ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Эта работа поддержана грантом на исследования от Совета по естественным наукам и инженерным исследованиям (NSERC) Канады, Института исследований рака Онтарио (OICR, #P.SI.015.8) и Канадского онкологического общества (CCS, #703857). Авторы выражают признательность доктору Денису Снайдеру, оказавшему помощь в подготовке рукописи.

Исследования на животных были одобрены советом животных по этике исследований в Университете МакМастер в соответствии с Канадским советом по уходу за животными (ССАС) руководящих принципов. 1. радиоактивной из Tz-тридентатных ЛИГАНДАМИ с 99m Tc ВНИМАНИЕ: Следующие процедуры требуют использования радиоактивных соединений. Работа должна осуществляться только в лицензированной лаборатории с соблюдением техники безопасности и утилизации правил. Реакции Микроволновые следует проводить в микроволновой печи, специально предназначенных для химического синтеза. <ol><li> Синтез [99m Тс (СО) 3 (H 2 O) 3] + 19, 20 <ol><li> В микроволновую ампулу смешайте 8 мг K 2 [BH 3 CO 2], 15 мг Na 2 CO 3, 20 мг Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O и 25 мг KOCO [СН (ОН)]2 COONa · 4H 2 O. Продуть флакон в течение 10 мин аргоном. </li><li> Добавить 4 мл 99m TCO 4 - (~ 1,100 МБк, ~ 30 мКи) в 0,9% -ном солевом растворе в ампулу. </li><li> Реакционную смесь нагревают в микроволновой печи в течение 3,5 мин при температуре 110 ° С после 10 с перемешиванием, чтобы обеспечить тщательное смешивание реагентов. </li><li> Доводят рН раствора до 3,5-4 с помощью ~ 400 мкл 1 М HCl. Проверка с помощью рН бумаги. </li></ol></li><li> Радиоактивной из тетразин лигандов 1-5 <ol><li> Растворите 2 мг каждого лиганда (соединения 1-5) в 250 мкл МеОН 21. </li><li> Добавьте 250 мкл [99m Тс (СО) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 МБк, ~ 2 мКи) к каждому раствору. </li><li> Реакционную смесь нагревают с помощью микроволнового течение 20 мин при 60 ° С. Примечание: Этот шаг был одинаков для всех 5 тетразинов. </li><li> Для получения соединений 2- 5, выпарить растворитель и повторно dissolве полученных продуктов в 1 мл 1: 1 об / об ДХМ: ТФК. </li><li> Нагреть растворенные продукты реакции (2-5) при 60 ° С в микроволновой печи в течение 6 мин (2-4) или 10 мин (5). </li><li> После охлаждения до комнатной температуры, выпаривают растворитель , используя испаритель (36 ° С, 8 мбар, 3 мин, 6000 оборотов в минуту) и растворяют высушенный соединение в соотношении 1: 1 ACN: H 2 O или 1: 1 MeOH: H 2 O, перед очисткой ЖХВД. </li><li> Очищают 99m Tc-меченого соединения (1-5), в том числе отделение меченого продукта от немеченого лиганда тетразин, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (C 18 с обращенной фазой). Как правило, используют градиент элюции 30:70 ACN: H 2 O (оба с 0,1% TFA) до 40:60 ACN: H 2 O в течение 20 мин (18 мин) и аналитической колонке C 18 4,6 х 100 мм. Использование в УФ-области (254 нм) и регистрации гамма. <ol><li> Возьмите небольшую пробу каждого меченого продукта и сравнить его время удерживания ВЭЖХ, что и со-инъекцected, нерадиоактивного, Re-меченого стандарта (0,125 мг в 20% метанол-H 2 O). Стандартный меченый Повторно идентифицируется в трассировке УФ - ВЭЖХ, и будет элюировать в то же самое время, что и 99m Tc-меченого соединения в γ-ВЭЖХ следа. Это совместное введение показывает пики при сравнимых временах удерживания, подтверждающие личность 99m Tc-меченого соединения. </li></ol></li><li> Выпаривают растворитель из фракций ВЭЖХ с использованием испарителя (36 ° C, 8 мбар, 3 мин, 6000 оборотов в минуту). </li><li> Формулирование Очищенное соединение в концентрации 7,4 кБк / мкл в PBS, содержащем 0,5% БСА и 0,01% Tween-80. </li><li> Для того, чтобы обеспечить меченые соединения стабильны, выполняют экстракорпорального исследование устойчивости в. Выдержите сформулированное соединение при 37 ° С в течение 1, 4 и 6 ч, вводя небольшое количество (3,7 МБк) смеси на ВЭЖХ в каждый момент времени для оценки стабильности. </li></ol></li></ol> 2. Предварительно целенаправленные исследования Био-распределительные <ol><lя&gt; Подготовка животных <ol><li> Использование 7-9-недельного возраста, женщины-BALB / C мышей (n = 3), введение ТСО-ВР сформулировали в физиологическом растворе (20 мг / кг) (5 мкг / мкл), с помощью в хвостовую вену. </li><li> Поместите мышь в физическом устройстве удержания, а также определить вены, расположенные на боковых поверхностях