Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Осуществление ортотопической модели почечно-клеточной карциномы в иммунокомпетентных мышах дает следователю клинически-соответствующую систему, определяемую наличием первичной опухоли почки и метастазов в легких в том же животном. Эта система может быть использована для доклинического тестирования различных методов лечения в естественных условиях.

Общей целью этой процедуры является установление ортотопических опухолей почек у мышей путем внутрипочечной имплантации опухолевых клеток для изучения роста опухоли и метастазирования, а также эффективности противоопухолевой терапии. Этот метод может быть использован для ответа на ключевые вопросы в области урологической онкологии, такие как эффективность новой терапии в доклинической модели рака почки. Основным преимуществом данной методики является то, что внутрипочечная имплантация опухоли устанавливает первичную метастазирующую опухоль почки в легкие, имитирующую клинический патогенез почечно-клеточного рака.

Для приготовления опухолевых клеток Renca сначала отделяют клеточную культуру с 0,25% трипсина и HBSS после промывания PBS. Нейтрализуйте реакцию через пять минут с помощью Complete RPMI Medium. Перенесите клетки в коническую трубку для центрифугирования и повторно суспендируйте гранулу в свежем HBSS.

После подсчета отрегулируйте объем в соотношении от двух до десяти до шести клеток на миллилитр в HBSS и наберите клетки в одномиллилитровый шприц, оснащенный иглой 18 калибра. Затем наденьте стерильную хирургическую простыню на грелку и подтвердите соответствующий уровень седации путем пощипывания пальцев ног. Удалите шерсть с левого бока мыши и нанесите ветеринарную мазь на глаза.

Затем промокните место имплантации 5%-ным антисептиком повидон-йода и с помощью стерильного скальпеля сделайте один на полтора сантиметра разрез на левом боку, стараясь не проникнуть в брюшину. С помощью ножниц отделите дерму от брюшины, промокнув место разреза стерильной ватной марлей, чтобы удалить кровь. Затем обхватите голову левой рукой и поддержите бок правой рукой, чтобы локализовать селезенку через брюшину.

Одним пальцем правой руки пропальпируйте мышь снизу. Почка должна стать видимой. Крепко удерживая животное, чтобы обеспечить напряжение в брюшине и почке, попросите помощника медленно доставить 0,1 миллилитра клеток Renca через неповрежденную брюшину в центр почки.

Удерживайте иглу на месте в течение пяти-10 секунд, чтобы уменьшить обратный поток клеток. Затем закройте разрез тонким слоем цианоакрилатного тканевого клея. В конечной точке эксперимента с помощью ножниц сделайте разрез по средней линии, начиная от середины живота через грудную клетку, шею и слюнные железы.

С помощью ножниц и щипцов аккуратно удалите ребра, не нарушая легочную ткань, и удалите соединительную ткань, чтобы обнажить трахею. Наполните трехмиллилитровый шприц, оснащенный иглой 18 калибра, 10% индийскими чернилами и PBS. Затем с помощью щипцов аккуратно продеть шелковый шов под трахею, а затем завязать свободный узел.

Далее осторожно введите иглу в трахею и медленно надуйте легкие от одного до полутора миллилитров раствора India Ink. Туго затяните узел вокруг трахеи, чтобы предотвратить обратный поток чернил, затем удалите иглу и осторожно отрежьте соединительную ткань, чтобы удалить надутые легкие. Зафиксируйте легкие в конической трубке объемом 15 миллилитров, содержащей пять миллилитров раствора Фекете в химическом вытяжном шкафу при комнатной температуре.

Через 24-48 часов удалите неповрежденные легкие и осторожно раздвиньте доли в чашке Петри размером 35 на 10 миллиметров. Затем подсчитайте количество белых опухолевых узелков под препарирующим микроскопом. Успешная внутрипочечная имплантация мышиных внутрипочечных клеток Renca приводит к развитию опухоли в почке и метастазированию в легкие, при этом животные-опухоленосцы демонстрируют сильную опухолевую нагрузку, измеряемую увеличенным весом имплантированных опухолей почек.

Как видно, опухоли Renca могут быть идентифицированы с помощью иммуногистохимического окрашивания на цитокератин 8 и 18. Имплантация люциферазы, экспрессирующей клеточную линию Renca, позволяет отслеживать опухолевую нагрузку в почках и метастазирование в легкие с помощью биолюминесцентной визуализации, что дополнительно подтверждается индийским инфляцией легких. После освоения этой техники она может быть выполнена менее чем за пять минут на одну мышь, если она выполнена правильно.

При попытке проведения этой процедуры важно помнить о четкой идентификации почки через брюшину, чтобы обеспечить точную внутрипочечную имплантацию опухоли. После этой процедуры могут быть использованы другие методы, такие как доклинические испытания лекарств, чтобы ответить на дополнительные вопросы, например, в какой степени новый препарат влияет на рост или метастазирование внутрипочечных опухолей? После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как проводить внутрипочечную имплантацию опухолевых клеток для установления ортотопических опухолей почек у мышей.

Не забывайте, что работа с живыми животными и хирургическими инструментами может быть опасной, и что во время выполнения этой процедуры всегда следует принимать меры предосторожности, такие как следование рекомендациям учреждения по обращению с животными и поддержание стерильной операционной зоны и инструментов.