Метод проверки эффективности мытья рук для удаления возникающих инфекционных патогенов

Общая цель этого эксперимента состоит в том, чтобы проверить сравнительную эффективность вариантов мытья рук на руках, которые были экспериментально привиты организмом, представляющим интерес. Этот метод может предоставить информацию по ключевым вопросам, которые помогут предотвратить инфекционные заболевания. Позволяя исследователям исследовать эффективность мытья рук для конкретных организмов, представляющих интерес.

Основное преимущество этого метода заключается в том, что он является гибким и может быть адаптирован для исследования множества различных организмов. Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы поняли, что растворы хлора используются для мытья рук в условиях Эболы, и в то время не было никаких доказательств эффективности этого метода. После набора подходящих субъектов и приготовления растворов для мытья рук в соответствии с текстовым протоколом, подготовьте бактерии, нанеся непатогенную цепь E.Coli на агаровые планшеты LB, и инкубируйте культуры при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов для получения одиночных колоний.

За день до начала эксперимента используйте стерильную смазку, чтобы захватить одну колонию из пластины и ввести 10 миллилитров бульона LB. Инкубируйте культуры при температуре 37 градусов Цельсия, с встряхиванием, в течение ночи. Утром в день эксперимента добавьте один миллилитр ночной культуры к 20 миллилитрам свежего бульона LB.

Инкубируйте культуры в течение примерно двух с половиной часов, чтобы достичь плотности соли от 10 до восьмой КОЕ на миллилитр. Затем с помощью спектрофотометра оцените концентрацию культуры. Непосредственно перед тестированием приготовьте инокулюм, состоящий на 68% из бактерий или вирусной суспензии и на 32% из хлорида натрия или почвы.

Закрутите или аккуратно перемешайте. После подготовки добровольцев в соответствии с текстовым протоколом проверьте pH кожи каждого добровольца, поместив зонд pH кожи с плоским концом в перепончатое пространство между указательным и средним пальцами. Убедитесь, что электрод прилегает к коже, и запишите показания pH.

Затем возьмите чашку волонтера обеими руками вместе. Затем осторожно нанесите пипеткой 750 микролитров инокулята на каждую ладонь, чтобы накачать руки. При прокалывании рук добровольцев важно, чтобы инокулюм не пролился.

Напомните волонтерам об этом важно и дайте им возможность потренироваться с водой перед началом процедуры. Попросите добровольцев осторожно потереть руки друг о друга, пока все поверхности ладони не будут закодированы прививкой, при этом подвергая руки как можно меньшему трению. Проинструктируйте добровольцев держать руки неподвижно и подальше от тела еще 30 секунд, чтобы прививка высохла.

Затем вымойте руки одним из способов, описанных в текстовом протоколе. Для мытья рук с мылом используйте 10 миллилитров воды Ultrapure, чтобы намочить руки. Попросите добровольцев намылить руки мылом, а затем потереть руки друг о друга в течение еще 20 секунд.

Ополосните руки добровольца, налив 500 миллилитров воды Ultrapure комнатной температуры через воронку со скоростью расхода 1,5 литра в минуту в большой мешок для сбора проб, и обработайте пробу в течение двух часов. Для всех растворов хлора вылейте 200 миллилитров раствора хлора на руки добровольца через воронку со скоростью потока 1,5 литра в минуту и попросите добровольцев тщательно потереть руки. В качестве еще одного метода мытья рук попросите добровольцев использовать дезинфицирующее средство для рук для мытья рук.

Важно, чтобы все поверхности руки были аккуратно потерты, проинструктируйте участников сосредоточиться на каждой части, ладонях, ногтях, между пальцами, когда они трут, а затем убедитесь, что вся рука была промыта. Для контроля А после прививки не следует мыть руки. Для контроля B используйте только сверхчистую воду комнатной температуры, чтобы выполнить мытье рук через воронку с известной скоростью потока.

После мытья рук немедленно поместите выбранную для тестирования руку каждого добровольца в пакет для образцов, содержащий 75 миллилитров Лювина до запястья. Крепко держите верхнюю часть сумки вокруг запястья. Попросите добровольцев осторожно втереть руку в раствор в течение 30 секунд, стараясь проникнуть между пальцами и под ногти.

Аккуратно массируйте руку снаружи сумки в течение 30 секунд, чтобы убедиться, что вся рука тщательно промыта в Leeuwin, вплоть до запястья. Запечатайте пакет и обработайте его согласно соответствующему сочинению. Прежде чем повторять процесс при каждом методе мытья рук, попросите добровольцев использовать мыло в теплой воде, чтобы тщательно вымыть руки в раковине.

Наконец, используйте 70% этанол для распыления на руки добровольца, пока они не покроются с обеих сторон, и дайте им высохнуть. Для анализа образцов необходимо настроить пламя и фильтрационный коллектор со стерильными фильтрационными воронками и вакуумным соединением. Простерилизуйте щипцы, обмакнув их в этанол и обжигая пламенем.

С помощью щипцов поместите фильтр 0,45 микрона на фильтрационный коллектор сеткой вверх. Затем используйте небольшое количество стерильного PBS для увлажнения фильтра. Поместите воронку на основание и пипетку или вылейте образец прямо на фильтр.

Включайте вакуум до тех пор, пока весь образец не пройдет через мембрану. Затем с помощью стерильного PBS промойте боковые стороны воронки и снова включите пылесос. Далее снимаем воронку, пламенем стерилизуем щипцы и поднимаем фильтр с основания.

Затем аккуратно поместите фильтр на среду в чашку Петри решеткой вверх, следя за тем, чтобы фильтр лежал заподлицо с поверхностью. Переверните пластины и выдерживайте при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов. После инкубации подсчитайте колонии кишечной палочки и запишите данные.

Проводите анализ данных в соответствии с текстовым протоколом. Протокол, описанный в этом видео, был дополнен 18 добровольцами, протестированными с E.Coli и Phi6 для E.Coli без нагрузки на почву, мытье рук с HTH, NaDCC и стабилизированным NaOCl, что привело к значительно большему сокращению количества логов, чем мытье рук только водой. При нагрузке на почву HTH приводил к значительно большему снижению логарифма E.Coli, чем мытье рук только водой с мылом и ABHS.

Существенной разницы между методами для Phi6 без нагрузки на почву не выявлено. Тем не менее, для Phi6 с нагрузкой на почву вода сама по себе приводила к большему снижению логарифма, чем ABHS или стабилизированный NaOCl, а мытье рук с мылом приводило к большему снижению логарифма, чем ABHS, стабилизированный NaOCl и генерируемый NaOCl. HTH также имел большее снижение логарифма, чем ABHS, а стабилизированные NaOCl и NaDCC приводили к большему снижению логарифмического эффекта, чем стабилизированные NaOCl и ABHS.

Как показано на этих графиках, хлор привел к значительно большему логарифмическому снижению содержания E.Coli в воде для полоскания, чем при мытье рук с мылом. Наконец, та же закономерность была обнаружена у Phi6 без нагрузки на почву со всеми растворами хлора, что привело к значительно большему снижению Phi6 в воде для полоскания, чем при мытье рук с мылом. Существенного снижения промывочной воды с Phi6 и нагрузки на почву не наблюдалось.

При попытке выполнить эту процедуру важно помнить, что результаты эффективности для каждого состояния рассчитываются путем сравнения результатов для двух контрольных показателей. Это означает, что очень важно выполнять эти шаги последовательно для каждого варианта мытья рук.