Модель мыши для трансплантации поджелудочной железы с помощью модифицированных манжеты

Меня зовут Бенно Кардини, я работаю в исследовательской лаборатории Даниэля Сваровски отделения висцеральной, трансплантационной и торакальной хирургии Медицинского университета Инсбрука. Сегодня мы покажем вам модель мыши для трансплантации поджелудочной железы с использованием модифицированной техники манжеты. Обезболить животное-донора с помощью внутрибрюшинной инъекции кетамина и ксилазина, а также побрить брюшную область.

Затем поместите реципиента на операционное поле в положение лежа на спине, и трижды очистите операционную область хлоргексидином. Теперь выполните лапаротомию по средней линии от лобковой области к мечевидной кости и увеличьте разрез подреберно с обеих сторон, чтобы получить лучший обзор операционного поля. Затем выведите внутренние органы наружу с левой стороны и введите гепарин в инфраренальную полую вену.

На следующем этапе определите брюшную аорту проксимальнее пересечения левой почечной вены, подорвите аорту и перевяжите ее в этой точке. Теперь перейдите к воротам печени, определите и рассеките общий желчный проток рядом с печенью и перевяжите его рядом с поджелудочной железой. Наконец, пересеките общий желчный проток над лигатурой.

Затем рассеките воротную вену близко к печени, чтобы достичь достаточной длины для венозного анастомоза. В качестве совета оставьте небольшой кусочек печени на воротной вене для последующей более легкой идентификации. Далее подорвать левую почечную вену в околоаортальной ткани и перевязать ее.

Затем пересекут почечную вену и околоаортальную ткань, оставаясь с правой стороны от лигатуры. Далее тупо рассеките брюшную аорту от чревного ствола до диафрагмы, подорвите аорту близко к диафрагме и пересекте ее в этой точке. Далее определите и коагулируйте все ветви поясницы и пересекте их.

Теперь пересеките аорту под ранее установленной лигатурой. Теперь перфузируйте поджелудочную железу через аортальный пластырь ледяным перфузионным раствором до тех пор, пока не увидите, как стоки выходят из воротной вены. Сверху можно увидеть перфузированную воротную вену и ниже перфузированную аорту.

Теперь переместите внутренности в брюшную полость и поэтапно отделите поджелудочную железу от кишечника с помощью 8-0 шелковые лигатуры. Начиная с постпилорической области подорвать двенадцатиперстную кишку два раза и вытянуть 8-0 через него шелковую лигатуру. Затем перевязать его и резко отделить поджелудочную железу от двенадцатиперстной кишки.

Этот подход многократно выполняется до тех пор, пока не дойдет до связки Трейца. Важно не повредить двенадцатиперстную кишку, так как это исключит привой из экспериментов из-за возможного загрязнения. После того как поджелудочная железа полностью отделилась от двенадцатиперстной кишки, перейдите к брыжейке, подорвите ее и перевязайте, а затем пересечьте.

По аналогии с предыдущими шагами отделите поджелудочную железу от поперечной ободочной кишки, подорвая ее, перевязывая и, наконец, пересекая. Теперь, используя тот же подход, отделите поджелудочную железу от желчевыводящей области, резко рассекая ее после перевязки. Впоследствии тупо рассекают поджелудочную железу от желудка.

Определите левую желудочную артерию, перевязайте ее и пересектейте. В конце удалите поджелудочную железу с прикрепленной селезенкой и поместите ее в ледяной реперфузионный раствор до дальнейшей имплантации. Используйте селезенку в качестве ручки.

По аналогии с донором, обезболить животное-реципиента с помощью внутрибрюшинной инъекции кетамина и ксилазина и побрить шейную область. После этого положите донорское животное на операционное поле в лежачее положение и трижды обработайте шейный отдел хлоргексидином. Далее выполните разрез кожи от яремного разреза до правого нижнечелюстного угла.

Далее определите все боковые ветви правой наружной яремной вены, мобилизуйте их, подорвите и разделите после биполярной коагуляции. После этого захватите нижний полюс правой подчелюстной железы, поднимите его кранибулярно и рассеките после биполярной коагуляции питающих сосудов. Теперь пересеките все медиальные ветви правой наружной яремной вены после биполярной коагуляции.

