Name: Опухоль Модель и опухолевой мышиной цистопластики Система обнаружения (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Узнайте нехирургический метод создания ортотопических немышечно-инвазивных опухолей мочевого пузыря у мышей C57BL/6J для оценки интравезикальных терапий. Этот протокол позволяет легко мониторить рост опухолей.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Эта работа была профинансирована за счет гранта Национального совета медицинских исследований Сингапура (NMRC/CIRG/1335/2012), присужденного профессору Кесавану Эсуваранатану.

<ol><li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
<li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li>
<li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181(2013).</li>
<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+cancer%3A+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3(2016).</li>
<li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
<li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li>
<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

Авторам нечего раскрывать.

Наиболее важные шаги в протоколе: 1) успешно поддерживая туморогенности клеточной линии; 2) обеспечение секреции измеримое ПСА до имплантации опухолевых клеток у мышей; 3) получение суспензии одноклеточных для имплантации так, чтобы уменьшить изменение размера опухоли; и 4) прививать клетки с низкой скоростью, чтобы предотвратить пузырно-мочеточниковый рефлюкс, что приводит к имплантации опухолевых клеток в почках. После длительного прохождения в пробирке, клетки MB49 / MB49-PSA мог...

Цель этого метода заключается в создании мышиный Ортотопическая опухолей мочевого пузыря и следить за имплантированных опухолей настолько точно, насколько это возможно, так что у мышей без имплантации опухоли не думали, были вылечены при анализе конечной точки. В целом, способ, показанный уменьшит потребность в большом количестве мышей для экспериментального анализа и обеспечения большей точности при определении терапевтических результатов. Развитие ортотопической модели рака важно, так как имплантировать опухолевые клетки подкожно не перепросматривать окружающую среду клинического заболевания или способствовать развитию терапевтических стратегий. Архитектура мочевого пузыря позволяет инстилляции рака мочевого пузыря терапии непосредственно в мочевой пузырь с минимальным количеством системных эффектов. Таким образом, животные модели, которые Повторим эту среду, такие как ортотопической, имеют важное значение для оценки новых методов лечения. Выводы, сделанные из любой экспериментальной установки являются dependenт при ограничениях модели. Несколько методов было разработано для производства ортотопической опухолей мочевого пузыря у мышей. Они полагаются на повреждения гликозаминогликаны слой мочевого пузыря, что позволяет опухолевые клетки для имплантации. Методы , используемые включают электрокоагуляции, что приводит к одной точке повреждения в стенке мочевого пузыря, что приводит к развитию опухоли на одном участке в мочевом пузыре 1,2. Тем не менее, вероятность успеха имплантации опухоли с использованием электрокоагуляции является функция зависит от оператора колеблется от 10 - 90%, и она включает в себя опасность, что стенка мочевого пузыря будет пробита, что приводит к развитию опухолей, развивающихся в брюшной полости. Химическое прижигание осуществляется с использованием нитрата серебра, который повреждает мочевой пузырь стенки 3. Аналогичным образом , кислота использовалась , чтобы привести к повреждению стенки мочевого пузыря 4. Трипсин был также использован , чтобы повредить мочевой пузырь а также 5. Эти методы могут привести к развитию более чем одной опухолью в мочевом пузыре.Кроме того, существует опасность серьезного повреждения мочевого пузыря, если химические вещества остаются в контакте со стенкой мочевого пузыря слишком долго. Метод , разработанный Ninalga и др. использует положительно заряженный поли-L-лизин (PLL) 6 молекул обволакивать стенки мочевого пузыря; Это позволяет отрицательно заряженные опухолевые клетки, чтобы прилипнуть к гликозаминогликанов слоя мочевого пузыря. Этот метод обычно приводит к более чем одной опухолью , развивающейся в мочевом пузыре, но имплантации опухоли на 80 - 100% 4,7. С технической точки зрения это также самый простой процедуры для выполнения. Для того, чтобы гарантировать, что опухоли, которые развиваются достаточно даже по размеру, важно, что опухолевые клетки не группируются в крупных комков перед имплантацией. Для оценки терапевтической эффективности, то лучше всего выполнить это исследование на мышах с довольно аналогичного размера опухолей. Таким образом, хорошая система обнаружения, которая может количественно оценить размер опухоли вскоре после имплантации имеет важное значение. Существует несколько стратегий имеют пчелыN используется для оценки опухоли. Они включают в себя магнитно - резонансной томографии (МРТ) 8-10, флуоресценцию 11, биолюминесценции 12,13, ультразвук 14 и иммуноферментного анализа (ИФА) 15,16. В то время как МРТ и УЗИ не требуют модификации опухолевых клеток, существует необходимость в чувствительной аппаратуры и контрастных агентов для МРТ. В флуоресцентные-,-люминесцентных и ELISA-анализы, основанные требуют модификации опухолевых клеток, чтобы выразить маркерные белки, которые могут быть обнаружены с помощью этих методов. Для люминесценции, подложка необходима для обнаружения активности люциферазы; Таким образом, есть дополнительный шаг, и увеличение стоимости. Оба люминесценции и флуоресценции требуют специального оборудования. Для получения флуоресценции, зеленый флуоресцентный белок (GFP), циклизации, которая катализирует молекулярным кислородом, требуется. Таким образом, выражение GFP может быть переменной в пределах массы опухоли в зависимости от доступа кислорода, что делает это довольно ненадежным маркером <sup&gt; 17. Модификация мышиной линии клеток рака мочевого пузыря MB49 секретируют человеческого простат - специфического антигена (ПСА) 15,16 в качестве суррогатного маркера является другая стратегия. Эти маркеры также обеспечивают альтернативные средства, подтверждающие наличие опухоли при завершении эксперимента, что делает их альтернативу иммуногистохимии. Это исследование сообщает метод ФАПЧ имплантации ортотопической опухоли и представляет сравнение систем обнаружения опухолей, а именно ELISA, флуоресценция, и ультразвуковой визуализации.