хвоста и протереть тампоном, смоченным спиртом. По прошествии около 2 см от кончика хвоста, вставьте 30 иглы калибра под небольшим углом, параллельно вене. Медленно нажмите на поршень, чтобы впрыснуть, удалить иглу и не применять чистую марлевую губкой в ​​месте инъекции с небольшим давлением до остановки кровотечения. </li><li> Через 1 ч после инъекции TCO-BP, администрировать ~ 0,74 МБк (20 мкКи) из 99m Tc-тетразин Сформулированные в 100 мкл 0,5% БСА, 0,01% твин-80 в PBS, с помощью в хвостовую вену. </li></ol></li><li> Исследования Био-распределительные <ol><li> В желаемый момент времени (Т = 6 ч), анестезию мышей с использованием 3% изофлуран и 2% -ной смеси газообразного кислорода. Продемонстрировать ке снятие щепотка на наркозом мыши, чтобы гарантировать, что они находятся под хирургической плоскости анестезии. </li><li> Собирают кровь (1 мл) с помощью пункции сердца с использованием шприца предварительно обработанной гепарином. Место мыши на спине с носом в носовом обтекателе для продолжения анестезии и найти мечевидного отростка на животном. <ol><li> Вставка 25 G иглу, слегка слева от средней линии животного под мечевидного отростка, под углом 20 °. Полностью вставить иглу, и медленно потяните на себя поршень, чтобы увидеть кровь в ступице иглы, если сердце проколоты. Слегка подрегулировать иглу, удерживая поршень, при необходимости, чтобы проколоть сердце. Медленно потянуть кровь в шприц. </li></ol></li><li> Эвтаназии животное шейным смещением, в то время как под анестезией. </li><li> Поместите каждое животное в полиэтиленовый пакет и использовать дозы калибратор (99m Tc установка) для измерения весь уровень активности тела. </li><li> Соберите следующие ткани и жидкости в предварительно взвешиватьред считая пробирки: кровь, кости (колено и плечо), желчного пузыря, почек, печени, желудка (с содержанием), тонкий кишечник (с содержанием), толстой кишки и слепой кишки (с содержимым), щитовидной железы и трахею, мочевой пузырь с мочой , и хвост. </li><li> Промыть соответствующие ткани (за исключением крови, желчного пузыря и мочевого пузыря) в PBS, чтобы удалить кровь и промокните насухо перед размещением тканей в соответствующих счетных трубок. </li><li> Поместите туши животного в полиэтиленовый пакет и измерить остаточную всю активность тела с использованием дозы калибратор. </li><li> Взвесить каждую пробирку, содержащую образец ткани. Вычесть начальный вес трубы, чтобы получить массу ткани. </li><li> Используйте дозы калибратор (99m Тс настройка) для измерения количества активности в исследуемом образце (100 мкл) в момент впрыска для каждой мыши. Примечание: Образец теста равен объему впрыска, таким образом, давая счетчик активности в момент инъекции. </li><li> Во время измерения ткани, вliquot 5 мкл тестируемого образца, используемого ранее. Использование мульти-детектора гамма - счетчика (99m Tc настройка) и считать , чтобы получить значение в минуту (CPM) для испытуемого образца 5 мкл. </li><li> С помощью двух значений , полученных в 2.2.9 и 2.2.10 , чтобы вычислить активность и отношения СРМ с помощью уравнения 1 , чтобы получить коэффициент преобразования (CPM мкКи -1). (1) <img alt="Уравнение 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188eq1.jpg" /></li><li> С помощью гамма-счетчика для измерения количества радиоактивности в каждом образце ткани или жидкости. </li><li> С помощью уравнения 1, чтобы вычислить количество активности в каждой ткани или жидкости, во время измерения по отношению к общей вводили дозы. Это значение затем нормализовали по массе органа и выражают в процентном содержании вводили дозы на грамм (т.е.% ID / г) ткани. </li><li> Выполните шаги 2.1.2 2.2.13 провести отрицательный контрольный эксперимент с использованием 99m Tc-меченых лигандов тетразин в Absenв.п. ТШО-BP. Жертвоприношение мышей (n = 3) в 0,5, 1, 4 и 6 ч после инъекции и получения ткани или жидкости, как описано выше. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jurisson, S. S., Lydon, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Technetium+Small+Molecule+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals.</a> Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).</li>
<li>Kluba, C. A., Mindt, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click-to-chelate%3A+Development+of+Technetium+and+Rhenium-Tricarbonyl+Labeled+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals.</a> Molecules. 18, 3206-3226 (2013).</li>
