Роман объект признание тест для расследования обучения и памяти у мышей

Общая цель этого поведенческого анализа — проверить различные аспекты обучения и памяти у мышей. Этот метод может помочь ответить на многочисленные вопросы в области познания грызунов, от основ развития более глубокого понимания определенных аспектов обучения на памяти и мышах, а также на более сложные вопросы, такие как когнитивные нарушения, включая модели заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, до исследования потенциальных когнитивных улучшений. Основным преимуществом ОРТ, является его простота, эффективность и гибкость, а также изучение обучаемости и памяти у мышей.

Демонстрировать эту процедуру будет Андрей Елтый, лаборант нашей лаборатории. Начните с выбора объектов размером с моль, которые могут быть легко различимы животным, но имеют аналогичную степень сложности в таких характеристиках, как текстура, форма или яркость, чтобы свести к минимуму любые потенциальные предпочтения объектов, которые могут повлиять на результаты. Кроме того, чтобы еще больше уменьшить индуцированные предпочтения, убедитесь, что мыши могут забираться на оба объекта или ни на один из них.

Возможность взобраться на объект может повысить интерес к исследованию. Затем, чтобы свести к минимуму стресс от яркого освещения, используйте слабое освещение с центром лабиринта, освещенным около 20 удач. Приучайте мышей к любым новым помещениям для тестирования по крайней мере за час до использования каждый день и поддерживайте температуру и влажность на уровне обычных условий содержания.

Обратите внимание, что мышей следует обрабатывать один-два раза в день в течение как минимум одной минуты в течение одной-двух недель до тестирования. Наконец, для основной арены используйте квадратную камеру из белого или черного непористого пластика, контрастного по цвету мыши. Начните с того, что вытащите мышь из ее домашней клетки и поместите ее в центр открытой пустой арены.

Позвольте вам свободно исследовать арену в течение пяти минут. Как только домашняя клетка опустеет, сохраните ее для использования в качестве клетки для содержания на следующий день. По истечении пяти минут извлеките мышь и поместите ее в клетку для удержания.

Не возвращайте мышь в исходную домашнюю клетку, иначе это может повлиять на поведение оставшихся тестируемых мышей. Затем тщательно очистите аппарат между мышами, используя 70% объема на объем этанола. Далее начните тренировочный этап или Т1, разместив два одинаковых объекта в противоположных квадронах арены.

Например, один в северо-западном углу и один в юго-восточном углу. Закрепите любые слишком легкие предметы к полу с помощью снятия монтажной шпаклевки. Уравновесьте использование каждого набора объектов, а также расположение нового объекта в каждом из четырех углов арены.

Убедитесь, что вы знаете, какая диагональ используется для какого животного, чтобы диагональ в день тренировки имела форму, аналогичную той, которая использовалась в день тестирования для каждой мыши. Через 24 часа после приучения выньте мышь из ее домашней клетки и поместите ее в центр арены, равноудаленную от двух одинаковых объектов, чтобы начать тренировку. Дайте возможность свободному исследованию как минимум на пять минут, если при слиянии линии мышей, о которых известно, что они имеют низкую локомоторную или исследовательскую активность, продлите испытание до 10 минут для всех мышей в когортах.

В конце тренировочного испытания извлеките мышь и поместите ее в клетку для удержания. Как только домашняя клетка опустеет, сохраните ее для использования в качестве клетки для содержания в день тестирования. Обязательно убирайте аппарат и предметы между мышами.

Затем начните фазу тестирования или Т2, разместив знакомый объект, используемый во время тренировки, и один новый объект в противоположных квадронах арены. Используйте те же места, которые вы использовали во время обучения для каждой мыши. В интервале между Т1 и Т2 извлеките мышь из ее домашней клетки и поместите ее в центральную арену, равноудаленную от знакомого объекта и нового объекта.

Дайте свободному исследованию в течение 10 минут. Наконец, в конце испытательного испытания извлеките мышь и поместите ее в клетку для удержания. Для анализа исследование определяется как нос, направленный в сторону объекта в пределах двух-трех сантиметров с активным вибрационным разверткой.

Однако, если мышь находится на объекте, это не засчитывается во время исследования. Для Т1 и Т2 оцените первые пять минут и рассчитайте общее время исследования обоих объектов для каждого сеанса. Если мышь не достигает минимального времени исследования в 20 секунд для обоих объектов, продолжайте отсчет по истечении пяти минут, пока общее время исследования не превысит 20 секунд.

Увеличьте время Т1 и Т2 до 10 минут для линий мышей с низкой изученностью и не удовлетворяющих этому минимальному критерию на пять минут, как это наблюдалось во время пилотных испытаний. Наконец, если мыши не достигают 20-секундного минимума исследования для обоих объектов для Т1 или Т2 через 10 минут, исключите их из анализа, поскольку нельзя подтвердить, что животное потратило достаточно времени на исследование, чтобы учиться и различать. Задача на распознавание объектов является эффективным и гибким методом изучения обучения и памяти у мышей, в котором ингибиторы фосфодиэстеразы 2 улучшаются во время выполнения этой задачи.

По сравнению с транспортным средством, введение ингибиторов ФДЭ2 в отсеках 60-7550 или ND7001 значительно улучшало память в зависимости от дозы, если давать его за 30 минут до тренировки. При введении в разные моменты времени, относительно тренировки и тестирования, ингибитор ФДЭ2 BAY 60-7550 значительно улучшал его память при приеме за 30 минут до тренировки, а также сразу после тренировки и за 30 минут до вспоминания. После освоения этой техники ее можно завершить за два-три дня, если она выполнена правильно.

При попытке выполнить эту процедуру важно помнить о проведении пилотных исследований и тщательно выбирать интервал от Т1 до Т2, так как выбор неправильного интервала может привести к неправильному влиянию. Следуя этой процедуре, можно использовать другие методы, такие как лабиринт амбара, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как различия в обучении, которые не могут быть полностью решены с помощью тестов на распознавание объектов. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области обучения и памяти к изучению основных биологических механизмов памяти, а также к изучению потенциальных механизмов различных когнитивных дефицитов у грызунов.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как настроить и спланировать подходящий эксперимент с использованием теста на распознавание объектов, включая проведение пилотных исследований, выбор объектов и выбор подходящего интервала от T1 до T2. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.