18 декабря 2016 г.
Организованные процедуры резки мозговые необходимо соотнести конкретные психоневрологические явления с окончательными нейропатологические диагнозов. Мозговые черенки выполняются по-разному на основе различных клинико-академических непредвиденных обстоятельств. Этот протокол описывает симметричный bihemispheric процедуру резки мозга, чтобы исследовать полусферических различия в патологии головного мозга человека и максимально увеличить текущие и будущие методы биомолекулярная / нейровизуализации.
Общая цель этой процедуры заключается в систематическом сборе и анализе постоянного ряда областей головного мозга, симметрично рассеченных из обоих полушарий мозга человека, с целью оценки тяжести, клинической патологической стадии и полушарного распределения различных заболеваний головного мозга. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области невропатологии, обеспечивая систематически организованный сбор качественных и количественных невропатологических данных для детальных клинических, патологических и визуализирующих патологических корреляций. Основное преимущество этого метода заключается в получении релевантных данных, связанных с патологическими процессами как таковыми, а также с гистофункциональным специализированным аспектом каждого полушария головного мозга.
После фиксации посмертной ткани мозга человека в соответствии с текстовым протоколом поместите мозг на плоскую поверхность так, чтобы лобные полюса были направлены в противоположную сторону исследователя. Ориентируйте мозг так, чтобы обеспечить полную и четкую визуализацию всех корковых извилин и борозд всего головного мозга. Исследуйте ткани на наличие аномалий менингеального слоя, макроскопических межполушарных асимметрий, макроскопической принадлежности тканей, врожденных пороков развития, аномалий сосудов или любых других аномалий или необычных проявлений мозговой поверхности.
Когда фронтальные полюса ориентированы в сторону от исследователя, а поверхностные части полушарий обращены к исследователю, сделайте столько цифровых снимков, сколько необходимо, чтобы задокументировать возможные макроаномалии и учесть возможные клинические, нервные, анатомические и пострезанные соображения. Делайте цифровые снимки перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга. Затем с помощью чернил или цветных игл отметьте пре- и постцентральные корковые извилины.
Затем, по-прежнему держа лобные полюса стороной в сторону, поверните мозг на 180 градусов, затем внимательно осмотрите основание мозга, уделяя особое внимание цереброваскулярным системам и черепно-мозговым нервам на уровнях выхода и входа ствола мозга. Ухаживайте за обонятельными луковицами и трактами с особой осторожностью, чтобы избежать разрыва тканей из-за их крайней хрупкости. Сделайте цифровые фотографии перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга и ствола мозга.
Лицом к основанию мозга и с помощью скальпеля разрежьте ствол мозга поперечно в верхней части моста как можно ближе к основанию головного мозга. Внимательно осмотрите черную субстанцию на предмет бледности и осмотрите другие соседние строения. Используя аудиозаписывающее устройство, обратите внимание на любой необычный внешний вид мозга по сравнению с нормальным мозгом.
Здесь рассекается обонятельная луковица и тракт левого, а затем правого полушарий. Переверните мозг обратно и с помощью острого ножа следуйте лобно-затылочному направлению, чтобы разделить два полушария, разрезая мозолистое тело по центру через медиальную продольную щель. Осмотрите каждую сторону каждого полушария на предмет возможных аномалий.
После того, как вы сделаете столько снимков, сколько необходимо, в том числе перпендикулярно мозгу, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга, поместите два полушария плашмя, лежа на их медиальных сторонах так, чтобы лобные доли были обращены в сторону от исследователя и их центры соприкасались. С помощью острого ножа вручную разрежьте оба полушария головного мозга, начиная с лобных полюсов, и двигайтесь к затылочным полюсам по всей длине полушарий, чтобы получить два ряда плит мозговой ткани толщиной в один сантиметр. Расположите пластины мозга в анатомически организованной и симметричной последовательности на плоской белой поверхности с напечатанной на ней линейкой для фотографирования.