<li>Amato, I. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/cen-v087n036.p058">Nuclear Medicines Conundrum.</a> Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).</li>
<li>Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+of+Avidin+and+Biotin+for+Imaging+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications.</a> J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).</li>
<li>Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine+Ligation%3A+Fast+Bioconjugation+Based+on+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity.</a> J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).</li>
<li>Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Based+Cycloadditions%3A+Application+to+Pretargeted+Live+Cell+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging.</a> Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Chemistry+for+Pretargeted+Tumor+Imaging+in+Live+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.%2C+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+Pretargeted+Strategy+for+the+PET+Imaging+of+Colorectal+Carcinoma+via+the+Modulation+of+Radioligand+Pharmacokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics.</a> Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Reactive+trans-Cyclooctene+Tags+with+Improved+Stability+for+Diels-Alder+Chemistry+in+Living+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems.</a> Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).</li>
<li>Rossin, R., Robillard, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+Imaging+Using+Bioorthogonal+Chemistry+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).</li>
<li>Denk, C., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201404277/abstract">Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).</li>
<li>Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2013/CC/c3cc41027g#!divAbstract">Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation.</a> Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Trans-Cyclooctene+Ligation+for+the+Rapid+Construction+of+18F+Labeled+Probes%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes.</a> Chem. Commun. 46 (42), 8043(2010).</li>
<li>Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga+Chelating+Bioorthogonal+Tetrazine+Polymers+for+the+Multistep+Labeling+of+Cancer+Biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers.</a> Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pretargeted+PET+Imaging+Strategy+Based+on+Bioorthogonal+Diels-Alder+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry.</a> J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).</li>
<li>García, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096808961630061X">99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging.</a> Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).</li>
<li>Russell, R. G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonates%3A+The+First+40+Years%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonates: The First 40 Years.</a> Bone. 49 (1), 2-19 (2011).</li>
<li>Yazdani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bone-Seeking+Trans-Cyclooctene+for+Pretargeting+and+Bioorthogonal+Chemistry%3A+A+Proof+of+Concept+Study+Using+99mTc+and+177Lu-Labeled+Tetrazines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines.</a> J. Med. Chem. , (2016).</li>
<li>Alberto, R., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja980745t">A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand.</a> J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).</li>
<li>Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja003932b">Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3.</a> J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).</li>
<li>Lu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960894X12011584">Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).</li>
<li>Maresca, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0020169312001764">Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics.</a> Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).</li>
<li>Bartholomä, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+Mode+of+Action+of+Re%28CO%293+Thymidine+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22ChemMedChem%22%5BJournal%5D)">Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes.</a> ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).</li>
</ol>