<table><tbody><tr><td>Элементы MB49-PSA</td><td>н</td><td>/д н/д</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) media</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>Фетальная бычья сыворотка (FBS) Южноамериканская</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>Фетальная бычья сыворотка (FBS) Южноамериканская, Premium</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>Фетальная бычья сыворотка (FBS)</td> <td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-глютамин</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Пенициллин-стрептомицин</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Гигромицин B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>свободный ПСА (человек) ИФА набор</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Реагент для экстракции РНК&nbsp;</td><td>Ambion</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Набор для обратной транскрипции кДНК высокой емкости с ингибитором РНКазы</td><td>Прикладные биосистемы</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Прикладные биосистемы</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &ndash; Мышиная компания Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>анализа экспрессии генов TaqMan &ndash; Прикладные биосистемы человека KLK3</td><td></td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL/6J самки мышей</td><td>In Vivos</td><td></td><td>4 - 6 недель назад</td></tr><tr><td>Анестезия (75 мг/кг кетамина и 1 мг/кг медетомидина)</td><td>Местная аптека</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Препарат обратного действия (1 мг/кг Атипамезол)</td><td>Местная аптека</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Прокол ушей</td><td>Электронная микроскопия Науки</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>Раствор Хартмана или Соединение лактата натрия</td><td>B Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Офтальмологическая мазь - Duratears стерильная глазная смазка мазь</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - HotHands грелки для рук</td><td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Certo IV катетер</td><td>B Braun</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Аквагель Смазывающее желе</td><td>Местная аптека</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Раствор поли-L-лизина, 0,01%,</td><td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, коктейль ингибиторов протеазы без ЭДТА</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Набор для анализа креатинина Биосистемы</td><td></td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Флуоресцентный краситель - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Раствор для перехода замороженных тканей RNAlater-ICE</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Каталожный номер</strong</td><td>>Комментарии<strong</td></tr><tr><td>>Оборудование и программное обеспечение</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Применена система ПЦР в реальном времени</td><td> Программное обеспечение Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 v2.3</td><td>Прикладные биосистемы</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Метаболическая клетка</td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>Вертикальный стеллаж для 12 клеток</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&nbsp;</td><td>Программное обеспечение BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo система визуализации&nbsp;</td><td>Калипер Медико-биологические науки&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Программное обеспечение Living Image v3.1</td><td>Caliper Life Sciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Система визуализации Vevo 2100&nbsp;</td><td>Визуальная Соника&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Опухоль Модель и опухолевой мышиной цистопластики Система обнаружения

