Способ оценки эффективности против инсектицид кровать ошибка, Cimex lectularius, Яйца и первый возрастах
15 марта 2017 г.
оценки инсектицидами часто направлены против взрослых насекомых, а не незрелых стадий. Здесь мы приводим протокол для оценки инсектицидов против яиц ошибка постели с по сравнению с первым нимф этапе кровать ошибка. Эти протоколы могут быть скорректированы для других насекомых, чтобы оценить эффективность инсектицида в не только на взрослых стадиях жизни.
Общая цель этого эксперимента — оценить эффективность инсектицидов в уничтожении яиц постельных клопов и первых возрастов. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области энтомологии, такие как влияние токсикологических анализов на яйца постельных клопов и мелких нимф. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она предназначена для обработки инсектицидами сложной стадии жизни насекомых, в частности стадии яйца.
Чтобы начать эксперимент, вытащите от 5 до 10 спаренных взрослых самок постельных клопов из колонии и поместите самок в чашку Петри с фильтровальной бумагой. Подготовьте 10 повторов, чтобы убедиться, что яиц будет достаточно для анализа инсектицидами. Проверяйте посуду каждый день, чтобы узнать, не отложили ли самки яйца.
После того, как самки отложили яйца, вынимайте самок из чашки Петри и ежедневно помещайте их в новые чашки Петри с новой фильтровальной бумагой. Запишите данные о старых и новых чашках Петри. Дайте яйцеклеткам состариться за четыре-пять дней до начала анализа.
Как только яйца состарятся, аккуратно удалите яйца постельных клопов из фильтровальной бумаги с помощью щипцов с мягким наконечником. Аккуратно соскребите с помощью щипцов дно яйца, прикрепленного к фильтровальной бумаге, а затем осторожно возьмите яйцо, не оказывая слишком большого давления, чтобы не подбросить яйца постельного клопа. Поместите удаленные яйца постельных клопов в соответствующие группы внутри пластиковых чашек Петри.
Натрите дно каждой чашки Петри снаружи простыней для кондиционера для белья, чтобы ограничить статическое электричество от выбрасывания яиц постельных клопов. Затем приготовьте серийные разведения инсектицидов, чтобы получить диапазон из пяти различных концентраций и контрольный раствор только с водопроводной водой каждый до объема 20 мл. Возьмите центрифужные пробирки объемом 50 мл, предварительно нарезанные на линии mL, а затем разрежьте мелкие ячейки на квадраты, достаточно большие, чтобы поместиться в колпачк.
Плотно закрутите сетку, исключая любые неровности в пробирках центрифуги, используя крышку пробирки центрифуги. Затем с помощью кисти поместите группу яиц постельных клопов на сетку внутри центрифужной трубки. Опустите группу яиц постельных клопов внутрь разрезанной центрифужной пробирки в концентрацию инсектицида на пять секунд.
Извлеките центрифужную трубку из раствора инсектицида. Поместите центрифужную трубку непосредственно на рабочую ткань, чтобы высушить сетку с яйцами внутри. После сушки извлеките группу яиц из центрифужной пробирки с помощью небольшой кисти с мелкой щетиной и поместите их в чистую чашку Петри с чистой фильтровальной бумагой.
Зарегистрируйте смертность яиц в течение 14 дней, чтобы убедиться, что все яйца успели вылупиться. Коррекция смертности при контрольном лечении с использованием формулы Эбботта. Введите зарегистрированную смертность с соответствующими концентрациями в программное обеспечение для анализа, чтобы рассчитать значения LC50.
Отделите группу из пяти взрослых самцов и пяти взрослых самок постельных клопов, которых кормили накануне, и поместите их в чашку Петри с фильтровальной бумагой. Дайте взрослым постельным клопам спариваться и откладывать яйца в течение восьми дней. Затем извлеките взрослых особей из чашек Петри и дайте яйцам вылупиться в первые возрасты в чашках Петри.
Соберите неоткормленные первые возрастные возрасты с помощью кисти, затем поместите их в новые чистые чашки Петри до проведения инсектицидного анализа. Пипетку по 150 мкл аликвот каждого из пяти предварительно приготовленных разведений инсектицида и воды для контрольной группы на индивидуальную фильтровальную бумагу. Равномерно распределите инсектицид, нанеся капли по всему краю и центру фильтровальной бумаги.
