Внутрипротокового Доставка в Кролика МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Общая цель этой процедуры заключается в доставке водных растворов в молочный проток кролика и визуализации внутрипротоковой доставки с помощью ультразвуковой визуализации. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области биологии молочной железы, например, как терапевтические препараты по-разному взаимодействуют со средой молочных протоков по сравнению с другими местами введения. Основное преимущество этого метода заключается в том, что контрастный реагент для визуализации или любые потенциальные терапевтические средства, подлежащие оценке, могут быть введены локально в ткань, где возникают поражения молочной железы.

Демонстрировать технику будет Амелия Кларк, техник в моей лаборатории. Чтобы начать эту процедуру, тщательно побрейте хвостовую полость живота кролика, находящегося под наркозом, в области вокруг третьей и четвертой пар паховых сосков. Когда большая часть волос удалена, нанесите крем для удаления волос на выбритые участки и через 10 минут после нанесения удалите крем с помощью влажного бумажного полотенца, смоченного теплой водой.

Затем протрите эту область пропитанными спиртом марлевыми салфетками, чтобы очистить место инъекции. Поместите кролика на спину в V-образное корыто, выстланное рециркуляционным теплым водяным одеялом на впитывающей прокладке. Для приготовления контрастного вещества восстановите его в соответствии с инструкциями производителя.

Затем аккуратно покачивайте флакон и перемешайте. Используемое здесь контрастное вещество стабильно работает при комнатной температуре в течение четырех-шести часов после восстановления. В ходе этой процедуры необходимо найти третью и четвертую пары паховых сосков, которые должны быть введены внутрь.

Затем загрузите 0,2 миллилитра стерильного 0,9 физиологического раствора в один миллилитр туберкулинового шприца с люэровским замком с иглой 22 калибра. Утилизируйте иглу 22 калибра, как только физиологический раствор окажется в шприце, и замените ее стерильной иглой 25 калибра. Далее аккуратно протрите участок 85%-ным изопропиловым спиртом на губной салфетке.

Со скосом иглы вверх и шприцем, параллельным телу животного, введите иглу в боковую часть соски и медленно введите от 0,1 до 0,2 миллилитра физиологического раствора, чтобы обеспечить лучшую визуализацию протоковых отверстий. После этого загрузите 0,2 миллилитра раствора для инъекций в туберкулиновый шприц с люэровским замком. Осторожно держите соску большим и указательным пальцами и слегка приподнимите ее для внутрипротоковой инъекции.

Сохраняя приподнятое положение соска, осторожно канюлируйте интересующий вас проток с помощью иглы с тупым концом 25 калибра. После канюляции аккуратно поверните шприц с люэровским замком на ступицу инфузионной иглы с тупым концом до тех пор, пока она не зафиксируется на месте. Поднимите соску и медленно вводите раствор, чтобы свести к минимуму потенциальное повреждение, вызванное быстро движущимися жидкостями внутри канала.

Теперь нанесите обильное количество центрифугированного геля для ультразвука на кожу интересующей вас области. Убедитесь, что в геле нет пузырьков, так как они могут ухудшить качество изображения. Далее установите глубину снимка на шесть миллиметров.

Поместите датчик с частотой 21 мегагерц в контакт с гелем и отсканируйте интересующую область в режиме B. Наблюдайте за контрастным веществом в сканируемой области, включая отверстие протока и по всему протоку, чтобы подтвердить успешную внутрипротоковую доставку. Затем сделайте снимок и сохраните его.

Удалите гель для ультразвука с кожи животного с помощью марлевых салфеток. После этого осмотрите место инъекции и убедитесь в отсутствии признаков травмы в области соска или окружающих тканей. Отек в области вокруг соска, скорее всего, указывает на инъекцию жировой подушки в молочную железу, а не на успешную внутрипротоковую инъекцию.

Контрастный реагент локализуется сразу после доставки и визуализируется через 30 минут после доставки и через 45 минут после доставки. Стойкость реагента внутри молочного протока позволяет визуализировать его на протяжении всего этого процесса. На этом снимке показан внешний вид после внутрипротокового введения 0,2 миллилитра раствора синего Эванса.

При вскрытии кожи Эванс синий позволяет визуализировать все молочное протоковое дерево и подтверждает неповрежденную протоковую структуру. А на этом снимке показан целый образец участка паховой молочной железы после фиксации и окрашивания квасцами кармина. После освоения этой техники ее можно выполнить примерно за 15 минут, не считая времени, необходимого для того, чтобы анестезия подействовала.

Пытаясь выполнить эту процедуру, важно не забывать поднимать соску, чтобы выпрямить протоки во время внутрипротоковых родов. Всегда следуйте рекомендациям вашего учреждения по защите животных. После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как расширенная визуализация или анализ конечных точек тканей, такие как лизотерапия или иммуногистохимия, чтобы ответить на дополнительные вопросы о фармакодинамике или морфологических изменениях на тканевом уровне, вызванных доставкой терапевтического агента.

После своего развития этот метод открывает путь исследователям в области биологии молочной железы к изучению доставки визуализирующих агентов, а также терапевтических средств в молочный проток в будущем. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выполнять внутрипротоковую доставку в молочную железу кролика.