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Этот протокол описывает генерацию опухолей мочевого пузыря у самок C57BL / 6J мышей с использованием мышиных клеток рака мочевого пузыря линии MB49, который был модифицирован секретируют человеческого простат-специфического антигена (ПСА), а также порядок подтверждения имплантации опухоли. Короче говоря, мышей анестезируют с помощью инъекционных препаратов и сделаны лежать в положении лежа на спине. Моча освобождено из мочевого пузыря и 50 мкл поли-L-лизин (PLL) медленно закапывают со скоростью 10 мкл / 20 с помощью катетера 24 G IV. Он остается в мочевом пузыре в течение 20 мин с помощью укупоривая катетера. Катетер удаляют и ФАПЧ освобождаемые мягкое давление на мочевой пузырь. За этим следует закапывания мышиной линии клеток рака мочевого пузыря (1 х 10 5 клеток / 50 мкл) со скоростью 10 мкл / 20 с. Катетер закупоривают для предотвращения преждевременной эвакуации. Через 1 ч мышей возродил с лекарственным средством реверсирования, и мочевой пузырь освобождается. Медленная скорость закапывания важно,так как это уменьшает пузырно-мочеточниковый рефлюкс, который может вызывать опухоли происходить в верхних мочевых путей и в почках. Клеточная линия должна быть хорошо ресуспендировали уменьшить слипание клеток, так как это может привести к неравномерному размеров опухоли после имплантации. Этот метод вызывает опухоли с высокой эффективностью. Рост опухоли контролировали секреции мочевой PSA. Мониторинг ПСА маркером является более надежным, чем ультразвук или флуоресцентных изображений для обнаружения присутствия опухолей в мочевом пузыре. Опухоли у мышей обычно достигают максимального размера, что негативно влияет на здоровье около 3 - 4 недель, если не лечить. Контролируя рост опухоли, можно дифференцировать мышей, которые были вылечены от тех, которые не были успешно имплантировали опухоли. Только с анализа конечной точки, последняя может быть ошибочно предполагается, что были вылечены с помощью терапии.

было обнаружено секреции PSA из клеток MB49 изменяется в зависимости от питательной среды. MB49-PSA выращивают в DMEM средах , так как это приводит к увеличению секреции PSA (рис 1А). Для того, чтобы определить чувствительность к PSA ELISA и ПЦР в реальном времени, различные числа MB49 PSA-секретирующих клеток смешивали с MB49 родительских клеток. PSA ELISA обнаруживает минимум 1 × 10 5 PSA-секретирующих клеток / 1 × 10 6 клеток (рис 1В),</s...

Этот протокол описывает генерацию мышиных опухолей цистопластики у самок C57BL / 6J и мониторинг роста опухоли.

