Модель ремоделирования сердца Через сужением брюшную аорту у крыс

Общая цель хирургической процедуры состоит в том, чтобы обеспечить простую платформу для изучения гипертрофии, ремоделирования и дисфункции миокарда. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области сердечно-сосудистой системы, такие как передача сигналов, связанная с кардиогипертрофией и ремоделированием. А также открытие новых терапевтических мишеней при гипертонической болезни сердца.

Основное преимущество этой методики заключается в том, что это минимально инвазивный метод, который требует очень простых хирургических техник, и при этом результаты высоко воспроизводимы. Применение этих методов распространяется и на нашу терапию гипертонической болезни сердца. Так как сужение брюшной аорты вызывает перегрузку давлением и в конечном итоге приводит к кардиогипертрофии, ремоделированию и сердечной недостаточности.

Для начала подготовьте иглу для шприца 22 калибра, используя хонингующий камень, чтобы затупить кончик. Затем с помощью плоскогубцев проколотите иглу под прямым углом. Подготовьте необходимые хирургические материалы, включая каркас для восстановления и автоклавирование хирургических инструментов.

Поддерживайте вес крыс около 200 граммов и держите их в течение 12-часовых циклов света и темноты при контролируемой температуре со свободным доступом к пище и воде. Поместите крысу в лежачем положении на операционную платформу с грелкой для поддержания температуры тела. Полностью выбрейте операционную область, чтобы избежать загрязнения раны при контакте с мехом.

Затем с помощью бетадина или другого смягчающего реагента протрите чисто выбритый живот. Далее с помощью скальпеля сделайте двухсантиметровый надрез по средней линии живота. Затем, используя обычный физиологический раствор, увлажните органы брюшной полости и поддерживайте органы во влажном состоянии во время операции.

С помощью ватных шариков аккуратно сместите органы пищеварения в сторону, чтобы обнажить нижнюю полую вену и заднюю брюшинную область. Затем определите брюшную аорту, которая находится рядом с нижней полой веной и, как правило, слева от нее. Теперь щипцами проткните брюшину, чтобы открыть сосуды под ней.

Аккуратно изолируйте брюшную аорту, прилегающую к почечным артериям, и проведите восьмисантиметровый шелковый шов длиной 4/0 под сосуд между истоками правой и левой почечных артерий. Сделайте свободный двойной узел со швом и оставьте петлю диаметром три миллиметра. Затем поместите затупленную и согнутую иглу 22 калибра внутрь петли.

Затяните узел вокруг аорты и иглы, а затем сразу же снимите иглу, чтобы достичь сужения диаметром 0,7 миллиметра. Швами 6/0 закрывают брюшную полость. Затем используйте простые прерывистые швы, чтобы закрыть разрезы мышц и кожи.

Используйте настойку йода для скрабирования места операции, чтобы предотвратить инфицирование. Для предотвращения послеоперационных болей обрабатывайте животное ацетаминофеном и внимательно наблюдайте за животным до тех пор, пока оно не придет в сознание, достаточное для свободного движения и приема пищи, и не сохранит лежачее положение на грудине. Через 10 недель после операции взвесьте крысу.

После обезболивания животного и подтверждения глубины анестезии поместите крысу на металлический лоток. Теперь сделайте пятисантиметровый разрез в грудном отделе вокруг средней линии мечевидного отростка. С помощью острых щипцов прокалывают диафрагму.

Затем ножницами разрежьте и удалите грудную клетку по среднеключичным линиям с обеих сторон, чтобы обнажить сердце. Тщательно иссекайте сердце по сердечной и сосудистой границам. Затем аккуратно удалите сердце, не захватывая ткань.

Установите сердце на модифицированный перфузионный аппарат Лангендорфа, привязав ствол аорты к перфузионной игле. Затем используйте буфер Кребса для перфузии сердца и вымывания крови. Взвесьте сердце и рассчитайте отношение массы сердца к массе тела.

Затем, надев маску, поместите орган в 4%-ный параформальдегид и закрепите его на льду на ночь. После фиксации сердечной ткани поместите ее на устройство для разрезания ткани, разрежьте на срезы толщиной два миллиметра и поместите срезы в закладную кассету. После заделки парафина и дополнительного секционирования в соответствии с текстовым протоколом депарафинизируйте слайды, поместив их в резервуар с ксилолом на 30 минут.

Затем регидратируйте ткань в последовательно разбавленном спирте с последующей дистиллированной водой. Затем используйте подходящий раствор пикросириуса красного, чтобы полностью покрыть участки тканей и инкубировать в течение одного часа. Затем с помощью 0,5%-ного раствора уксусной кислоты промыть предметные стекла два раза.

И дважды промыть образцы в абсолютном спирте. Высушите образцы на воздухе и закрепите их в синтетической смоле с помощью защитного стекла. Затем используйте видимый свет под микроскопом при 200-кратном увеличении, чтобы получить изображение предметных стекол.

Наконец, рассчитайте процентное соотношение красной положительной зоны пикрозириуса по всей площади, которое указывает на степень фиброза. Как показано здесь, объем сердца увеличился после операции по сужению брюшной аорты. О чем свидетельствует более высокое отношение массы сердца к массе тела, что является показателем гипертрофии сердца.

С помощью окрашивания пикросириусом в красный цвет можно отличить фиброзный миокард с повышенным содержанием коллагена от нормальных участков. Как показано в этих окрашенных образцах, сердечный фиброз был увеличен после операции по сжатию брюшной аорты по сравнению с контрольной группой. После освоения операция может быть выполнена за 30 минут, если она выполнена правильно.

После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как эхокардиография, чтобы ответить на дополнительные вопросы о функции сердца. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области гипертонической болезни сердца к изучению механизмов, связанных с кардиогипертрофией, ремоделированием и недостаточностью. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выполнять сужение брюшной аорты, чтобы вызвать кардиогипертрофию и ремоделирование миокарда у крыс.