Создание грызунов модели аневризмы брюшной аорты, блокируя Adventitial Vasa свое перфузии

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы вызвать гипоксию аортальной ткани для инициирования аневризмы брюшной аорты или АБА с прогрессирующим расширением аорты у крыс. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в период исследования аневризм аорты о механизмах, ответственных за развитие и разрыв аневризм брюшной аорты. Основное преимущество этого метода заключается в том, что морфологические и патологические характеристики модели между крысами аналогичны тем, которые наблюдаются при аневризмах брюшной аорты человека.

Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы исследовали другую возможность существования ААА у человека. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку хирургию индукции гипоксии трудно освоить только с помощью инструкций, основанных на тексте. Демонстрировать процедуру будут Тацуро Ята, наш сосудистый хирург, и Хирона Куго, оба в прошлом врачи нашей лаборатории.

После подтверждения соответствующего уровня седативного эффекта путем щипкования пальцев ног используйте электрическую бритву для бритья волос на животе крысы весом от 300 до 400 мг, после чего следует последовательная дезинфекция открытой кожи спиртом и раствором повидон-йода. Поместите крысу на операционный стол в лежачем положении и нанесите мазь на глаза животного. Затем с помощью ножниц сделайте вентральный разрез по средней линии живота и используйте стерильную марлю и ретрактор для раны, чтобы упаковать содержимое брюшной полости в брюшную полость.

Чтобы отделить аорту от периваскулярной ткани, с помощью пинцета аккуратно подхватите и оторвите забрюшинное пространство, обнажив стенку аорты. Затем отшелушите инфраренальную аорту в забрюшинном пространстве от левой почечной вены до разветвления из периваскулярной ткани. Используйте шелковый шов 5-0 для перевязки сосудов, ответвляющихся от брюшной аорты, чтобы блокировать кровоснабжение в точке, удаленной от аорты, которая не сужает просвет аорты.

Чтобы блокировать кровоток в аорте, поместите сосудистые зажимы чуть ниже почечной артерии и чуть выше разветвления аорты. Аналогично созданию точечного кровоизлияния на поверхности стенки аорты, вставьте микроножницы на расстоянии 5 мм от аортального зажима, прилегающего к ветвям почечной артерии, чтобы разрезать переднюю стенку аорты, и с помощью иглы 24-го калибра для неглубокого введения полиуретанового катетера через разрез. Подложите к полиуретану шприц, наполненный водой объемом 1 мл, и смойте остатки крови из аорты.

Далее отрежьте новый полиуретановый катетер длиной 10 мм и полностью вставьте этот катетер в разрез просвета аорты. Переместите среднюю точку катетера в соответствии с расположением разреза и используйте 8-0 Монофиламентный шов для закрытия разреза прерывистым швом. Перевязать брюшную аорту хирургическим узлом с помощью шелкового шовного материала 5-0 и полиуретанового катетера.

Когда катетер надежно закреплен, удалите сосудистые зажимы в месте бифуркации аорты и ниже почечной артерии, чтобы восстановить антеградный кровоток и подтвердить наличие грубой пульсации аорты. После снятия марли используйте полипропиленовый шов 4-0, чтобы плотно закрыть разрез брюшной полости в два слоя, чтобы предотвратить выпячивание органа. Затем нанесите местный лидокаин на разрез брюшной полости и положите крысу на грелку с контролем до полного выздоровления.

После операции наблюдайте за развитием расширенной аорты во времени на ультразвуковой эхограмме, измеряя максимальный диаметр от внутреннего края до внешнего края брюшной аорты в соответствии со стандартными протоколами. Через 28 дней после операции с помощью скальпеля вскройте брюшную полость с новым вентральным разрезом и с помощью ножниц вскрывайте аневризму. Поместите собранные аорты в 10% нейтрально буферизованный формалин на 24-48 часов.

После встраивания аорты в парафин и получения срезов ткани аорты, согласно стандартным протоколам, неподвижные срезы парафина гидратируют в дистиллированной воде в течение 10 минут с последующей инкубацией в гематоксилине Верхуффа. Ржавление и коррозия могут быть идентифицированы с помощью гематоксилина Верхуффа и лабораторной работы ван Гизона. Таким образом, свежесть и время инкубации этих тканевых красителей важны для архивирования и необязательного окрашивания.

Через 25 минут промойте пряди тремя 1-минутными промывками в воде, а затем окуните от 10 до 30 раз в дифференцирующий раствор. Снова трижды промойте срезы в воде и поместите образцы в 5% тиосульфат натрия на одну минуту. После еще одной промывки водой погрузите образцы в раствор ван Гисона на пять минут.

Затем обезвоживайте ткани в течение 30-секундного восходящего погружения этанола с последующим выведением из организма с помощью двух 5-минутных инкубаций ксилола. Затем используйте резонансную монтажную среду, чтобы покрыть секции защитными стеклами соответствующего размера. На этих изображениях показана репрезентативная аневризма брюшной аорты через 28 дней после установки катетера.

Измерение верхнего и нижнего концов аорты с помощью трансабдоминального ультразвука выявляет нормальный диаметр без дилатации сразу после установки катетера, который увеличивается до максимального размера примерно через 14 дней после установки и остается неизменным или незначительно увеличивается до конца экспериментального периода. Гистопатологический анализ аневризмы на 28-й день показывает заметную деградацию эластических волокон по сравнению с тем, что наблюдалось на нулевой день. После освоения этой техники она может быть выполнена примерно за один час, если она выполнена правильно.

После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как анализ in vitro, чтобы ответить на дополнительные вопросы об отдельных серийных функциях. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области аневризмы брюшной аорты для изучения заболевания в конкретных демографических группах пациентов. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как вызвать гипоксию аортальной ткани для инициации аневризм брюшной аорты с прогрессирующим расширением аорты у крыс.

Не забывайте, что работа с хирургическими инструментами может быть чрезвычайно опасной, и что при выполнении этой процедуры всегда следует принимать меры предосторожности против травм и инфекций.