Рассечение поджелудочной железы мыши для гистологического анализа и метаболические профили

Основная цель данной видеостатьи — предоставить подробные визуальные инструкции по препарированию поджелудочной железы мыши. Эти инструкции будут полезны исследователям, изучающим мышиные модели заболеваний поджелудочной железы человека и которым необходимо выделить поджелудочную железу мыши путем диссекции для гистологического анализа или метаболического профилирования. В видеостатье также приводятся подробные инструкции по проведению терминального забора крови методом пункции сердца.

Представлен операционный стол с необходимыми принадлежностями. В их число входят: одна стеклянная банка с крышкой, одна пробирка Falcon объемом 15 mL, один хирургический нож, одна бутылка-дозатор с 70% ethanol, две пенопластовые доски, два пинцета, два шприца объемом 1 mL с иглой 21G, две пробирки Falcon объемом 50 mL, одна центрифужная пробирка, один криопробирка, четыре хирургические салфетки, десять булавок, диспенсер со стерилизующими салфетками и контейнер для острых предметов. Представлен стол для послеоперационного ухода с необходимыми принадлежностями.

В их число входят одни аналитические весы, один четырехлитровый сосуд Дьюара с жидким азотом, широкий низкий сосуд Дьюара, плавающий штатив для микропробирок, одни хирургические ножницы, два пинцета, пять криопробирок и диспенсер со стерильными салфетками. Для проведения эвтаназии мышь сначала помещают в стеклянную банку с марлевой салфеткой, пропитанной несколькими каплями изофлурана, и закрывают крышкой до потери сознания животным, что обычно занимает около одной минуты. Затем мышь извлекают из стеклянной банки и проводят тест на щипок за лапку, чтобы убедиться в отсутствии болевых ощущений у животного.

Если тест на щипок за лапку не удался, мышь возвращают в стеклянную банку и закрывают крышкой до тех пор, пока тест на щипок за лапку не будет проведен успешно. Положите мышь на спину, зафиксируйте конечности мыши на хирургической пенопластовой доске и смочите вентральную сторону мыши 70% ethanol. Зажмите шерсть возле отверстия мочеиспускательного канала пинцетом и слегка потяните вверх.

Сделайте разрез через брюшную полость, начиная от уретрального отверстия, вверх по срединной линии до подбородка. Рядом с начальной точкой первого разреза захватите шерсть с одной стороны и сделайте еще один разрез вниз по диагонали в сторону задней лапы. Повторите аналогичные действия с противоположной стороны.

Найдите сердце для выполнения терминальной пункции сердца. Для этого зажмите грудину пинцетом и сделайте разрез в области диафрагмы. Быстро разрежьте грудную клетку в направлении вверх и удалите вырезанную часть, чтобы обнажить бьющееся сердце.

После обнаружения сердца удалите перикард и выполните терминальную пункцию сердца с помощью шприца. Для оптимального сбора крови используйте поршень иглы, чтобы имитировать насосное действие сердца, и избегайте слишком быстрого забора. Перенесите кровь в центрифужную пробирку, а шприц утилизируйте в контейнер для острых предметов.

После выполнения пункции сердца эвтаназию проводят путем удаления связок, фиксирующих сердце. Найдите желудок в левой части брюшной полости мыши. Поджелудочная железа представляет собой диффузную ткань более светлого цвета, которая прилежит к желудку и двенадцатиперстной кишке, располагается вдоль всего тонкого и толстого кишечника и прикреплена к селезенке.

Аккуратно начните отделять поджелудочную железу от желудка и двенадцатиперстной кишки с помощью пинцета. Продолжайте отделять поджелудочную железу от тонкого кишечника, двигаясь от отделов jejunum и ileum к слепой кишке и толстому кишечнику. Дойдя до слепой кишки, переставьте пинцет и продолжите отделять поджелудочную железу вдоль оставшейся части ободочной кишки в направлении прямой кишки.

На этом этапе удобно вырезать и удалить отдел от желудка до области ободочной кишки, непосредственно предшествующей прямой кишке. Найдите поджелудочную железу и прикрепленную к ней селезенку. Сдвиньте поджелудочную железу в правую сторону мыши.

Перережьте оставшиеся связи между поджелудочной железой и грудной полостью, чтобы полностью отделить поджелудочную железу и прилегающую к ней селезенку. Извлеките поджелудочную железу и разложите ее для осмотра. При необходимости на данном этапе можно удалить и другие органы.

После извлечения образцы переносят в послеоперационную зону. Каждый орган взвешивают и помещают в соответствующий криопробирку. Запишите все обнаруженные отклонения.

После помещения органов в криопробирки поместите их в плавающую стойку для микропробирок, а затем в сосуд Дьюара с жидким азотом. После мгновенного замораживания органы следует хранить при температуре минус 80 °C для длительного хранения. Все использованные инструменты для диссекции необходимо продезинфицировать с помощью стерилизующих салфеток.

Пробирку типа «Falcon», в которую помещена пропитанная изофлураном хирургическая салфетка, следует закрыть крышкой. Хирургическую салфетку на пенопластовой подложке необходимо заменить новой. Части тела мыши, которые не были собраны, следует утилизировать в соответствии с правилами утилизации животных, принятыми в данном учреждении.

Со следующими объектами следует обращаться соответствующим образом. После их надлежащего хранения можно провести множество экспериментов, включая, помимо прочего, флуоресцентную микроскопию, гистологическое исследование с окрашиванием гематоксилином и эозином, иммуногистохимию, масс-спектрометрию и ядерный магнитный резонанс. Поскольку поджелудочная железа является основным органом метаболической активности и выработки инсулина, данная процедура позволяет сохранить её физиологические характеристики.

Путем выделения поджелудочной железы становится возможным проведение дальнейшего анализа образца. Данная процедура позволяет сравнивать и изучать взаимодействия с другими тканями того же организма в тот же промежуток времени.