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Коллекция тетразина-сшитый тридентатных хелатов различной полярностью был подготовлен, и оценивали полезность их 99m Tc комплексов в реакции IEDDA с производным TCO в естественных условиях. Эффективная и воспроизводимый метод маркировки 99m Tc была разработана для пяти тетразин-хелатов, где концентрация лиганда 10 -3 М. Стадию мечение с последующим удалением защитной группы Т- бутиловых групп (для соединений , 2-5). Высокая концентрация лиганда использо...

99m Tc остается доминирующим радиоизотопные используется в диагностической ядерной медицины, с более чем 50 миллионов процедур визуализации , проведенных за год во всем мире 1, 2, 3. Большинство 99m Tc агентов , используемых клинически являются радиофармпрепаратов типа перфузию. Есть ограниченное количество активно целевых соединений , в которых 99m Тс направлен связать конкретную биомаркером через лигирования к конструкции прицеливания. Создание целевых 99m Tc радиофармпрепаратов часто затруднено влиянием 99m Tc-лигандов комплексов на способность целевой молекулы , чтобы связать биомаркера интерес, или изотопы Период полураспада не достаточно долго для использования с более высокими биомолекул молекулярной массой такие как антитела. Последнее, как правило, требует нескольких дней, прежде чем изображения получены для того, чтобы биомолекулы, чтобы очистить от нецелевых Tiss<html> ЕЭС России. Pre-нацеливание предлагает альтернативный подход для преодоления этих проблем. Предварительно таргетирования в сочетании с биоортогональные реакции было показано, является эффективным способом для разработки новых зондов молекулярной визуализации как для флуоресценции и радио-томографии 4, 5, 6, 7, 8. Реакция обратного спроса электронный Дильса-Альдера (IEDDA) между 1,2,4,5-тетразин (TZ) и транс -cyclooctene (TCO) производных, как показано на рисунке 1, было показано, что особенно эффективным 6. Реакцию IEDDA с этими компонентами могут проявлять быструю кинетику в PBS (K 2 ≈ 6000 M -1 с -1) и высокой селективностью, что делает его идеальным для предварительного таргетинга приложений в естественных условиях 9, 10. e_content &quot;&gt; Наиболее распространенным подходом включает введение ТСО полученный нацеливающего вектора и после достаточного периода задержки, радиоизотопный тетразин вводят. радиоактивно меченных тетразины на основе 11 C, 18 F, 64 Cu, 89 Zr и 111 In было сообщила 11, 12, 13, 14, 15. в отличие от этого , есть только один отчет о 99m Tc-меченого Тг, который был подготовлен с использованием типа лиганда ГНА , требующую использования сопутствующих лигандов для предотвращения связывания белка и деградации в естественных условиях 16. в качестве альтернативы, мы сообщаем здесь синтез 99m Tc (I) маркированы тетразины с использованием семейства лигандов , которые образуют стабильные тридентатные комплексы с [99m Tc (CO) 3] + ядро. Рисунок 1: bioorthogonal реакция IEDDA между тетразин и транс - -cyclooctene. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> Семейство лигандов , приготовленных содержат тридентатные хелаты , которые различаются по полярности и от природы группы линкера между области связывания металла и Tz (рисунок 2). Цель состояла в том, чтобы идентифицировать 99m Tc-тетразин конструкция , которая может эффективно локализовать и реагировать с TCO-меченых участков в естественных условиях и быстро ясно , когда он не связан, с тем , чтобы принести высокую цель-к-нецелевых коэффициентов. Для тестирования лиганды, ТШО-производное бисфосфоната (ТСО-ВР) использовали 17. Ранее мы показали, что TCO-BP локализуется в областях активного костного метаболизма и может взаимодействовать срадиоактивномеченые тетразины в естественных условиях 18. Это удобный реагент для тестирования новых тетразины, так как он может быть получен в одну стадию, и эксперименты могут быть выполнены в нормальных мышей, где локализация происходит в первую очередь в суставах (колени и плечи).

<table><tbody><tr><td>Газ аргон</td><td>Alphagaz</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>Na2CO3</td><td>EMD Millipore</td><td>106395</td><td>---</td></tr><tr><td>Na2B4O7&#183; 10H2O</td><td>Анахимия</td><td>S9640</td><td>---</td></tr><tr><td>KNaC4H4O6&#183; 4H2O</td><td>Anachemia</td><td>217255</td><td>---</td></tr><tr><td>Technelite 99mTc генератор</td><td>медицинской визуализации Lantheus</td><td>---</td><td>Источник 99mTcO4-</td></tr><tr><td>0,9% физиологического раствора</td><td>Lantheus медицинская визуализация</td><td>---</td><td>Для элюирования генератора</td></tr><tr><td>1 M HCl</td><td>Lab Chem</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>MeOH</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>ACN</td><td>Каледон</td><td>---</td><td>ВЭЖХ класса</td></tr><tr><td>Millipore H2O</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Barnstead Nanopure</td><td>---</td></tr><tr><td>DCM</td><td>Caledon</td><td></td><td>------TFA</td></tr> <tr><td></td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td>pH 7,4 1x</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>---</td></tr><tr><td>Tween80</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8047</td><td>---</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>CDMV</td><td>108737</td><td>Поставщик: Fresenius Kabi Animal Health</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Waters</td><td>1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (артикул # 15590)</td><td>---</td></tr><tr><td>Колонка ВЭЖХ для анализа и очистки соединений 2-4</td><td>Phenomenex</td><td>00G-4435-E0</td><td>Gemini&reg; 5 & micro; м С18 110&nbsp; &Aring;, LC Колонна 250 х 4,6 мм</td></tr><tr><td>ВЭЖХ колонка для анализа и очистки соединений 1 и 5</td><td>Воды&nbsp;</td><td>186003115</td><td>XBridge BEH C18 Колонна, 130 &Aring;, 5 & микро; m, 4,6 мм x 100 мм</td></tr><tr><td>микроволновый реактор&nbsp;</td><td>Биотаж&nbsp;</td><td>Инициатор 8</td><td>---</td></tr><tr><td>Biotage V10 Испаритель</td><td>Biotage&nbsp;</td><td>Серийный номер # V1041</td><td>---</td></tr><tr><td>Калибратор дозы</td><td>Capintec, Inc.&nbsp;</td><td>CRC-25R</td><td>---</td></tr><tr><td>Гамма-счетчик</td><td>Perkin</td><td>Elmer Wizard 1470 Автоматический гамма-счетчик</td><td>---</td></tr><tr><td>Весы для помещений животных&nbsp;</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP105 Delta Range</td><td>---</td></tr><tr><td>флаконы для микроволновой печи&nbsp;</td><td>Биотаж&nbsp;</td><td>355629</td><td>0,5-2 мл&nbsp;</td></tr></tbody></table>