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Общая цель данного нехирургического метода заключается в стабильном создании ортотопических немышечно-инвазивных опухолей мочевого пузыря у мышей, которые можно легко контролировать для оценки эффективности интравезикальной терапии. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области рака мочевого пузыря, такие как оценка новых методов интравезикального лечения.Главным преимуществом данного метода является простота имплантации опухолей мышам и возможность мониторинга их роста, что позволяет точно определить эффективность терапии. За один день до имплантации, когда клетки достигают примерно 80% конфлюэнтности, пересадите опухолевые клетки MB49 PSA в полную среду DMEM с коэффициентом расщепления от 1:2. В день проведения процедуры соберите и подсчитайте клетки, убедившись в их жизнеспособности.Смешайте в равных объемах суспензию клеток и 4% раствор трипанового синего, затем подсчитайте количество неокрашенных живых клеток с помощью гемоцитометра. Жизнеспособность клеток должна составлять не менее 80%. Далее ресуспендируйте клетки в концентрации два миллиона на миллилитр в центрифужной пробирке объемом 15 мл и трижды промойте их в среде DMEM.Затем храните их в охлажденном состоянии до момента инъекции. После наркоза самке мыши обеспечьте гидратацию путем внутрибрюшинного введения раствора Хартманна из расчета 1 мл на 10 г массы тела. Повторяйте эту процедуру каждые один-два часа в течение всего периода анестезии.Затем нанесите стерильную офтальмологическую мазь в оба глаза, при необходимости повторите процедуру. После этого поместите мышь в положение на спине на бумажные полотенца на грелку для поддержания температуры тела. Затем зафиксируйте задние конечности с помощью клейкой ленты.Теперь осторожно надавите на нижнюю область живота и соберите мочу в пробирку объемом 1,5 мл для измерения базального уровня ПСА в моче. Затем наполните одномиллилитровый шприц стерильным PLL и прикрепите к нему внутривенный катетер 24G, предварительно извлев иглу-проводник. Нанесите смазку на кончик катетера.Затем введите катетер в мочеиспускательный канал и с помощью пинцета направьте его в мочевой пузырь. Остановитесь при возникновении сопротивления. Затем медленно введите 50 µL PLL со скоростью 10 µL каждые 20 секунд, чтобы избежать везикоуретерального рефлюкса.Теперь оставьте катетер в мочевом пузыре на 20 минут, используя пробку для предотвращения вытекания. Через 20 минут извлеките катетер и опорожните мочевой пузырь, осторожно надавливая на нижнюю часть живота. Затем с помощью одномиллилитрового шприца промойте катетер, чтобы удалить из него остатки содержимого.Теперь тщательно перемешайте клетки MB49 PSA путем пипетирования и наберите их в шприц объемом 1 mL. Присоедините катетер и смажьте его, как и прежде. Введите катетер в мочевой пузырь, как и прежде.Затем приступите к введению клеток, используя постепенное вытеснение по 10 µL каждые 20 секунд. После этого подождите один час. По истечении часа извлеките катетер и опорожните мочевой пузырь от всего содержимого.Затем выпустите мышь, поместив ее на живот, и выведите ее из наркоза, введя атипамезол. Теперь наблюдайте за мышью до тех пор, пока она не сможет самостоятельно поддерживать тело в вертикальном положении (опираясь на грудную клетку), после чего верните ее в домашнюю клетку. Было обнаружено, что секреция PSA клетками MB49 варьирует в зависимости от используемой ростовой среды.Используется среда DMEM, так как она обеспечила наиболее высокий уровень секреции PSA. Для определения чувствительности метода PSA ELISA различные количества секретирующих PSA клеток MB49 смешивали с родительскими клетками MB49. Анализ позволил обнаружить как минимум 100 000 секретирующих PSA клеток на миллион клеток.Метод имплантации опухолевых клеток с помощью PLL приводит к развитию множественных опухолей в мочевом пузыре. Для измерения уровня PSA методом ELISA можно использовать как образцы мочи, собранные в течение ночи с помощью метаболических клеток, так и разовые пробы мочи. В ходе всех исследований на животных регистрировали массу тела мышей в качестве показателя общего состояния здоровья.Уровень ПСА в моче мониторили еженедельно в качестве показателя роста опухоли. Для каждой мыши применяли различные методы терапии, что привело к разным размерам опухолей. Через две недели после имплантации мочевые пузыри были извлечены и подвергнуты обработке.Размеры опухолей варьировались, что и предсказывали показатели ПСА. После просмотра этого видео у вас должно сложиться четкое представление о том, как создавать ортотопические опухоли мочевого пузыря у мышей и контролировать их рост. При наличии соответствующего навыка выполнение данной методики занимает два часа на одну мышь.При выполнении данной процедуры важно помнить о необходимости перемешать клетки перед имплантацией и проводить саму имплантацию медленно. После завершения этой процедуры можно применить другие методы, такие как проточный цитометрический анализ Uvm или ELISA, для исследования иммунной активации после терапии.

a-murine-orthotopic-bladder-tumor-model-and-tumor-detection-system

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Исследования рака

Опухолей мочевого пузыря устанавливается у самок мышей в минимально инвазивной образом, через катетеризации, местные прижигание, и последующей адгезии клеток карциномы, чтобы сжечь сайтов.

