Минимально инвазивная Поперечная Сужение аортального у мышей

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы вызвать гипертрофию левого желудочка путем сужения поперечной дуги аорты с помощью простой хирургической процедуры, не требующей искусственной вентиляции легких. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области кардиологии о ремоделировании миокарда, гипертрофии сердца, апоптозе и фиброзе, а также условиях перегрузки давления в левом желудочке. Основным преимуществом этой методики является то, что она сохраняет основы регулярного сужения поперечной аорты, устраняя при этом необходимость в аппарате искусственной вентиляции легких и интубации трахеи.

Перед началом процедуры с помощью иглодержателя изогнут кончики двух-четырех игл 30-го калибра и установите иглы на отдельные ватные аппликаторы. Затем затупите иглу 27 калибра и с помощью иглодержателя согнуть кончик на 90 градусов. Затем разгладьте кончик о твердую поверхность, чтобы получилась распорка 0,4 миллиметра.

После подтверждения соответствующего уровня седативного эффекта отсутствием реакции на защемление пальцев ног нанесите мазь на глаза животного и положите мышь на подогретую при температуре 37 градусов Цельсия грелку в положении лежа на спине. Закрепите конечности на грелке с помощью хирургической ленты. Затем продезинфицируйте кожу тремя последовательными спиртовыми салфетками и раствором повидон-йода и наложите на животное стерильную простыню с открытым рабочим полем.

Чтобы начать процедуру лигирования, с помощью стерильного скальпеля вскройте кожу в положении по средней линии шеи и груди. Далее под препарирующим микроскопом с помощью тупых ножниц аккуратно отделите соединительные ткани и подтяните щитовидную железу к голове. С помощью изогнутых игл отделите мышечный слой на трахее по средней линии, по направлению к обеим сторонам животного и с помощью тупых ножниц разрежьте грудину примерно на пять миллиметров до второго ребра.

Откройте разрез изогнутыми щипцами и с помощью изогнутой иглы отделите доли тимуса и нижнюю грудную стенку. В этот момент будет хорошо видна поперечная дуга аорты и две сонные артерии. Поместите изогнутую иглу под свод и с помощью кончика сделайте перфорацию между стенкой сосуда и соединительной тканью с другой стороны.

С помощью иглы наложите шов мононити 6-0 под дугу аорты, а подготовленный ранее спейсер поместите в петлю. Зафиксируйте шов на месте двойным узлом и аккуратно снимите спейсер. После подтверждения успешного сужения узла разрежьте концы шовной нити и с помощью шелкового шва 6-0 закройте грудную стенку простым прерывистым шовным рисунком, с последующим закрытием кожи монофиламентным швом 6-0 в непрерывном шовном узоре.

Затем нанесите раствор повидон-йода на место наложения швов и поместите животное в предварительно утепленную клетку для восстановления и послеоперационного контроля. Через неделю нанесите электродный гель на лапы подопытного животного и прикрепите их к нагреваемой при температуре 37 градусов Цельсия грелке с электродами. Далее нанесите ультразвуковой гель на грудную клетку мыши и выберите B-режим на высокочастотной ультразвуковой системе.

С помощью зонда MS550D с частотой 40 мегагерц найдите левый желудочек. Затем в М-режиме измерьте толщину систолической и диастолической стенки. Вернитесь в B-режим, чтобы найти левую общую сонную артерию перед точкой разветвления, и используйте импульсную волну и цветной допплер для оценки потока, сохраняя изображения для последующего анализа по мере необходимости.

Наклоните платформу для работы с животными влево так, чтобы мышь находилась в левом положении лежа, и поместите щуп со смещением в 30 градусов от положения, параллельного голове в парастернальном положении. Манипулируйте крутящими моментами x и y, чтобы найти дугу аорты и найти сужение в режиме цветного допплера, чтобы сделать место сужения более заметным. С помощью импульсной волны и цветного допплера измерьте пиковую скорость кровотока в точке, где кровь течет между двумя сонными артериями, отходящими от дуги аорты.

Затем дайте животному восстановиться на грелке в положении лежа с контролем до полного восстановления. Минимально инвазивная поперечная констрикция аорты, или MTAC, надежно вызывает перегрузку левого желудочка у лигированных мышей с четко видимой суженной поперечной аортой и увеличенной пиковой скоростью кровотока через место сужения. Для сравнения, животное, управляемое бутафорией, не демонстрирует видимого сужения с нормальной пиковой скоростью потока.

В результате перевязки скорость кровотока в правой сонной артерии значительно увеличивается, а давление может нарастать в восходящей аорте и сердце, что приводит к гипертрофии левого желудочка, что значительно снижает кровоток в левой общей сонной артерии. Тем не менее, почти идентичный кровоток наблюдается в правой и левой сонных артериях у мыши, управляемой ложью. Результирующие параметры, связанные с гипертрофией, легко наблюдаются в значительно увеличенных и деформированных сердцах мышей, перевязанных MTAC, и их сниженная общая выживаемость.

Эти изменения в дальнейшем наблюдаются на клеточном уровне, включая увеличение размера клеток сердечной мышцы и фиброз у мышей MTAC по сравнению с животными без лигирования. После освоения этой техники ее можно выполнить за пять-десять минут, если она выполнена правильно. При попытке выполнить эту процедуру важно помнить о необходимости быть осторожным, чтобы не повредить сосуды.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как вызвать гипертрофию левого желудочка с помощью поперечного сужения дуги аорты, используя простую хирургическую процедуру, не требующую искусственной вентиляции легких.