Подготовка и оценка<sup&gt; 99m</sup&gt; tc меченных тридентатной хелатов для предварительной ориентации Использование биоортогональные реакции

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Предварительное нацеливание в сочетании с биоортогональной химией становится эффективным способом создания новых радиофармпрепаратов. Из доступных методов циклоприсоединение по Дильсу-Альдеру (IEDDA) с обратным электронным спросом между тетразинами с радиоактивной меткой и трансциклооктеном (TCO), связанным с биомолекулой, оказалось высокоэффективным биоортогональным подходом к визуализации конкретных биологических мишеней. Несмотря на то, что технеций-99m остается наиболее широко используемым изотопом в диагностической ядерной медицине, существует дефицит методов получения тетразинов, меченных 99mTc. В данной работе мы сообщаем о получении семейства производных тридентат-хелат-тетразина и их комплексов Tc(I). Эти до сих пор неизвестные соединения были помечены радиоактивной меткой 99mTc с использованием микроволнового метода с радиохимическим выходом от 31% до 83%. Продукты стабильны в физрастворе и PBS и быстро реагируют с производными TCO in vitro. Их способность к предварительному нацеливанию in vivo была продемонстрирована с использованием производного ТСО-бисфосфоната (ТСО-ВР), которое локализуется в областях активного метаболизма костей или повреждения. В исследованиях на мышах 99mТс-тетразины показали высокую концентрацию активности в коленных и плечевых суставах, чего не наблюдалось при проведении экспериментов в отсутствие ТСО-ВР. Общее поглощение в органах, не являющихся мишенями, и фармакокинетика сильно варьировали в зависимости от природы линкера и полярности хелата.

Лиганды , были синтезированы с использованием различных сшивающих агентов и энтеросорбенты с помощью простого восстановительного аминирования стратегии (рисунок 2), за которой следует соединение продукта с коммерчески доступным тетразин 22, 23. Радиоактивной проводили с использованием того же метода для всех соединений и был хорошо воспроизводимым. Процесс был оптимизирован путем изменения рН, количество лиганда,...

Здесь мы описываем протокол для радиоактивного мечения и in vivo испытаний производных тридентат-99mTc(I) хелат-тетразина для предварительного нацеливания и биоортогональной химии.

Подготовка и оценка<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc меченных тридентатной хелатов для предварительной ориентации Использование биоортогональные реакции

