Определение относительной клеточной поверхности и Total экспрессии рекомбинантных ионных каналов с помощью проточной цитометрии

Общая цель этого метода заключается в количественной оценке экспрессии мембранных белков на клеточной поверхности с помощью флуоресцентного анализа. Основное преимущество этого метода заключается в том, что проточные цитометрические анализы позволяют получить количественные конечные точки на больших объемах живых клеток за один эксперимент. Применение этого метода распространяется на диагностику и терапию сердечно-желудочковых аритмий, поскольку эти патологии часто связаны с генетическими мутациями, вызывающими дефекты в транспортировке сердечных ионных каналов.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, изо всех сил пытаются определить подходящее место экстрарсального введения эпитопа, которое не вредит их белковой функции и генерирует сильный флуоресцентный сигнал в присутствии конъюгированного антитела. Демонстрировать эту процедуру будет Бенуа Бурден, научный сотрудник моей лаборатории. Для начала, двойная метка ДНК конструируется с mCherry на внутриклеточном С-конце