Перевязать наружную яремную вену в два раза краниальнее и разделить ее между лигатурами. Пропустите проксимальный конец наружной яремной вены через полиэтиленовую манжету. Здесь важно, чтобы ручка манжеты была обращена к оперирующему хирургу.

В качестве следующего шага установите микрососудистый венозный зажим, идущий с боковой стороны. Теперь смочите вену гепарином, снимите лигатуру и аккуратно натяните вену на полиэтиленовую манжету. В конце зафиксируйте вену над манжетой с помощью кругового 8-0 шелковая лигатура с одним узлом сзади и тремя спереди.

Чтобы получить доступ к правой общей сонной артерии, мобилизуйте и пересеките правую грудино-ключично-сосцевидную мышцу после проксимального и дистального свертывания. Затем аккуратно мобилизуйте общую сонную артерию, стараясь не повредить соседние структуры, такие как блуждающий нерв. По аналогии с веной перевязать общую сонную артерию дважды, как можно краниальнее, и разделить ее между лигатурами.

Теперь пропустите сосуд через артериальную манжету. Наконец, зафиксируйте артериальную манжету микрососудистым зажимом, идущим с медиальной стороны. Далее удалите лигатуру и расширите просвет артерии с помощью расширителей сосудов.

После достаточного расширения просвета потяните артерию над артериальной манжетой. В конце, по аналогии с веной, фиксируем артерию с помощью 8-0 шелковая лигатура. Здесь вы можете увидеть, как вена и артерия восстанавливаются после артериального венозного анастомоза.

Для имплантации поместите трансплантат на увлажненный туз в шейной области. Затем протяните воротную вену через 8-0 Шелковой лигатурной петлей, укоротите вену для анастомоза без натяжения и затем подтяните воротную вену над венозной манжетой. Наконец, зафиксируйте вену циркуляром 8-0 шелковая лигатура.

По аналогии с веной пропустите культю аорты через лигатурную петлю и укоротите аорту. Затем подтяните аорту над артериальной манжетой и окончательно зафиксируйте ее круговым 8-0 шелковая лигатура. Перед реперфузией определите сосуды селезенки и перевяжите их, а затем резко рассеките их и удалите селезенку.

Для реперфузии сначала удаляют венозный зажим, а затем артериальный. Адекватная реперфузия трансплантата показывает видимую пульсацию артерии и розоватый цвет всего трансплантата. Смочите привой нормотермным солевым раствором.

Перед закрытием раны снимите ручку венозной манжеты, чтобы избежать перегиба сосуда. В конце закройте рану 6-0 ходячим швом и введите подкожно 0,5 миллилитров нормотермного физиологического раствора. Для валидации модели мы проверили эндокринную функцию трансплантированной поджелудочной железы.

Мышам развили гипогликемию после предварительного лечения стрептозотоцином за четыре дня до операции, и они считались гипогликемическими, если уровень глюкозы в крови превышал 300 миллиграммовых процентов. На этом линейном снимке красным цветом показаны уровни глюкозы в крови живых нетрансплантатированных контрольных мышей, а синим цветом – реципиенты трансплантатов, не подвергавшихся длительному времени холодной ишемии. Кроме того, зеленым цветом выделены уровни глюкозы в крови реципиентов панкреатических трансплантатов, подвергшихся воздействию 16-часового времени холодной ишемии.

У живых мышей сохранялась гипогликемия в течение всего периода наблюдения. Напротив, трансплантация трансплантатов поджелудочной железы без длительного времени холодной ишемии приводила к нормальной гликемии в течение 24 часов, что подтверждало эндокринную функцию трансплантата. Трансплантация трансплантатов, подвергшихся воздействию 16-часового времени холодной ишемии, не восстановила нормальную гликемию у реципиентов.

Более того, в этой группе все мыши должны были быть принесены в жертву в течение 48 часов из-за ишемической реперфузионной травмы, связанной с ранним повреждением трансплантата. В этом видео мы представили метод трансплантации поджелудочной железы у мышей с использованием техники без наложения швов. Это технически и микрохирургически осуществимо с отличными показателями успеха.

Однако, учитывая прогрессирующий фиброз поджелудочной железы из-за окклюзии протока, мы считаем, что эта модель лучше всего подходит для областей исследований, сосредоточенных на более раннем повреждении трансплантата, связанном с ишемической реперфузионной реперфузией.