Поместите обработанную фильтровальную бумагу по отдельности поверх отдельных панелей из оргалита. Выпустите группы первых возрастов на отдельные фильтрующие бумаги, пока они еще влажные инсектицидом, и накройте первые возрасты перевернутым дном чашки Петри и положите груз на верхнюю часть чашки Петри, чтобы предотвратить побег постельных клопов первого возраста. Регистрируйте смертность постельных клопов первого возраста после 24 часов воздействия всех концентраций инсектицидов.
Коррекция смертности при контрольном лечении с использованием формулы Эбботта. Введите записанные данные о смертности и концентрациях в аналитическое программное обеспечение для расчета значений LC50. Процентная реакция или смертность яиц постельных клопов штамма Харлин на пять различных концентраций метоклоприда бета-цифлутрина увеличивалась по мере увеличения дозы.
Смертность достигала 100% при самой высокой испытанной концентрации. После просмотра этого видео вы должны лучше понять, как оценить эффективность инсектицида против яиц постельных клопов и первых возрастов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании представлен протокол оценки эффективности инсектицидов против яиц и первых стадий личинок постельных клопов. Метод направлен на решение проблем оценки эффективности инсектицидов на невзрослых стадиях развития, которые часто игнорируются при традиционных исследованиях.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Энтомология
- Эффективность инсектицидов
- Стадии развития насекомых
Обзор
- Оценка эффективности инсектицидов обычно сосредоточена на взрослых насекомых.
- Незрелые стадии, такие как яйца и нимфы, имеют решающее значение для борьбы с вредителями.
- Понимание воздействия инсектицидов на эти стадии может улучшить стратегии борьбы с вредителями.
- В данном исследовании представлен метод, специально разработанный для оценки воздействия инсектицидов на яйца постельных клопов.
Цель исследования
- Оценить эффективность инсектицидов в отношении яиц и личинок первого возраста постельных клопов.
- Разработать протокол, который может быть адаптирован для других видов насекомых.
- Расширить знания в области энтомологии касательно воздействия инсектицидов на стадии развития, отличные от имаго.
Используемые методы
- Соберите от 5 до 10 спарившихся, хорошо сытых взрослых самок постельных клопов.
- Поместите самок в чашку Петри с фильтровальной бумагой.
- Подготовьте 10 повторностей, чтобы обеспечить достаточный выход яиц.
- Ежедневно проверяйте чашки на наличие отложенных яиц.
Основные результаты
- Данный протокол позволяет успешно оценить эффективность инсектицидов против яиц постельных клопов.
- Для сравнения восприимчивости также были исследованы личинки первой стадии.
- Результаты указывают на важность воздействия на незрелые стадии при борьбе с вредителями.
- Этот метод может быть адаптирован для других видов насекомых.
Выводы
- Оценка действия инсектицидов на незавершенных стадиях развития имеет решающее значение для эффективной борьбы с вредителями.
- Данное исследование представляет собой ценный протокол для дальнейших изысканий.
- Необходимы дополнительные исследования для изучения влияния данных факторов на других насекомых-вредителей.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Оценка эффективности инсектицидов на всех стадиях развития, включая яйца и ранние линьки, имеет решающее значение для разработки комплексных стратегий борьбы с вредителями в биофармацевтике и исследованиях в области общественного здравоохранения. Данный метод позволяет количественно оценить токсикологическое воздействие на незрелые стадии развития постельных клопов, что способствует валидации мишеней и снижению механистических рисков в программах по контролю переносчиков. Благодаря получению данных о зависимости «концентрация-ответ» и значений LC50 для стадий развития, предшествующих взрослой особи, данный подход повышает прогностическую точность на ранних этапах поиска и приоритизации портфеля новых инсектицидных соединений.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Научная ценность: позволяет исследовать инсектицидные механизмы на уязвимых стадиях жизненного цикла, проясняя взаимодействие с мишенью в яйцах и личинках первого возраста.