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

Общая цель данной процедуры — получение тетразинов, меченных технецием-99m, для предварительно нацеленной визуализации с использованием биоортогональной химии с биомолекулами, модифицированными транс-циклооктеном, в качестве векторов нацеливания. Этот метод представляет собой важную новую платформу для разработки новых радиофармацевтических препаратов. Благодаря предварительному нацеливанию описанные здесь комплексы технеция могут быть использованы для визуализации широкого спектра органов, тканей и биомаркеров.Данный метод является преимущественным, поскольку он представляет собой надежный пошаговый способ получения тетразинов, меченных технецием-99m, который является наиболее широко используемым медицинским изотопом в диагностической медицине. Эту методику можно применять с различными таргетными векторами, включая малые молекулы и антитела. Она также может быть использована для радиотерапии путем замены технеция на бета-излучающие изотопы рения.Часть процедур на животных продемонстрирует Нэнси Джензен, техник по биологии в нашей лаборатории. Чтобы начать процедуру радиомаркировки, в микроволновом флаконе смешайте 8 mg боранокабоната калия, 15 mg карбоната натрия, 20 mg десятигидрата тетрабората натрия и 25 mg тетрагидрата тартрата калия-натрия. Продувайте флакон газом аргоном в течение 10 минут.Затем добавьте во флакон 4 мл пертехнетата технеция-99m в 0,9% физиологическом растворе с активностью 1 110 МБк. Перенесите реакционную смесь в микроволновый реактор и перемешивайте в течение 10 секунд. Затем нагрейте смесь при температуре 110 °C в течение 3,5 минут для получения катиона триакватрикарбонилтехнеция-99m.Добавьте около 400 µL 1 M соляной кислоты, чтобы довести pH раствора до 3,5–4. Затем для каждого тетразинового лиганда растворите 2 мг лиганда в 250 µL метанола. Добавьте 250 µL комплекса технеция-99m с активностью 74 MBq в каждый раствор лиганда.Нагрейте смесь в микроволновом реакторе при 60 °C в течение 20 минут. Для тетразиновых лигандов с t-Butyl-защитными группами перенесите раствор из микроволновой виалы в сцинтилляционную виалу объемом 20 мл, затем выпарите растворитель и снова растворите каждый комплекс в 1 мл раствора дихлорметана и трифторуксусной кислоты в соотношении один к одному по объему. Затем перенесите раствор в микроволновую виалу и нагрейте эти комплексы в микроволновом реакторе при 60 °C в течение 6–10 минут для снятия защиты с лигандов.Охладите комплексы до комнатной температуры, затем выпарите растворитель. Перед переходом к очистке методом ВЭЖХ растворите остатки в 500 µL водного раствора ацетонитрила или метанола с водой в соотношении один к одному. Для очистки каждого радиоактивно меченого комплекса тетразина используйте обращенно-фазовую ВЭЖХ на колонке C18 с градиентом элюции ацетонитрила и воды от 30% до 70%, затем до 40% и до 60% в течение 20 минут; при этом в элюенте на протяжении всего процесса должно присутствовать 0,1% трифторуксусной кислоты.Соберите очищенный продукт, когда его вымывание будет видно на гамма-кривой. Затем проведите совместную инъекцию каждого меченого комплекса с раствором 0.125 milligrams соответствующего комплекса радия-тетразина в 20% methanol в воде. Сравните времена удерживания пика комплекса рения на УФ-кривой и пика комплекса технеция на гамма-кривой, чтобы подтвердить идентичность гамма-пика.Удалите растворитель из каждого очищенного комплекса технеция-тетразина. Приведите каждый комплекс к концентрации 7.4 kBq/µL в фосфатно-солевом буферном растворе с 0.5% бычьего сывороточного альбумина и 0.01% полисорбата 80. Для каждой мыши наберите в шприц 100 µL раствора производного TCOPB в физиологическом растворе с концентрацией 5 µg/µL для подготовки дозы 20 mg/kg.Присоедините иглу калибра 30G к дозирующему шприцу. Поместите мышь в устройство для физической фиксации. Найдите вены на латеральной поверхности хвоста примерно в двух сантиметрах от его конца и протрите эту область спиртовым тампоном.Введите иглу шприца под малым углом параллельно вене. Медленно введите производное TCOBP. Извлеките иглу и прижмите к месту инъекции чистую марлевую салфетку, слегка надавливая до остановки кровотечения.Через один час после инъекции производного TCOBP введите в хвостовую вену дозу желаемого комплекса технеция-99m с тетразином объемом 100 µL и активностью примерно 0,74 MBq. Используйте дозовый калибратор для измерения активности контрольного образца комплекса технеция объемом 100 µL непосредственно перед инъекцией. Сохраните контрольный образец для последующих измерений.