Визуализация и живой изображений Олигодендроциты органелл в Organotypic мозга фрагментов с помощью аденоассоциированный вирус и конфокальная микроскопия

Общая цель этой вирусной трансдукции и покадровой записи состоит в том, чтобы визуализировать движение митохондрий олигодендроцитов в органотипических срезах мозга. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области олигодендроцитов. Например, как олигодендроциты и их органеллы реагируют на изменения в местной окружающей среде. Основное преимущество этого метода заключается в том, что он дает подробную информацию о структуре олигодендроцитов и динамике органелл в препарате, где присутствуют все различные клетки мозга, а олигодендроциты производят компактный миелин. Трансдуцировать олигодендроциты в культурах среза на седьмой день in vitro. Сначала набираем 1,3 микролитра разведенного AAV на ломтик. Убедившись, что наконечник пипетки снаружи сухой, поднесите пипетку над корой как можно ближе, не касаясь среза кончиком пипетки, и медленно вытолкните раствор из пипетки. Когда раствор коснется среза, переместите наконечник пипетки над корой головного мозга, чтобы распределить раствор по всей области коры головного мозга. После того, как все ломтики в одной чашке будут преобразованы, верните чашку в инкубатор, а затем повторите процесс на других чашках. Исследуйте срезы на предмет экспрессии флуоресцентных маркеров и визуализируйте срезы, когда уровни экспрессии флуоресцентных маркеров достаточны и срезы выглядят здоровыми. Начните установку ванны для визуализации с помощью пластилина для прикрепления игл шприца, согнутых под углом 45