Способ оценки эффективности против инсектицид кровать ошибка, Cimex lectularius, Яйца и первый возрастах
15 марта 2017 г.
оценки инсектицидами часто направлены против взрослых насекомых, а не незрелых стадий. Здесь мы приводим протокол для оценки инсектицидов против яиц ошибка постели с по сравнению с первым нимф этапе кровать ошибка. Эти протоколы могут быть скорректированы для других насекомых, чтобы оценить эффективность инсектицида в не только на взрослых стадиях жизни.
Общая цель этого эксперимента — оценить эффективность инсектицидов в уничтожении яиц постельных клопов и первых возрастов. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области энтомологии, такие как влияние токсикологических анализов на яйца постельных клопов и мелких нимф. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она предназначена для обработки инсектицидами сложной стадии жизни насекомых, в частности стадии яйца.
Чтобы начать эксперимент, вытащите от 5 до 10 спаренных взрослых самок постельных клопов из колонии и поместите самок в чашку Петри с фильтровальной бумагой. Подготовьте 10 повторов, чтобы убедиться, что яиц будет достаточно для анализа инсектицидами. Проверяйте посуду каждый день, чтобы узнать, не отложили ли самки яйца.
После того, как самки отложили яйца, вынимайте самок из чашки Петри и ежедневно помещайте их в новые чашки Петри с новой фильтровальной бумагой. Запишите данные о старых и новых чашках Петри. Дайте яйцеклеткам состариться за четыре-пять дней до начала анализа.
Как только яйца состарятся, аккуратно удалите яйца постельных клопов из фильтровальной бумаги с помощью щипцов с мягким наконечником. Аккуратно соскребите с помощью щипцов дно яйца, прикрепленного к фильтровальной бумаге, а затем осторожно возьмите яйцо, не оказывая слишком большого давления, чтобы не подбросить яйца постельного клопа. Поместите удаленные яйца постельных клопов в соответствующие группы внутри пластиковых чашек Петри.
Натрите дно каждой чашки Петри снаружи простыней для кондиционера для белья, чтобы ограничить статическое электричество от выбрасывания яиц постельных клопов. Затем приготовьте серийные разведения инсектицидов, чтобы получить диапазон из пяти различных концентраций и контрольный раствор только с водопроводной водой каждый до объема 20 мл. Возьмите центрифужные пробирки объемом 50 мл, предварительно нарезанные на линии mL, а затем разрежьте мелкие ячейки на квадраты, достаточно большие, чтобы поместиться в колпачк.
Плотно закрутите сетку, исключая любые неровности в пробирках центрифуги, используя крышку пробирки центрифуги. Затем с помощью кисти поместите группу яиц постельных клопов на сетку внутри центрифужной трубки. Опустите группу яиц постельных клопов внутрь разрезанной центрифужной пробирки в концентрацию инсектицида на пять секунд.
Извлеките центрифужную трубку из раствора инсектицида. Поместите центрифужную трубку непосредственно на рабочую ткань, чтобы высушить сетку с яйцами внутри. После сушки извлеките группу яиц из центрифужной пробирки с помощью небольшой кисти с мелкой щетиной и поместите их в чистую чашку Петри с чистой фильтровальной бумагой.
Зарегистрируйте смертность яиц в течение 14 дней, чтобы убедиться, что все яйца успели вылупиться. Коррекция смертности при контрольном лечении с использованием формулы Эбботта. Введите зарегистрированную смертность с соответствующими концентрациями в программное обеспечение для анализа, чтобы рассчитать значения LC50.
Отделите группу из пяти взрослых самцов и пяти взрослых самок постельных клопов, которых кормили накануне, и поместите их в чашку Петри с фильтровальной бумагой. Дайте взрослым постельным клопам спариваться и откладывать яйца в течение восьми дней. Затем извлеките взрослых особей из чашек Петри и дайте яйцам вылупиться в первые возрасты в чашках Петри.
Соберите неоткормленные первые возрастные возрасты с помощью кисти, затем поместите их в новые чистые чашки Петри до проведения инсектицидного анализа. Пипетку по 150 мкл аликвот каждого из пяти предварительно приготовленных разведений инсектицида и воды для контрольной группы на индивидуальную фильтровальную бумагу. Равномерно распределите инсектицид, нанеся капли по всему краю и центру фильтровальной бумаги.
Поместите обработанную фильтровальную бумагу по отдельности поверх отдельных панелей из оргалита. Выпустите группы первых возрастов на отдельные фильтрующие бумаги, пока они еще влажные инсектицидом, и накройте первые возрасты перевернутым дном чашки Петри и положите груз на верхнюю часть чашки Петри, чтобы предотвратить побег постельных клопов первого возраста. Регистрируйте смертность постельных клопов первого возраста после 24 часов воздействия всех концентраций инсектицидов.
Коррекция смертности при контрольном лечении с использованием формулы Эбботта. Введите записанные данные о смертности и концентрациях в аналитическое программное обеспечение для расчета значений LC50. Процентная реакция или смертность яиц постельных клопов штамма Харлин на пять различных концентраций метоклоприда бета-цифлутрина увеличивалась по мере увеличения дозы.