Наркотизируйте мышь смесью 3% isoflurane и 2% кислорода через шесть часов после инъекции. Положите мышь на спину, поместив нос в назальную маску для поддержания анестезии, и найдите мечевидный отросток. Подсоедините иглу 25-го калибра к шприцу, предварительно обработанному гепарином.Введите иглу под углом 20 градусов под мечевидный отросток, немного левее срединной линии. После полного введения иглы медленно потяните поршень на себя, чтобы проверить наличие крови в ступице иглы, подтверждая успешную пункцию сердца. При необходимости скорректируйте положение иглы.После прокола сердца медленно наберите в шприц один миллилитр крови. Перенесите образец крови в предварительно взвешенную пробирку для подсчета. Эвтаназируйте мышь путем перелома шейного отдела позвоночника, пока она находится под воздействием анестезии.Поместите эвтаназированное животное в пластиковый пакет и измерьте активность всего тела с помощью калибратора доз. Затем извлеките кости коленного и плечевого суставов, желчный пузырь, почки, печень, щитовидную железу и трахею, а также хвост. Вместе с их содержимым извлеките желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник и слепую кишку, а также мочевой пузырь.Промойте все собранные ткани, за исключением желчного пузыря и мочевого пузыря, в фосфатно-солевом буферном растворе для удаления крови. Промокните ткани насухо и поместите каждую из них в предварительно взвешенную пробирку для подсчета. Измерьте остаточную активность тушки.Взвесьте каждый образец ткани и вычислите массу только самой ткани. Используйте многодетекторный гамма-счетчик для измерения активности пятимикролитровой аликвоты исследуемого образца комплекса технеция. Используя полученное значение в расчетах импульсов в минуту и активность, измеренную в момент инъекции, рассчитайте коэффициент пересчета.Измерьте активность каждого образца ткани и жидкости с помощью гамма-детектора. Переведите значения в микрокюри и нормализуйте каждое значение по весу органа, чтобы определить процент введенной дозы на грамм ткани. Повторите этот процесс с дополнительными мышами без инъекции производного TCOPB в качестве серии отрицательного контроля.С помощью данного метода было проведено мечение технецием-99m пяти комплексов тетразина, различающихся комбинациями линкера и ключевого лидера. Производное TCOPB, которое локализуется в областях костной ткани с высоким обменом кальция, использовалось для предварительного таргетирования плечевых и коленных суставов мышей. Для каждого соединения тетразина были рассчитаны соотношения процента введенной дозы на грамм ткани в костях и крови.Все пять соединений быстро выводились из крови и накапливались в костной ткани, что указывает на протекание селективной биоортогональной реакции сочетания между тетразиновыми соединениями и производным TCOBP in vivo. Соединение три продемонстрировало наилучшее сочетание адресности и скорости выведения из крови. Эксперименты с отрицательным контролем показали, что радиоактивно меченные тетразиновые комплексы не локализовались в костной ткани значимо при отсутствии производного TCOBP.Например, при отсутствии введения производного TCOBP соединение два обнаруживалось в высоких концентрациях в желчном пузыре и кишечнике, но в очень малых количествах в кости. У мышей, получавших производное TCOBP, наблюдалась значительная вариативность локализации в тканях среди пяти протестированных соединений. Так, по сравнению с другими комплексами, соединение три обнаруживалось в очень малых количествах в толстой кишке, печени, моче и мочевом пузыре, тогда как в кости его содержание было значительно выше.При должном навыке описанный здесь метод мечения может быть выполнен полностью менее чем за два часа. При применении данной методики важно обеспечить точное взвешивание всех реагентов и продувку солей аргоном перед их добавлением в раствор технеция. Также критически важно довести pH раствора технеция до значения от 3,5 до 4 перед добавлением тетразинового лиганда.После просмотра этого видео вы должны хорошо понимать, как подготавливать и очищать тетразины, меченные технецием, и как они могут быть использованы для создания новых радиофармацевтических препаратов с помощью претаргетинга и биоортогональной химии. Не забудьте принять соответствующие меры предосторожности при работе с радиоактивными веществами, такие как изучение типа излучаемого излучения, а также оптимальных способов экранирования и обращения с образцами.