Убедитесь, что коронковые поверхности плиты видны для непосредственного осмотра глазом и цифровой фотографии. Используйте режущие поверхности с напечатанными миллиметровыми сетками с обеих сторон, чтобы более точно локализовать структуры мозга, размеры и возможные аномалии. Когда корональные поверхности видны, сделайте цифровые фотографии перпендикулярно, чтобы захватить всю поверхность коры головного мозга.
Делайте заметки о любом необычном аспекте мозга по сравнению с нормальным мозгом. Далее с помощью острого скальпеля вручную препарируйте небольшие прямоугольные блоки мозговой ткани для каждой установленной области мозга. Следуйте предложенной схеме сбора церебральных областей, описанной в этой таблице.
Создайте идентификационные коды для маркировки гистокассет, генерируя случайные или полуслучайные числа для каждого случая, где AD означает исследование болезни Альцгеймера, 16 — год проведения вскрытия, а 0001 — порядковый номер образца присоединения. Поместите каждый блок ткани в отдельные гистокассеты. Сделайте столько цифровых фотографий, сколько описано ранее, всего разрезанного мозга и связанных с ним гисто-кассет.
После того, как вы сделаете полный набор снимков, пробейте от двух до пяти миллиметровых кусочков ткани для извлечения ДНК и генетического анализа. Наконец, погрузите все гистокассеты, содержащие блоки мозговой ткани, в тот же тип фиксирующего раствора, что и ранее использовавшийся, и обработайте ткань в соответствии с текстовым протоколом. В этой таблице описаны некоторые предварительные полуколичественные данные с использованием симметричной процедуры биполушарного разрезания мозга, выполненной на ряде человеческих мозгов, собранных в банке мозга.
Предварительные данные показывают, что большинство контрольных мозгов пожилых людей были на самом деле положительными на бета-А нейритные бляшки и тау-нейрофибриллярные клубки, и что уровни нерастворимых бета-А нейритных бляшек были выше в левой энторинальной коре и гиппокампе по сравнению с теми же областями мозга с правой стороны. После освоения эта техника может быть завершена за час для неподвижного мозга и за два часа для свежего мозга, если она выполнена правильно. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить, что, следуя предложенной схеме разреза, соберите каждую область мозга из обоих полушарий, основываясь на точных анатомических знаниях человека.
После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как экстракция ДНК, РНК или белка, чтобы ответить на дополнительные вопросы, например, каковы уровни активации определенного гена в определенной области мозга в определенном полушарии при конкретном заболевании мозга. С каждой диффузией этот метод проложит путь исследователям в области невропатологии, клинической патологии и корреляции визуальных патологий для изучения патологических аспектов различных нейропсихиатрических заболеваний, связанных с полушариями. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как собирать конкретные анатомические области из обоих полушарий человеческого мозга для оценки тяжести заболевания, патологической стадии заболевания и полушарного распределения различных невропатологических процессов.
Не забывайте, что работа с человеческим мозгом – это работа с историей человека со сложными нейроанатомическими цепями и, возможно, с различными заболеваниями, и что с лезвиями, скальпелями, формалином нужно обращаться с особой осторожностью.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данном протоколе описана процедура симметричного бигемисферного распила головного мозга, предназначенная для исследования межполушарных различий при патологиях головного мозга человека. Это позволяет собирать качественные и количественные нейропатологические данные для улучшения корреляции между клиническими данными, результатами визуализации и патоморфологическими изменениями.
Симметричное бигемисферное рассечение головного мозга позволяет систематически собирать нейропатологические данные из обоих полушарий мозга, что способствует снижению механистических рисков при валидации нейропсихиатрических мишеней. Данный подход повышает прогностическую уверенность, обеспечивая получение анатомически организованной ткани для корреляции клинических фенотипов с патологией конкретного полушария, что позволяет принимать обоснованные решения на ранних этапах поиска при разработке препаратов для ЦНС.
Данный метод интегрируется в процесс разработки лекарственных средств — от валидации мишени до доклинических исследований — путем предоставления анатомически контролируемой ткани головного мозга человека для проведения исследований на основе выдвинутых гипотез.