Ортотопическая модели мышей раку мочевого пузыря

Создание модели ортотопической опухоли мочевого пузыря для оценки противоопухолевого эффектов внутрипузырно доставлен Сарны и контроля роста опухоли с помощью ультразвука и биолюминесцентного изображений.

Ортотопическая модели опухоли мочевого пузыря и оценке Внутрипузырная Лечение Сарна

В этом видео мы описываем ортотопическую трансплантацию культивируемых органоидов опухоли мочевого пузыря в мочевой пузырь мышей, чтобы изучить роль органной среды в развитии опухолей.

Органоидная модель опухоли мочевого пузыря: метод ортотопической трансплантации органоидов мочевого пузыря в мышиный мочевой пузырь реципиента

В этом видео мы описываем внутрипузырную процедуру доставки раковых клеток в мочевой пузырь мышиной модели. Эта процедура помогает создать модель ортотопической опухоли мочевого пузыря, которая может быть использована для разработки терапевтических стратегий.

Моделирование ортотопической опухоли мочевого пузыря на мышиной модели: процедура внутрипузырного введения раковых клеток в мочевой пузырь мыши

Имплантация раковых клеток в органе происхождения могут служить в качестве полезного доклинической модели для оценки новых методов лечения. MB49 карциномы мочевого пузыря клетки могут быть выращены в мочевом пузыре следующие внутрипузырного введения. Этот протокол демонстрирует катетеризации мочевого пузыря мыши с целью имплантации опухоли и аденовирусной доставки.

Ортотопическая Рак мочевого пузыря Модель для генной исследований Доставка

Установленная техника привить первичные инвазивных Ортотопическая ксенотрансплантаты рак мочевого пузыря требуется лапаротомия и мобилизации мочевого пузыря. Эта процедура наносит значительную заболеваемость на мышах, технически сложным и трудоемким. Поэтому мы разработали высокоточную, чрескожная подход с использованием ультразвукового контроля.

Минимально инвазивная Создание мышиной артифициального мочевого пузыря ксенотрансплантатов

Опухоли мочевого пузыря мышиных индуцированных с канцерогенных нитрозаминов N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). Поколение опухоли мочевого пузыря является неоднородной; Поэтому точной оценки бремени опухоли требуется до рандомизации для экспериментального лечения. Здесь мы представляем быстрый, надежный протокол МРТ для оценки размера опухоли и стадии.

Магнитно-резонансная томография оценки опухолей канцероген индуцированной мышиных мочевого пузыря

Этот протокол предоставляет подробные экспериментальные шаги по созданию трехмерной культуры in vitro опухолевых органоидов мочевого пузыря, полученных от рака, индуцированного мочевого пузыря. Описаны культурные методы, включая пропускную связь, генную инженерию и ортотопическую трансплантацию опухолевых органоидов.

Культура, манипуляция и ортотопическая трансплантация органов опухолевых опухолей мышелового пузыря

Для уточнения многоэтапный процесс брюшины распространения рака яичников, текущее исследование представляет собой мышиный экспериментальную модель развития первичной опухоли и метастазов с помощью перитонеального ортотопической прививки с этими опухолевыми клетками.

Мышиные Экспериментальная модель самобытного развития опухолевого и перитонеальный метастаз<em&gt; с помощью</em&gt; Ортотопическая Заражение клеток карциномы яичников

Мы опишем метод с использованием целевого периферийного облучения, чтобы вызвать усталость, как поведение у мышей. Выбранная нелетального доза облучения приводит к недельным сокращению добровольного колесного хода деятельности.

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Узнайте нехирургический метод создания ортотопических немышечно-инвазивных опухолей мочевого пузыря у мышей C57BL/6J для оценки интравезикальных терапий. Этот протокол позволяет легко мониторить рост опухолей.

Опухоль Модель и опухолевой мышиной цистопластики Система обнаружения

Больше видео