Переходная средней мозговой артерии Окклюзия Модель неонатальной инсульта в P10 Крысы

Неонатальный инсульт является важной причиной раннего повреждения головного мозга, требующей трансляционной модели с последовательными паттернами очаговых повреждений и высокой воспроизводимостью для проведения исследования. В данном исследовании подробно описана хирургическая процедура создания негеморрагического, одностороннего очагового ишемии-реперфузионного повреждения у доношенных грызунов.

Общая цель транзиторной окклюзии средней мозговой артерии у неонатальных крыс состоит в том, чтобы обеспечить трансляционную модель инсульта у доношенных новорожденных. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области ишемического повреждения мозга у новорожденных, понимая механизмы повреждения и восстановления в развивающемся мозге, а также то, как мы можем изменить их с помощью различных терапевтических стратегий. Основное преимущество данной методики заключается в том, что она обеспечивает физиологически точную модель очагового артериального ишемического инсульта у новорожденных, а также включает в себя реперфузионный компонент, который является важной частью прогрессирования травмы у новорожденных человека.

Визуальная демонстрация этой модели имеет решающее значение, потому что этапы этой операции могут быть очень сложными для изучения. Двумерные представления анатомии артерий не всегда адекватно демонстрируют сложную природу трехмерного ветвления у крыс. Начните с взвешивания щенка, чтобы убедиться, что его вес составляет от 19 до 21 грамма.

После обезболивания щенка с помощью ингаляционного изофлурана в соответствии с утвержденными протоколами убедитесь, что реакции на щипот ноги не последовало. Поддерживайте температуру поверхности тела с помощью грелки под операционным этапом. Закрепите животное в лежачем положении с помощью ленты через плечевые области.

Стерильными ватными тампонами промокните переднюю шейную область с 70% этанолом, а затем нанесите тампон раствором повидон-йода. Затем локально инфильтрируйте 0,25% бупивакаина в запланированное место разреза. Затем, работая через стереоскоп, сделайте средний разрез на пять-семь миллиметров спереди шейного отдела, чтобы обнажить общую сонную артерию.

Установите от двух до четырех ретракторов, чтобы полость оставалась открытой, а артерия открытой. Затем найдите внутреннюю сонную артерию, затылочную артерию и наружную сонную артерию. Удалите соединительную ткань и жир из артерий, чтобы получить четкий обзор.

Отрезав 1,5 сантиметра шелка из 6-0 шелковых швовных нитей, расплести шов, вытягивая отдельные нити. Следите за тем, чтобы отдельные пряди были аккуратными и не потрепанными. Удерживая нить нити в пределах 45 градусов щипцами, проведите щипцы по дуге под ВСА так, чтобы кончики оказались между ВСА и ОА. Далее возьмитесь за конец нити нити и потяните его так, чтобы конец был легко доступен.

Освободите прядь от щипцов и вытащите щипцы из-под ICA, обратив предыдущее движение. Завяжите временную лигатуру вокруг ICA у основания, ближайшего к тому месту, где она отделяется от CCA. Осторожно втяните ВСА латерально, затем с помощью зажима закрепите втягивающую прядь к лишней коже возле подмышечной впадины на стороне, противоположной разрезу.

Убедитесь, что втягивающая прядь достаточно натянута, чтобы остановить кровоток, прежде чем переходить к следующему шагу. Артерия должна быть ровной и бледной. С помощью щипцов под углом 45 градусов захватите еще одну неплетеную нить шва и провяжите ее под и вокруг ВСА, как и раньше.

Расположите эту прядь сбоку от втягивающей нити. Затем разрежьте артериотомию на 0,2 миллиметра посередине между перевязанными и неперевязанными лигатурами, ошибаясь ближе к перевязанной лигатуре. Теперь с помощью метрической линейки измерьте 10 миллиметров нейлонового шовного материала с силиконовым покрытием в качестве окклюзионного шва.

Разрежьте шов с дополнительным припуском в два-три миллиметра для снятия во время реперфузии. Удерживайте окклюзирующий шов щипцами под углом 45 градусов, а прямыми щипцами создавайте изгиб, отмечая точку остановки продвижения. Введите окклюзирующий шов в артериотомию, направляя его параллельно ЭКА и в сторону головки.

Плавно продвигайте шов до тех пор, пока не будет достигнут изгиб. Затем используйте прядь, расположенную сбоку от ретракционной нити, чтобы завязать временную лигатуру для фиксации окклюзионного шва. Снимите втягивающий зажим, затем обрежьте пряди обеих временных лигатур, оставив прядь, которая будет использоваться для снятия узла, длиннее пряди, используемой для ее затягивания.

Снимите ретракторы и закройте полость с помощью плетеного шелка 6-0, чтобы создать три или четыре прерывистых шва. Извлеките щенка из наркоза, и положите его на грелку на комнатный воздух. Наблюдайте за щенком до тех пор, пока он не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения на грудине, и убедитесь, что он полностью пришел в себя, прежде чем возвращать его к матери.

Во время окклюзии можно использовать диффузионно-взвешенную магнитно-резонансную томографию для проверки соответствующей индукции травмы. На этих изображениях показано продолжающееся ишемическое повреждение, обозначенное стрелкой, обнаруженное с помощью DW-MRI во время транзиторной MCAO. Примерно через два часа и 50 минут после окклюзии MCA подготовьте хирургические материалы, а затем начните процедуру реперфузии под наркозом, как и раньше.

Снимите прерванные швы и найдите место соединения, отмеченное двумя лигатурами и хвостовым концом окклюзирующего шва. Аккуратно развяжите самый боковой узел временной лигатуры, потянув за более длинную прядь, и извлеките шовную прядь из полости. Ровно через три часа после окклюзии MCA медленно выведите окклюзивный шов из артерии.

Сопротивления быть не должно. С помощью щипцов надавите на артериотомию, а затем осторожно развяжите медиальный узел для восстановления кровотока. После снятия шовной нити с тела нанесите на артериотомию кровоостанавливающее средство для остановки кровотечения.

Возвращение артерии первоначальной формы и красного цвета подтверждает, что кровоток ВСА восстановился. Снимите ретракторы, и закройте полость с помощью плетеного шелка 6-0, чтобы создать три или четыре прерванных шва. Извлеките щенка из наркоза и дайте ему восстановиться под наблюдением, как и раньше, прежде чем вернуть его в домашнюю клетку.

Осматривайте щенков ежедневно в течение пяти дней. Запишите их вес и внимательно осмотрите места разрезов для надлежащего заживления. Эти 50-микронные корональные участки мозга, окрашенные крезил-фиолетовым цветом, полученные от животных P-38, демонстрируют довольно серьезные травмы после трехчасового TMCAO на P-10.

Стрелка указывает на образование ипсилатеральной кисты и уменьшение объема коры и стриарного тела. Круглое отверстие с левой стороны представляет собой идентификатор контралатеральной полусферы. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить, что, хотя эта процедура концептуально проста, успех и мастерство могут потребовать часов оптимизации и практики.

После освоения окклюзия может быть завершена менее чем за 10 минут, в то время как реперфузия может быть завершена менее чем за пять минут.