуляции вентральных клеток.

the-preparation-oblique-spinal-cord-slices-for-ventral-root

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Нейронауки

Мы описываем процедуры подготовки и электрофизиологические записи с срезах мозга, которые поддерживают спинно-вентральной оси медиальное энторинальной коры (MEC). Поскольку нейронная кодирования место следующим спинно-вентрально организации в MEC, эти процедуры облегчить исследование клеточных механизмов, важных для навигации и память.

Подготовка парасагиттальных фрагментов для исследования спинного-вентральной организации грызунов медиальной энторинальной коры

Это видео описывает внутриклеточную запись мотонейронов крыс in vivo при трансспинальной стимуляции постоянным током. В протоколе описывается, как измерять свойства мембраны и регистрировать ритмичное возбуждение мотонейронов до, во время и после анодной или катодной поляризации спинного мозга.

Трансспинальная стимуляция постоянным током спинномозговой моторонуры крысы

Это видео демонстрирует анализ на основе микроэлектродной матрицы для изучения активности нейронной сети в срезах спинного мозга мыши. Во-первых, регистрируется электрофизиологическая активность поверхностного дорсального рога (СДГ) среза. Затем вводится ингибитор калиевых каналов для продления деполяризации, что приводит к синхронной ритмической активности по всей нейронной сети.

Оценка нейронных сетей в срезах спинного мозга мышей на основе микроэлектродной матрицы

Запись токов Ca2+ на лицевой мембране пресинаптического высвобождения является ключом к точному пониманию входа Ca2+ и высвобождения нейротрансмиттеров. Мы представляем острую диссоциацию спинного мозга миноги, которая дает функциональные изолированные ретикулоспинальные аксоны, позволяющие регистрировать непосредственно из высвобождаемой лицевой мембраны отдельных пресинаптических окончаний.

Острая Диссоциация миноги ретикулоспинальных Аксоны активировать запись от выпуска Face мембраны отдельных функциональных пресинаптических окончаниях

Эффективность внутримышечного поглощения и ретроградного транспорта молекул к соответствующим моторным нейронам зависит от расположения мест инъекций относительно моторных концевых пластин (MEP). В этой статье мы описываем, как расположить MEP на скелетных мышцах для оптимизации ретроградного транспорта индикаторов в моторные нейроны.

Внутримышечных инъекций по плитам двигателя End: Минимально инвазивная подход к Shuttle TRACERS Непосредственно в моторные нейроны

Здесь мы описываем основные шаги для поклеточного фиксации записи, сделанные из substantia gelatinosa (SG) нейронов спинного мозга в vitro фрагментов. Этот метод позволяет внутренней мембраны свойства, синаптической передачи и морфологическая характеристика SG нейронов быть изучены.

Подготовка острого спинного фрагменты записи поклеточного патч зажим в Substantia Gelatinosa нейронов

Этот протокол как визуально общается спинного мозга подготовки и разъясняет подготовку ствола мозга поперечных срезов всеобъемлющим образом шаг за шагом. Он был разработан для увеличения воспроизводимость и повысить вероятность получения жизнеспособных, длительное, ритмично активные фрагменты для записи нейронной вывода из дыхательных регионов мозга.

Подготовка ритмично активные в Vitro неонатальной грызунов ствола мозга-спинного мозга и тонкий ломтик

Этот протокол описывает внутриклеточную запись внутриклеточной записи крысиных поясничных мотонейронов с одновременным транс-спинномозговой стимуляцией прямого тока. Метод позволяет измерять мембранные свойства и записывать ритмическую стрельбу мотонейронов до, во время и после анодальной или катодальной поляризации спинного мозга.

В Vivo внутриклеточной записи тип-идентифицированных крыс спинного мотонейронов во время транс-спинного прямого тока стимуляции

Интеграция различных синаптических входов в нейроны лучше всего измеряется в препарате, который сохраняет все до синаптические ядра для естественного времени и пластичности цепи, но ломтики мозга обычно разрывают многие соединения. Мы разработали модифицированный срез мозга, чтобы имитировать активность цепи in vivo, сохраняя при этом возможности экспериментов в пробирке.

In Vitro Клин Фрагмент Подготовка для имитации In Vivo Нейрональной цепи подключения

Описано совместное использование технологии микроэлектродных массивов и 4-аминопиридин-индуцированной химической стимуляции для исследования ноцицептивной активности на сетевом уровне в спинном роге спинного мозга.

Запись сетевой активности в спинальных ноцицептивных цепях с помощью микроэлектродных матриц

Этот протокол описывает метод с использованием патч-зажима для изучения электрических реакций двигательных нейронов на стимуляцию спинного мозга (SCS) с высоким пространственно-временным разрешением, который может помочь исследователям улучшить свои навыки в разделении спинного мозга и поддержании жизнеспособности клеток одновременно.

Подготовка ex vivo среза спинного мозга для регистрации цельноклеточного патча-зажима в двигательных нейронах при стимуляции спинного мозга

Изучите методику получения косых срезов спинного мозга мышей для стимуляции вентральных корешков. Эта техника позволяет идентифицировать мотонейроны и изучать вентральные клетки, иннервируемые аксональными коллатералями.

Получение Косой спинного мозга Ломтики для вентральных корешков стимуляции

Больше видео