preparation-evaluation-99mtc-labeled-tridentate-chelates-for-pre

Research

JoVE Journal

Chemistry

Химия

Это видео описывает технику претаргетной радиоиммунотерапии или PRIT, в которой иммуноконъюгаты с последующими радиолигандами вводятся для лечения опухолей. Эта радиоиммунотерапия снижает дозы облучения здоровых тканей и использует радионуклиды с очень низким периодом полураспада, несовместимые с векторами на основе антител.

Претаргетная радиоиммунотерапия: метод адресной доставки терапевтических радионуклидов в опухоли

Чтобы продемонстрировать молекулярной визуализации рака MR с небольшим пептидом целевой MRI контрастный агент, специфичную для сгустками белками плазмы в строме опухоли в мышиной модели рака простаты.

MR молекулярной визуализации рака простаты с небольшой молекулярной CLT1 пептида целевых Агента Contrast

Мы представляем метод для быстрого, обратимые иммобилизации малых молекул и функционализованных ансамблей наночастиц для поверхностного плазмонного резонанса (SPR) исследований, с помощью последовательного на-чипе bioorthogonal химия циклоприсоединение и антитело-антиген захвата.

Микрофлюидных На чипе Захват-циклоприсоединения Реакция на Обратимо Остановите малых молекул или многокомпонентные структуры для биосенсора приложений

Биоортогональное обратное потребность в электронах циклоприсоединение Дильса-Альдера было использовано для создания эффективной и модульной предцелевой стратегии визуализации ПЭТ при раке. В данном протоколе этапы данной методики описаны в контексте модельной системы с использованием таргетного антитела к колоректальному раку huA33 и радиолиганда, меченного 64Cu.

Укрощение Bioorthogonal Обратная электронной Demand Дильса-Альдера циклоприсоединения для Pretargeted ПЭТ

Благодаря своему многодневному радиоактивному периоду полураспада и благоприятным свойствам распада, позитрон-излучающий радиометалл 89Zr чрезвычайно хорошо подходит для использования в радиофармпрепаратах на основе антител для ПЭТ-визуализации. В этом протоколе будут описаны биоконъюгация, радиосинтез и доклиническое применение 89Zr-меченых антител.

Биоконъюгации и Radiosynthesis из<sup&gt; 89</sup&gt; Zr-ДФО меченых антител

Подробный порядок синтеза 125 I-меченого азида и радиомечения из dibenzocyclooctyne (DBCO) -группа-сопряженными, 13-нм размера наночастиц золота с использованием меди , свободной от реакции щелчка описана.

Оптимизированного протокола для эффективного радиоактивной наночастиц золота с помощью<sup&gt; 125</sup&gt; I-меченый Azide простетической группы

После получения 64 Сu-модифицированного моноклонального антитела связывания с рецептором Т - клеток трансгенного мышея, Т - клетками являются радиоактивно метили в естественных условиях, анализировали на жизнеспособность, функциональность, стабильность маркировки и апоптоз, и адаптивно переносили в мышей с дыхательными путями гиперчувствительности замедленного типа реакцию для неинвазивного изображений с помощью позитронно-эмиссионной томографии / компьютерной томографии (ПЭТ / КТ).

Мышиные лимфоцит Этикетировочное по<sup&gt; 64</sup&gt; Си-антитело к рецептору Ориентация на<em&gt; В Vivo</em&gt; Cell Торговля ПЭТ / КТ

Вирусные производные пептиды, в сочетании с антител конъюгатов (ACs) — это подход, набирает обороты из-за возможности доставлять молекулярной аппаратуру с накоплением рост опухолевых клеток. Используя общие методы для оценки пептид спряжение, переменного тока и полезной нагрузки внутриклеточного накопления и опухоли таргетинга, этот протокол помогает исследователям на этапах первоначального развития.

Первоначальная оценка антител конъюгаты изменения с пептидами вирусный производные для повышения сотовой накопления и ориентации опухоли

Этот протокол описывает синтеза и характеристика транс- cyclooctene (TCO)-изменение антитела и 177Лу меченых тетразина (Tz) лиганд для pretargeted радиоиммунотерапия (ГПРЗ). Кроме того он подробно использование этих двух конструкций в vivo накопление и продольных терапия исследований в мышиных модели развития колоректального рака.

Pretargeted радиоиммунотерапия, основанный на реакции Дильса Альдера спроса обратной электрона

В этом протоколе мы будем описывать синтез СТРУЧКИ, phenyoxadiazolyl метил на основе сульфона реагент для сайта селективные крепление грузов тиолы биомолекул, особенно антител. Кроме того мы будем описывать синтеза и характеристика бифункциональных хелатором СТРУЧКИ подшипника и его спряжение модель антитела к.

Синтез и Bioconjugation тиоловых реактивной реагентов для создания сайта выборочно изменять Immunoconjugates

Здесь представлен протокол радиоактивного мечения клеток радиоизотопом позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) 89 Zr (t1/2 78,4 ч) с использованием готового к использованию синтона радиомечения, [89 Zr]Zr-p-изотиоцианатобензил-десферриоксамин ([89Zr]Zr-DBN). Радиоактивное мечение клеток с помощью [89Zr]Zr-DBN позволяет неинвазивно отслеживать и визуализировать введенные радиоактивно меченные клетки в организме с помощью ПЭТ в течение 7 дней после введения.

Позитронно-эмиссионная томография клеточного транспорта: метод радиомечения клеток

Изучите метод радиомаркировки тетразинов технецием-99м для предварительного нацеливания с использованием биоортогональной химии. Этот протокол позволяет визуализировать органы и ткани, открывая новые возможности для разработки радиофармацевтических препаратов.

Подготовка и оценка

Больше видео