Смертность достигала 100% при самой высокой испытанной концентрации. После просмотра этого видео вы должны лучше понять, как оценить эффективность инсектицида против яиц постельных клопов и первых возрастов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
Это исследование представляет протокол для оценки эффективности инсектицидов против яиц и первых стадий клоп-подорожников. Метод направлен на решение проблем, связанных с оценкой эффективности инсектицидов на незрелых стадиях развития, которые часто не учитываются в традиционных оценках.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Энтомология
- Эффективность инсектицидов
- Стадии развития насекомых
Предпосылки
- Оценки инсектицидов обычно фокусируются на взрослых насекомых.
- Незрелые стадии, такие как яйца и нимфы, имеют решающее значение для борьбы с вредителями.
- Понимание воздействия инсектицидов на эти стадии может улучшить стратегии борьбы с вредителями.
- Это исследование предлагает метод, приспособленный для оценки инсектицидов на яйцах клоп-подорожников.
Цель исследования
- Оценить эффективность инсектицидов на яйцах и первых стадиях клоп-подорожников.
- Разработать протокол, который можно адаптировать для других видов насекомых.
- Расширить знания в области энтомологии касательно воздействия инсектицидов на незрелые стадии.
Использованные методы
- Собрать 5-10 спарившихся, хорошо накормленных взрослых самок клоп-подорожников.
- Поместить самок в чашку Петри с фильтровальной бумагой.
- Подготовить 10 реплик для обеспечения достаточного производства яиц.
- Ежедневно следить за кладкой яиц в чашках.
Основные результаты
- Протокол успешно оценивает эффективность инсектицидов на яйцах клоп-подорожников.
- Также были оценены первые стадии для сравнения уязвимости.
- Результаты указывают на важность нацеливания на незрелые стадии в борьбе с вредителями.
- Этот метод можно адаптировать для других видов насекомых.
Выводы
- Оценка инсектицидов на незрелых стадиях развития является критически важной для эффективного управления вредителями.
- Исследование предоставляет ценный протокол для будущих исследований.
- Необходимы дальнейшие исследования для изучения последствий для других вредных насекомых.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
Evaluating insecticide efficacy across all life stages, including eggs and early instars, is critical for comprehensive pest control strategies in biopharma and public health R&D. This method enables quantitative assessment of toxicological impact on immature bed bug stages, supporting target validation and mechanistic de-risking in vector control programs. By generating concentration-response data and LC50 values for non-adult life stages, the approach improves predictive confidence in early-stage discovery and portfolio prioritization for novel insecticidal compounds.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of insecticidal mechanisms across vulnerable life stages, clarifying target engagement in eggs and first instars.
- Operational Value: Supports biological de-risking by confirming activity where traditional adult-focused assays may fail.
- Predictive Value: Enhances target confidence through stage-specific efficacy profiling, informing go/no-go decisions in lead identification.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Produces standardized, reproducible concentration-response curves for quantifying LC50 in bed bug eggs and first instars.
- Operational Value: Enables scalable, high-throughput preparation of insecticide dilutions and exposure protocols using dip and contact assays.
- Assay Readiness: Generates quantitative mortality outputs suitable for compound screening and structure-activity relationship analysis.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant system modeling by evaluating efficacy in early life stages that contribute to population resilience.
- Operational Value: Ensures translational continuity from discovery through preclinical validation by capturing full lifecycle susceptibility.
- Risk-Adjusted Advancement: Informs preclinical go/no-go decisions by revealing stage-specific resistance or tolerance patterns.
Pipeline & Workflow Integration
The method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification and preclinical evaluation, particularly for vector control and public health insecticide development.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing of insecticidal mechanisms by enabling efficacy assessment in non-adult life stages often missed in standard screens.
- Screening: Delivers assay readiness through standardized dipping and contact protocols that yield reproducible, quantitative mortality data.
- Analytics: Provides LC50 calculations and concentration-response modeling that allow cross-compound comparison and potency ranking.
- Translational Research: Connects early-stage findings to preclinical continuity by addressing efficacy across the bed bug lifecycle, a key factor in resistance management.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for evaluating novel insecticidal compounds against difficult-to-treat life stages, reducing redundant assay development.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by revealing stage-specific susceptibility and reducing mechanistic ambiguity in insecticide action.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible protocols for egg and first instar assays, minimizing variability across laboratories.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early de-risking of compounds that fail against immature stages, preventing late-stage failure.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by identifying compounds with broad lifecycle activity, enhancing advancement decisions.
Implementation Considerations
- Requires expertise in entomological handling, insect rearing, and micro-manipulation of eggs and early instars.
- Dependent on precise dilution preparation, exposure timing, and environmental controls to ensure assay validity.
- Necessitates standardized mortality scoring and correction using Abbott's formula for control-adjusted analysis.
- Involves adaptation considerations when extending the protocol to other insect species with differing egg morphology or instar behavior.
- Practical limitations include the labor-intensive nature of egg collection, aging, and individual handling, which may constrain throughput without automation.