- Практическая ценность: способствует биологическому снижению рисков путем подтверждения активности в тех случаях, когда традиционные анализы, ориентированные на имаго, могут оказаться неэффективными.
- Прогностическая ценность: повышает уверенность в выборе мишени за счет профилирования эффективности для конкретных стадий развития, что помогает в принятии решений о целесообразности дальнейшей разработки при идентификации ведущих соединений.
Скрининг и разработка анализа
- Научная ценность: позволяет получать стандартизированные, воспроизводимые кривые зависимости «концентрация — ответ» для количественного определения LC50 для яиц и нимф первого возраста постельных клопов.
- Практическая ценность: обеспечивает масштабируемую высокопроизводительную подготовку разведений инсектицидов и протоколов воздействия с использованием методов погружения и контактного нанесения.
- Готовность анализа: позволяет получать количественные данные о смертности, подходящие для скрининга соединений и анализа зависимости «структура — активность».
Трансляционные и доклинические исследования
- Научная ценность: Обеспечивает моделирование систем, имеющих значение для изучения заболеваний, путем оценки эффективности на ранних стадиях развития, которые определяют устойчивость популяции.
- Практическая ценность: Обеспечивает трансляционную преемственность от этапа открытия до доклинической валидации за счет учета восприимчивости на протяжении всего жизненного цикла.
- Прогресс с учетом рисков: Помогает принимать доклинические решения о целесообразности дальнейшего продолжения исследований (go/no-go), выявляя специфические для конкретных стадий паттерны резистентности или толерантности.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данный метод интегрирован в общий процесс разработки: от ранней валидации мишени до идентификации соединений-лидеров и доклинической оценки, что особенно актуально для разработки инсектицидов в целях борьбы с переносчиками заболеваний и охраны общественного здоровья.
- Поиск новых биологических мишеней: способствует проверке гипотез о механизмах действия инсектицидов, позволяя оценивать эффективность воздействия на незавершенные стадии развития насекомых, которые часто упускаются при стандартном скрининге.
- Скрининг: обеспечивает готовность анализа за счет стандартизированных протоколов погружения и контактного воздействия, которые позволяют получать воспроизводимые количественные данные о смертности.
- Аналитика: обеспечивает расчет LC50 и моделирование зависимости «концентрация — ответ», что позволяет проводить сравнительный анализ соединений и ранжировать их по силе действия.
- Трансляционные исследования: связывает результаты ранних этапов с доклиническими исследованиями, оценивая эффективность воздействия на всех стадиях жизненного цикла постельных клопов, что является ключевым фактором в управлении резистентностью.
- Корпоративное повторное использование: создает универсальную платформу для оценки новых инсектицидных соединений против трудноподдающихся воздействию стадий развития, сокращая необходимость в повторной разработке методов анализа.
Операционное и организационное воздействие
- Научная ценность: повышает точность прогнозирования за счет выявления восприимчивости на конкретных стадиях развития и устранения неопределенности в механизме действия инсектицида.
- Практическая ценность: предоставляет стандартизированные, воспроизводимые протоколы анализов для яиц и первой личиночной стадии, сводя к минимуму вариативность между лабораториями.
- Стратегическая ценность: повышает эффективность использования капитала, позволяя на раннем этапе выявить соединения, неэффективные против недоразвитых стадий, что предотвращает неудачи на поздних этапах разработки.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритезацию с учетом рисков путем идентификации соединений с широким спектром активности на разных стадиях жизненного цикла, что оптимизирует принятие решений о дальнейшем продвижении препаратов.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области энтомологических манипуляций, разведения насекомых и микроманипуляций с яйцами и ранними линьками.
- Валидность анализа зависит от точного приготовления разведений, времени экспозиции и контроля условий окружающей среды.
- Необходима стандартизированная оценка смертности и внесение поправок с использованием формулы Эбботта для анализа с учетом контрольной группы.
- При применении протокола для других видов насекомых с иной морфологией яиц или поведением личинок требуются соответствующие адаптации.
- Практические ограничения включают трудоемкость сбора, выдерживания и индивидуальной обработки яиц, что может ограничить пропускную способность без использования автоматизации.
